四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室
- 作品数：144 被引量：344H指数：8
- 相关作者：杨远裴德翠王红仁左斌姚锋更多>>
- 相关机构：成都中医药大学医学技术学院中国科学院成都有机化学研究所西南民族大学生命科学与技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金美国中华医学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学文化科学更多>>
- CTS-Fe_3O_4介导丙型肝炎病毒多表位基因疫苗的研究
- 2011年
- 目的研发能诱导有效免疫应答的丙型肝炎病毒(HCV)基因疫苗候选者及探索磁性纳米材料作为基因载体的应用前景。方法选择5个HCV保守性T/B细胞识别的抗原表位基因,克隆入pcDNA3.1(+),鉴定重组质粒,测定其细胞水平的表达以及在小鼠体内诱导的免疫反应。同时合成壳聚糖(CTS)修饰的Fe3O4磁性纳米微粒(CTS-Fe3O4),采用MTT法检测对人胚肾细胞株HEK-293和小鼠成纤维细胞株3T3的细胞毒性作用,研究在外加磁场作用下,磁性材料作为基因投递系统的应用。结果成功构建了HCV多表位基因疫苗pcDNA3.1(+)-MA,RT-PCR和间接免疫荧光实验证实了重组质粒在细胞内的表达,疫苗中的B表位能被81%HCV阳性血清样本所识别,磁性材料浓度在1mmol/L内无细胞毒性。小鼠体内免疫实验初步显示出pcDNA3.1(+-)MA能有效诱导体液和细胞免疫应答反应,并且磁性纳米材料介导的免疫实验组诱导的免疫应答反应更强(P<0.05)。结论本研究构建的HCV多表位基因疫苗可成为有前景的HCV候选疫苗之一。壳聚糖修饰的Fe3O4纳米材料可以作为一种优良的基因靶向投递载体,并有免疫佐剂的作用。
- 杨远邝玉袁敦曹丽丽王保宁李明远张中伟
- 关键词：丙型肝炎病毒多表位基因磁性纳米材料壳聚糖
- 亚甲蓝光化学法灭活病毒的研究——抗坏血酸对血浆凝血因子的保护作用被引量：4
- 2004年
- 目的 探讨抗坏血酸对亚甲蓝光化学法处理血浆时指示病毒灭活的效果 ,以及对部分凝血因子的保护作用。方法 采用CPE法评价病毒的灭活效果 ,用Clauss法测定纤维蛋白原的含量和一期法判定FⅧ :C的凝血活性。结果 在单采人血浆中加入 1μmol·L-1亚甲蓝和 2 4 0 μmol·L-1抗坏血酸 ,再给以 4 0 0 0 0lx荧光强度照射 6 0min ,VSV滴度下降 >8lgTCID50 ·ml-1,并且纤维蛋白原和FⅧ :C的回收率分别为 83.5 5 %和 81.6 7% ,比常规亚甲蓝 /荧光光化学法显著提高 (P <0 .0 1) ,而且凝血酶原时间延长值在正常允许值范围 ,活化部分凝血酶时间延长值也接近正常允许值范围。加入抗坏血酸和色氨酸可灭活病毒 ,而甘露醇不能。结论 在亚甲蓝光化学法中 ,抗坏血酸不影响病毒的灭活 ,而且对部分凝血因子有保护作用。因此 ,抗坏血酸可以有效提高单份冷冻新鲜人血浆的质量。
- 蒋仁举贾文祥王泓陈琪曾蔚张再蓉马巨辉
- 关键词：亚甲蓝光化学法灭活病毒抗坏血酸血浆凝血因子
- 人源抗乳腺癌单链抗体ScFv的基因克隆
- 2003年
- 乳腺癌的发病率在我国呈上升趋势.鼠源性单克隆抗体(mAb)抗不适用于人体, 而人源化mAb则在乳腺癌的诊断、靶向治疗中具有较高的应用价值[1,2].为此,我们从乳腺癌细胞体外致敏乳腺癌患者外周血中分离的淋巴细胞, 利用噬菌体抗体库技术克隆了人抗体基因, 以期获得抗乳腺癌的人源化单链抗体.
- 杨春贾文祥邱岳郑崛村李学儒
- 关键词：乳腺癌单链抗体PCR
- 重组小鼠β-防御素2的纯化及其体外抗NTHi活性的研究
- 目的:在原核系统中表达并纯化重组MBD2融合蛋白,并对其体外抗NTHi的活性进行初步研究。方法:利用本实验室已经构建好的原核表达质粒PET32-mBD2,在优化的表达条件下诱导重组质粒高效表达;采用亲和层析法对目的蛋白进...
