南京医科大学基础医学院微生物学系与免疫学系
- 作品数：312 被引量：891H指数：13
- 相关作者：姚堃刘玉周锋曾怡吴宜琴更多>>
- 相关机构：东南大学附属中大医院南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫控制重点开放实验室南京农业大学动物医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省自然科学基金南京医科大学科技发展基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学农业科学更多>>
- 超声介导SonoVue微泡破裂促进报告基因在肝脏中表达的实验研究被引量：3
- 2006年
- 目的:探讨超声介导SonoVue微泡破裂法促进外源基因在肝脏中表达的作用,评估其转染效率、安全性。方法:经SD大鼠门静脉置管输入SonoVue微泡建立动物模型,以虫荧光素酶基因为报告基因,观察不同浓度的微泡促进虫荧光素酶基因在肝脏中的表达强度与持续时间,实验结束后采下腔静脉血检测肝肾功能并取肝、肾组织常规HE染色行组织学检查。结果:随着微泡浓度的增加,虫荧光素酶基因表达逐渐增加,在微泡浓度为100%(V/V)时,转染效率最高,持续到21天仍有表达。转染前后的肝肾功能(AST、ALT、ALB、BUN、Cr)无明显变化,HE切片未发现肝肾组织结构的改变。结论:超声介导微泡破裂法能有效地促进外源基因在肝脏中的表达,为肝脏疾病的基因治疗提供了新的途径。
- 王建华史京萍沈历宗丁强卢春林红军吴文溪
- 关键词：虫荧光素酶基因表达
- 人类系统性红斑狼疮血清对内皮(逆)穿越模型中树突状细胞表型成熟的影响被引量：9
- 2005年
- 目的:研究人类系统性红斑狼疮(systemiclupuserythematosus,SLE)血清对正常人单核细胞(monocyte,Mo)分化形成的树突状细胞(dendriticcell,DC)的表型成熟的影响。方法:分离正常人外周血单个核细胞(PBMC),加入内皮细胞穿越模型中,分别以正常人血清和SLE血清加入培养体系中,36h后收集2次穿越内皮单层得到的,经形态学鉴定的DC细胞,流式细胞术测DC的CD80、CD86、HLA鄄DR的表达情况。结果:SLE血清诱导的DC其CD80的表达水平明显低于正常人血清刺激组,而二者均高表达CD86、HLA鄄DR。结论:DC的表型成熟和血清环境有一定关系。
- 张江全季晓辉张明顺杨晓帆王慧娟顾镭王书奎
- 关键词：红斑狼疮树突状细胞单核细胞血清
- 临床专业“5+3”一体化医学生科研思维和能力的培养与思考被引量：14
- 2019年
- 临床医学专业“5+3”一体化是我国培养卓越医生的一种新模式。鉴于医生在诊治疾病时,需要应用逻辑思维与推理,故“5+3”临床专业医学生的培养环节中,增加科研思维与实践的训练,提高其解决问题的能力极为重要。作者结合自身课题组带教“5+3”临床医学生的经验,介绍了在基础医学学习阶段对这些本科生进行科研思维和科研能力训练的方法,同时还对目前培养环节中存在的一些问题进行了分析和思考。
- 王迎伟邱文赵聃张婧卢燕来
- 关键词：医学生
- EB病毒LMP2A特异性CTL的体外诱导及分析被引量：2
- 2004年
- 用EBV LMP2A重组痘苗病毒 (rVV LMP2A )转染人树突状细胞 (DC ) ,转染后的DC分别在第 1、 7、 14天刺激相同MHC背景的T细胞 ,在IL 2作用下诱导LMP2A特异性CTL。用LDH释放法检测CTL杀伤活性 ;流式细胞术 (FACS )检测CTL诱导分化过程中CD3+ 、CD4 + 、CD8+ 、CD5 6 + 等细胞的分群变化 ;RT PCR检测细胞分化过程中FasLmRNA表达 ;生物活性法检测功能性细胞因子IFN γ的分泌。结果显示本法诱导的CTL对靶细胞有特异性杀伤活性 ,第 2次和第 3次DC刺激后杀伤活性有所上升 ;在CTL诱导分化的第 7、 14、 2 1天细胞分群以CD4 + 、CD8+ 细胞为主 ;RT PCR证实所诱导的细胞内有FasLmRNA的表达 ;随细胞培养天数的增加IFN γ分泌增加 ,在第 14天达到较高水平。研究表明重组痘苗病毒载体rVV LMP2A转染的DC刺激T细胞可诱导出EBV LMP2A特异性CTL。
- 姚堃许继军丁传林周锋谢芳艺
- 关键词：痘苗病毒载体EB病毒细胞毒性T细胞
- SARS-CoV N基因重组DNA疫苗和腺病毒疫苗在BALB／c小鼠体内诱导N蛋白特异的免疫应答的初步研究
- 严重的急性呼吸道综合征(severe acute respiratory syndrom,SARS)是一种传染性极强的呼吸系统疾病, 2002年11月至2003年7月在我国内地和世界上30多个国家和地区出现流行,引起全世...
