浙江大学医学院浙江省医学分子生物学重点研究实验室
- 作品数：11 被引量：72H指数：3
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- NMDA受体亚单位蛋白在大鼠戊四氮慢性化学点燃癫痫中的表达变化
- 2002年
- 朱丽君陈忠等
- 关键词：NMDA受体癫痫戊四氮动物实验
- 人细胞色素P450 1A1与谷胱甘肽S-转移酶的融合蛋白及其抗体的制备被引量：5
- 2000年
- 采用融合蛋白技术原核表达 CYP1 A1 (第 2 4 1- 381个氨基酸 )与谷胱甘肽 S-转移酶 (GST)的融合蛋白作为抗原 ,用于制备 CYP1 A1多克隆抗体 .根据正反重组质粒 p GEX/ 1 A1表达的融合蛋白大小不同的原理 ,直接表达筛选得到正向重组质粒p GEX/ 1 A1 .通过优化表达条件 ,提高了目的蛋白的表达水平 .包涵体蛋白经制备型聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)分离 ,获含纯化融合蛋白 GST- 1 A1的 PAGE凝胶 .直接用含 GST- 1 A1的凝胶悬液免疫 BALB/ c小鼠 ,自腹水中获取 CYP1 A1多克隆抗体 (1 A1 p Ab) . 1 A1 p Ab用切胶纯化的融合蛋白GST- 2 B6交叉吸收 ,蛋白 A- Sepharose亲和层析柱来纯化 .用切胶纯化的融合蛋白 GST- 1 A1及 GST-2 B6的免疫印迹反应初步鉴定 1 A1 p Ab的特异性 .纯化的 1 A1 p Ab对融合蛋白 GST- 1 A1反应特异性较强 ,但仍对 GST- 2 B6有弱交叉反应 .
- 林筱洁罗建红宋英朱丽君余应年
- 关键词：细胞色素P450抗体融合蛋白谷胱甘肽S-转移酶
- 本室克隆的人细胞色素P450 1A1 cDNA序列特点
- 2001年
- 诸葛坚钱羽力谢海洋余应年
- 关键词：CDNA序列克隆
- 突变形成的原核与原核-真核检测系统现状被引量：3
- 2003年
- 原核细胞检测系统在检测突变形成的过程中 ,以其简便、快捷、灵敏、价格相对低廉等特点 ,起着不可替代的作用 ,目前较为常用的方法有 :回复突变试验、修复试验、SOS相关试验等 ;supFtRNA转运系统是穿梭于原核与真核细胞之间 ,当属原核_真核检测系统 ;现就其中回复突变试验和supFtRNA转运系统及其进展作一综述。
- 王宏蔡朱男余应年
- 关键词：化学诱变剂回复突变SOS
- 环氧合酶抑制剂NS-398增强放射诱导的肝癌细胞凋亡被引量：3
- 2009年
- 目的:探讨环氧合酶-2(COX-2)选择性抑制剂NS-398对放射诱导的人肝癌细胞HepG2凋亡的影响及可能作用机制。方法:应用MTT法检测NS-398对细胞的抑制率;透射电子显微镜观察细胞凋亡的形态学变化,流式细胞术(FCM)定量检测细胞凋亡;实时荧光定量PCR检测凋亡相关基因bcl-2、bax及caspase-3 mRNA表达;Western blotting检测Bc1-2、Bax蛋白表达;比色法分析caspase-3酶活性变化。结果:NS-398对HepG2细胞的生长抑制作用呈时间与剂量依赖性;电镜下处理组细胞呈现典型的凋亡形态学变化,NS-398显著增加放射诱导的细胞凋亡,上调bax mRNA、Bax蛋白及caspase-3 mRNA表达,并增强caspase-3酶活性,而Bcl-2表达无明显变化(P>0.05)。结论:NS-398能增加放射诱导的HepG2细胞凋亡,其机制可能与上调Bax、caspase-3表达,上升Bax/Bcl-2比例,激活线粒体凋亡通路,活化caspase-3,最终诱导细胞凋亡相关。
- 竺鑫丽胡立宽周林福付雷张帅许曼
- 关键词：肝肿瘤细胞凋亡HEPG2细胞
- 新型荧光定量PCR检测孕妇生殖道解脲脲原体方法的建立
- 2006年
- 目的 探讨建立自身淬灭探针荧光定量PCR方法检测解脲脲屏体（Uu）的可行性及价值。方法 根据Uu UreA基因序列设计合成引物和自身淬灭引物，采用基因克隆技术，将UreA基因片段插入到载体pMD18-T，以此作为标准品。优化PCR条件，建立以自身淬灭引物技术为平台的实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）方法，并对所建立的方法进行初步方法学评价。结果 成功构建了重组质粒pMD18-T-UreA；建立了以自身淬灭探针技术为基础的实时荧光定量PCR方法，其线性检测范围为10^1～10^9copies／μl；灵敏度为10copies／μl；重复性实验批内CV为2．35％，批间CV为3．68％，天间CV为4．92％；特异性好；通过初步临床应用发现，所建立的FQ-PCR方法与经典的培养方法相比，不仅能实时监测反应进程、绝对定量和快速检测，且检出率显著高于培养方法。结论自身淬灭探针荧光定量PCR方法检测Uu具有快捷、敏感、廉价等优点，可在临床诊断中应用。
- 王文君陈海祥
- 关键词：荧光定量PCR解脲脲原体
- 一种新的人细胞色素P450 2A6 cDNA克隆被引量：2
- 2000年
- 目的 :克隆人细胞色素P45 0 2A6cDNA。方法 :用逆转录 -PCR和DNA重组技术 ,从人肝组织中扩增人细胞色素P45 0 2A6基因的cDNA ,并将其连接到pBluescript载体上 ,对CYP2A6cDNA进行全序列测定。结果 :所克隆的cDNA与Yamano等发表的CYP2A6cDNA序列相比 ,在编码区有两个变异 ,即codon 8CTG→TTG ,编码的氨基酸不变 ,为亮氨酸。codon479GGC(甘氨酸 )→GTC(缬氨酸 ) ,其余均相同。而在其 3′端非编码区变异很多。与Fernandez -Salguero等报道的CYP2A7序列相比 ,其 5′端虽与所克隆的CYP2A6有较多差异 ,但其codon479也是GTC(缬氨酸 ) ,在 3′端非编码区仅略有差异。而所克隆的CYP2A6cDNA与Yamano等报道的CYP2A7序列相比 ,3′端非编码区至所设PCR引物止 ,所克隆的基因序列完全相同 ,而在编码区却差异较多。结论 :本实验室克隆的CYP2A6cDNA是一种新的CYP2A6cDNA序列 。
- 诸葛坚钱羽力谢海洋余应年
- 关键词：细胞色素P450
- 细胞色素P4501A2的转基因细胞及其应用
- 2000年
- 朱长火昆诸葛坚余应年
- 关键词：细胞色素P4501A2转基因细胞
- 微核与微核试验在遗传毒理学中的应用被引量：54
- 2000年
- 王爽诸葛坚余应年
- 关键词：微核微核试验遗传毒理学
- 一个新的人细胞色素P450 2B6 cDNA 序列被引量：1
- 2000年
- 诸葛坚钱羽力谢海洋余应年
- 关键词：细胞色素P450CDNA序列