- 姚锋邵京京李明远陆顺顺孟俊杰桑云璐李婉宜
- 文献传递
- 甲型流感病毒M_2蛋白胞外功能区真核表达质粒的构建和表达分析被引量：1
- 2006年
- 目的构建流感病毒M2蛋白胞外功能区(M2e)真核表达质粒,并研究其在真核细胞中的表达。方法根据Genbank(NCBI ISDN13425)中查得的M2e编码序列,设计并合成两条DNA单链;在两条链两端添加碱基构成酶切位点的粘性末端,退火后使之互补结合成为M2e编码序列;然后将其插入到经双酶切的真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)-M2e;经酶切和DNA测序鉴定后,转染HEK293细胞,用免疫荧光技术检测pcD-NA3.1(+)-M2e在HEK293细胞的表达,并通过MTT检测刺激淋巴细胞增殖及M2e蛋白的分泌情况。结果合成的寡核苷酸链经退火形成双链,插入酶切的真核表达载体后构建成pcDNA3.1(+)-M2e。免疫荧光技术证实该质粒表达的M2e蛋白定位于细胞膜上,转染细胞的培养上清经MTT实验证实能刺激淋巴细胞增殖,表明表达的M2e蛋白也可分泌至细胞外。结论成功构建了流感病毒M2e的真核表达质粒pcDNA3.1(+)-M2e,表达的M2e蛋白不仅存在于细胞膜上,也可分泌到细胞外。流感病毒M2e基因真核表达质粒的构建及成功表达为流感病毒基因工程疫苗、通用疫苗和核酸疫苗的研究奠定了基础。
- 王丰平李明远李燕张卫东李虹蒋忠华李婉宜
- 关键词：甲型流感病毒真核表达载体免疫荧光技术
- HBV干扰DNA损伤应答ATR通路机制的初步研究
- 目的探索HBV对ATR信号通路沉默效应中的分子机制,寻找HBV与DNA损伤应答信号通路之间的关键相互作用,从而为抗HBV相关性肝癌的治疗提供新的靶点。方法研究采用Western blot和免疫荧光(IF)技术,BrdU染...
- 李明远左斌王欢任来峰李莎郭连娣刘聪
- 关键词：乙肝病毒HBX细胞周期
- 成都市人乳头瘤病毒16型感染与宫颈病变的相关性分析被引量：1
- 2017年
- 本研究旨在探讨人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)16感染与宫颈病变的关系,为宫颈癌防治提供科学依据。通过核酸杂交法进行HPV感染分型,纳入1 057例HPV阳性且行组织切片病理学检查的患者,对各级别宫颈病变中HPV16构成比、不同年龄组HPV16阳性患者中宫颈上皮内瘤样病变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)Ⅱ及以上病变的患病率,以及HPV16单一与多重感染患者中CINⅡ及以上病变的患病率进行分析。结果显示,在1 057例HPV阳性患者中,352例感染HPV16,CINⅢ中HPV16构成比最高,各级别病变中HPV16构成比差异有统计学意义。随着病变级别增加,HPV16构成比有增高趋势(P<0.05)。不同年龄组HPV16阳性患者中CINⅡ及以上病变的患病率差异有统计学意义(P<0.05),且随年龄增加而升高(P<0.05)。HPV16单一、双重与三重以上感染患者中,CINⅡ及以上病变的患病率差异有统计学意义(P<0.05),且随着感染型别种类增加,患病率降低(P<0.05)。本研究显示,HPV16与高级别宫颈病变有较明显的相关性,老年HPV16阳性患者检出宫颈癌的概率更高。因此,应高度重视HPV16持续性感染,做到及时诊断与治疗,以减少宫颈高级别病变和宫颈癌的发生。
- 简洁梁开如余绍兰王青青易晓恋赵清平石艳艳谢成彬夏春高丽丽罗娜左凤琼李婉宜
- 关键词：人乳头瘤病毒16患病率年龄
- HCV体外复制细胞模型的建立
- 2006年
- 目的建立HCV体外复制细胞模型。方法用含有生长HCV基因的p90/HCVFL-longpU质粒,转化Sure细胞,36℃摇菌18h,提取质粒,以线性化DNA为模板,用T7RNA体外转录系统作体外转录,转录产物RNA作RT-PCR、普通琼脂糖凝胶电泳鉴定。采用lipofectin包裹HCVRNA转染生长良好的HepG2细胞。转染48h后收集细胞,TRIzol提取RNA,分别用正链及负链引物作RT-PCR,确定转染细胞中有无HCV的复制中间体及病毒核酸。作免疫组化确定有无病毒NS3、NS5抗原。结果体外可获得高浓度全长HCV-RNA,但转染未获成功。结论全长HCV-RNA转染细胞模型的建立尚需进一步研究。
- 丁宛琼杨春贾文祥王升启张再容
- 关键词：肝炎病毒丙型转染细胞模型
- 重组小鼠β-防御素-3多肽抗甲型流感病毒作用的研究
- 江滟李明远
- 流感病毒多表位基因盒的设计与预测被引量：1
- 2012年
- 目的预测流感病毒抗原表位并设计合成多表位基因盒。方法收集不同类型流感病毒基因序列,联合运用Syf-peithi、ProPred、Multipred2、Bcepred、Clastal X1.83、SWISS-MODEL等多种生物信息学软件进行分析,预测流感病毒Matrix1(M1)、Matrix2(M2)、Nucleoprotein(NP)和HA蛋白上的抗原表位,设计并合成流感病毒多表位基因盒。结果在不同亚型流感病毒的HA蛋白抗原上成功筛选出2个B细胞表位,在M1、M2及NP蛋白上分别筛选出3个T细胞表位,以一定的间隔序列串联各表位,设计并合成流感多表位基因盒。预测结果显示该多表位基因盒具有良好的同源性及抗原性。结论成功设计出包含T细胞表位及B细胞表位的流感病毒多表位基因盒Eg,为流感多表位基因疫苗的研发奠定了基础。
- 邵京京丰锋张强李虹李明远王保宁李婉宜
- 关键词：流感病毒抗原表位生物信息学分析