- 马春玲姚堃周锋徐建
- 文献传递
- KSHV vFLIP在血管内皮细胞中的表达及其功能验证被引量：1
- 2014年
- 目的:构建含卡波氏肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus,KSHV)编码的病毒FLICE抑制蛋白(viral FLICE inhibitory protein,vFLIP)基因的重组慢病毒表达载体,获得稳定表达vFLIP的人脐静脉内皮细胞株(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),并检测vFLIP在HUVECs中活化NF-κB信号通路的能力。方法:以真核表达质粒pEF-vFLIP为模板扩增vFLIP基因,插入至慢病毒载体pHAGE-CMV-MCS-IZs-Green中构建重组质粒pHAGE-vFLIP。利用脂质体将其与包装质粒psPAX2和包膜质粒pMD2.G共转染293 T细胞,收集过滤后的培养上清获得慢病毒悬液。利用梯度稀释法测定病毒滴度后,以一定感染复数的慢病毒感染HUVECs,通过蛋白质印迹法检测vFLIP的表达。经绿色荧光蛋白(GFP)流式分选以及蛋白质印迹法验证获得稳定表达vFLIP的HUVECs。最后,通过虫荧光素酶报告实验检测NF-κB的活性,免疫荧光染色检测NF-κB亚基p65的细胞定位,蛋白质印迹法检测IκBα蛋白的表达来评价稳定表达vFLIP蛋白的HUVECs功能。结果:核酸序列测定证实含vFLIP基因的慢病毒表达载体已构建成功。重组慢病毒感染HUVECs后可检测到vFLIP的表达。通过流式分选获得了稳定表达vFLIP的HUVECs细胞,并且能通过抑制IκBα的降解,阻碍p65入核来活化NF-κB,从而激活经典NF-κB信号通路。结论:成功包装了含KSHV vFLIP基因的重组慢病毒,并获得具有激活NF-κB信号通路功能、稳定表达vFLIP的HUVECs株。
- 金镠洋严沁卢春
- 关键词：慢病毒卡波氏肉瘤人脐静脉内皮细胞核因子-ΚB
- 乳酸杆菌对LPS诱导的THP-1细胞炎症性细胞因子释放的调节作用被引量：6
- 2011年
- 目的:探讨副干酪乳酸杆菌(Lactobacillus paracasei,L.para)与嗜酸性乳酸杆菌(Lactobacillus acidophilus,L.acid)对脂多糖(LPS)诱导THP-1细胞分泌肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-12 p40、转化生长因子(TGF)-β的调节作用。方法:先将THP-1细胞在佛波酯(PMA)的刺激作用下活化、分化为巨噬细胞样细胞,再进行LPS诱生炎性细胞因子实验,实验分为空白对照组、LPS处理组、单独L.para处理组、L.para与LPS共处理组、单独L.acid处理组及L.acid与LPS共处理组。以RT-PCR法检测THP-1细胞TNF-αmRNA水平的表达;以ELISA法检测细胞培养上清中TNF-α、IL-12 p40和TGF-β水平的变化;以Western blot方法检测胞内未磷酸化及磷酸化IκB-α蛋白水平的表达;细胞免疫荧光技术观察NF-κB p65的亚细胞定位,TransAM核蛋白定量分析法检测THP-1细胞核内NF-κB(p65/p50)的水平。结果:①LPS能显著刺激PMA诱导分化的THP-1细胞分泌炎性细胞因子TNF-α、IL-12 p40和TGF-β;乳酸杆菌L.para及L.acid单独作用时也能诱导细胞因子TNF-α和IL-12 p40的产生,但L.para诱导的水平较低,而L.acid诱导的水平与LPS相似,两种乳酸杆菌对TGF-β的诱导作用则均显著高于LPS;而当两菌分别与LPS共同作用于PMA诱导分化的THP-1细胞时,都能显著抑制LPS刺激细胞诱生的TNF-α和IL-12 p40,并以L.para的抑制作用更明显,但两种细菌均对TGF-β没有抑制作用,反而进一步促进其分泌。②与结果①相平行,LPS、L.para及L.acid单独作用时,均能使PMA诱导分化的THP-1细胞胞核内磷酸化IκB-α的水平增高、非磷酸化IκB-α水平降低,核内NF-κB(p65/p50)的水平增高,但L.para的作用相对较弱;而当L.para或L.acid与LPS共同作用时则显著抑制LPS刺激所诱导的IκB-α的磷酸化及NF-κB的核转位作用。结论:乳酸杆菌L.para、L.acid分别与LPS共同作用时,均能通过抑制LPS刺激细胞所诱生的炎性细胞因子TNF-α、IL-12 p40的水平而发挥炎症调节作�
- 徐栋花孙可一季晓辉
- 关键词：乳酸杆菌THP-1细胞炎性细胞因子
- SARS病毒M蛋白编码基因在大肠杆菌中的克隆与表达被引量：4
- 2004年
- 目的:克隆SARS冠状病毒膜蛋白M胞外区编码序列,并将其置于大肠杆菌作融合表达。方法:从GenBank获得SARS病毒BJ01株膜蛋白M编码基因序列,人工合成其氨基端129-base-pair(bp)双向单链DNA序列,在5′和3′端分别引入BamH I、Xho I酶切位点,退火后形成双链DNA,常规法将其克隆到原核表达载体pGEX-6p-1中,构建含M蛋白编码基因的重组原核表达质粒。重组质粒经酶切鉴定,核酸序列测定和分析后转化大肠杆菌(E.coli)BL21感受态细胞,以异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合蛋白。结果:核酸序列测定与分析的结果表明,克隆的129 bp基因序列与基因数据库中所登记的BJ01毒株序列呈现100％同源性。IPTG诱导后的菌体,经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE),显示有一个大小为30.1 ku的融合表达蛋白产生。结论:M蛋白氨基端胞外区129 bp编码基因在E.coli中获得正确表达。
- 钱超姚堃卢春贾雪梅曾怡黄丽姜平
- 关键词：SARS冠状病毒M蛋白原核表达
- 逆转录病毒载体介导反义K-ras基因治疗胰腺癌的实验研究被引量：4
- 2004年
- 目的:分离及克隆胰腺癌细胞基因组中K-ras基因片段,构建含反义K-ras癌基因逆转录病毒载体并探讨其对胰腺癌细胞增生、凋亡的影响及可能的分子机制. 方法:设计2对PCR引物,分别在上下游引物中引进BamHI 和EcoRI位点,以胰腺癌细胞株BxPC-3、PC-3基因组DNA为模板扩增K-ras基因外显子1、4及侧翼序列,将目的基因克隆入逆转录病毒载体pLXSN中,构建重组质粒,经PT-67细胞包装后获得重组逆转录病毒.将该重组逆转录病毒转染上述细胞,经G418筛选获得稳定细胞,应用MTT、流式细胞仪和免疫组化法分别研究其增生、凋亡和对胰腺癌p21蛋白表达;建立胰腺癌裸鼠移植瘤模型,观察反义K-ras基因体内治疗效果. 结果:成功构建含反义K-ras基因的重组逆转录病毒载体.反义K-ras基因抑制胰腺癌细胞增生,诱导细胞凋亡、下调K-rasmRNA和P21蛋白表达,并抑制裸鼠胰腺癌移植瘤的生长. 结论:反义K-ras基因可使胰腺癌细胞增生受到抑制,并可诱导细胞凋亡和下调K-rasmRNA和P21蛋白表达.
- 蒋奎荣刘训良苗毅卢春戴存才徐泽宽钱祝银
- 关键词：逆转录病毒载体介导胰腺癌
- 大鼠激活转录因子3单克隆抗体的制备和鉴定
- 2011年
- 目的制备特异性识别大鼠激活转录因子3(ATF3)的单克隆抗体(mAb)。方法根据软件预测的结果合成偶联有匙孔绒血蓝蛋白(key holeli mpet hemocyanin,KLH)的大鼠ATF3第168-181位氨基酸多肽。随后免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术制备抗大鼠ATF3的mAb。采用快速定性试纸法鉴定该单克隆抗体的亚型和亚类;通过ELISA、Western blot和免疫组织化学法鉴定单克隆抗体的特性。结果获得一株可稳定分泌抗大鼠ATF3 mAb的杂交瘤细胞,其分泌的ATF3单抗的亚型是IgG1,轻链为κ链。Western blot结果显示,该单抗能够特异性识别大鼠细胞内表达的ATF3蛋白。免疫组织化学检测结果表明,在Thy-1肾炎(Thy-1N)大鼠肾细胞胞质及细胞核内均有ATF3表达,但细胞核内的表达量较为显著。结论成功制备了一株抗大鼠ATF3的mAb,为进一步研究ATF3的生物学功能提供了可用的实验材料。
- 夏梅任琎蒋青桃李妍唐小军邱文赵聃王迎伟
- 关键词：单克隆抗体杂交瘤细胞WESTERNBLOTTHY-1肾炎
