暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫研究中心 作品数:80 被引量:239 H指数:9 相关作者: 曾耀英 狄静芳 俞瑜 林长乐 侯会娜 更多>> 相关机构: 南通大学附属医院 中南大学湘雅医院 中山大学中山医学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 国家重点基础研究发展计划 广东省自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 自然科学总论 文化科学 更多>>
自发性流产CBA/J×DBA/2小鼠母-胎界面DX5^+CD69^+细胞的浸润 被引量:3 2005年 目的:研究DX5+CD69+细胞浸润与CBA/J×DBA/2小鼠自发性胚胎吸收的关系。方法:CBA/J×DBA/2小鼠(A组)和CBA/J×BALB/c小鼠(B组)分别用作自发性流产模型和生育力正常对照。DX5用作广泛性NK细胞标志物,CD69作为NK细胞和T细胞活化标志物。采用流式细胞术检测母-胎界面淋巴细胞中CD69+细胞百分率,DX5+CD69+细胞与DX5+细胞比率,并对细胞数量与胚胎吸收率进行线性相关回归分析。结果:A组孕13.5 d胚胎吸收率为34.1%(45/132),显著高于B组(6.6%,9/137;P<0.001)。同时A组DX5+CD69+细胞与DX5+细胞比率(28.1±11.9)%显著高于B组(19.5±5.7)%,(P<0.01)。此外,A组DX5+CD69+与DX5+细胞比率(x)和胚胎吸收率(y)之间存在强线性相关(r=0.807,P<0.001,y=-1.157+1.278x)。结论:母-胎界面过多的DX5+CD69+细胞浸润可能与CBA/J×DBA/2小鼠胚胎吸收有关。 林羿 曾耀英 狄静芳 曾山 曾祥凤 詹美意关键词:流产 细胞表面标志物 淋巴细胞 三七提取物对小鼠淋巴细胞活化、增殖和腹腔巨噬细胞产生NO的影响 2007年 目的分析三七提取物(SE)对小鼠淋巴细胞体外活化、增殖以及对巨噬细胞产生NO的影响,探讨其免疫抑制作用的机制。方法以多克隆刺激剂刀豆蛋白A(Con A)刺激淋巴细胞活化和增殖,利用荧光标记的单克隆抗体双染技术和流式细胞术检测SE对小鼠CD3^+ T细胞CD69表达的影响;通过CPSE染色流式细胞术检测SE对淋巴细胞增殖的影响;用脂多糖(LPS)或淋巴细胞培养上清液(lymphocytes culture supernate,LCS)体外诱导小鼠腹腔巨噬细胞分泌NO,采用Griess试剂盒检测NO的水平。结果在Con A刺激6 h后小鼠T细胞活化率为59.79%,50、100μg/ml的SE可显著降低其活化率,分别为46.50%和37.73%(P<0.01)。在培养72 h后,不同浓度SE能明显抑制Con A诱导T细胞的增殖。SE在12.5~100μg/ml的浓度范围内对淋巴细胞培养上清和LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞NO的释放具有抑制作用(P<0.01)。结论三七提取物对小鼠淋巴细胞的活化、增殖有明显抑制作用,并能抑制巨噬细胞产生NO(P<0.01)。 周建国 曾耀英 黄秀艳 肇静娴 叶雪仪 臧宁 钱中清 何贤辉关键词:三七提取物 淋巴细胞活化 巨噬细胞 NO 生物技术与医学模式变革:迈向再生医学时代 被引量:1 2001年 基因工程、细胞工程、组织工程和整体动物工程等新的生物技术使医学模式发生变革,从以化学药物加手术刀为主要治疗手段的传统医学模式,迈向以基因治疗、细胞移植或生物人工组织器官移植为主要的治疗手段的"再生医学"模式。使用基因工程技术生产各种重组蛋白药物或疫苗越来越广泛地应用于临床。人类基因组计划(HGP)将在2003年完成全部高质量的基因组序列,HGP所开发的资源将对未来的20年的医学领域药物开发、疾病诊断、疾病易感性预测、个体化疾病预防及治疗方案设计等方面都产生巨大的影响。基因治疗从简单的单基因形式走向一整套基因的替代的复杂形式。DNA微阵列和蛋白组微阵列等科学研究技术将应用于临床诊断。核移植技术正在用于培养通用干细胞,用于移植以治疗艾滋病、糖尿病和帕金森氏病等难治性疾病。通过干细胞移植可以再生受损的组织器官。在体外构建可供移植的生物人工组织器官以取代丧失功能的组织器官,这正是组织工程的目标。再生医学存在不少科学技术困难和伦理问题。新的生物技术不仅给我们带来希望,而且还带我们带来不可预测危险。 曾耀英关键词:细胞移植 基因治疗 组织器官 学时 人小胶质细胞的分离、纯化、特异分子表达与吞噬功能研究 被引量:10 2008年 目的:探讨人小胶质细胞(microglia)分离、纯化、培养及鉴定的方法,为深入研究小胶质细胞功能建立一种简便的、稳定的细胞模型。方法:取5个月人工药物引产的胎儿脑组织,将脑组织剪碎、研磨、过滤、离心获取混合胶质细胞悬液,用DMEM/F12完全培养基调整细胞密度为2×1010cells/L,接种于75cm2培养瓶中(记作first0d);7-10d后,进行第1次纯化。此次纯化采用轻柔摇动法将贴壁不牢的小胶质细胞和少突胶质细胞与底层的星形胶质细胞分离并转入另一培养瓶继续培养扩增(记作second0d);4-5d后,混合的小胶质细胞和少突胶质细胞汇合成片,采用胰酶-EDTA消化法结合差速贴壁法进行第2次纯化。此次纯化将消化得到的细胞悬液离心和重悬,接种于培养瓶(记作0h);2h后,小胶质细胞贴壁生长,少突胶质细胞依然漂浮在培养上清中,此时通过移走上清以去除少突胶质细胞,即得到高纯度的小胶质细胞;运用激光共聚焦显微镜技术、流式细胞术结合细胞表面或胞内免疫荧光抗体染色技术检测所分离的小胶质细胞CD45,CD11b和CD68的阳性率,以计算其纯度;通过吞噬荧光微球评价其吞噬功能;利用胞膜边缘波动(membrane ruffling)现象结合荧光标记的鬼笔环肽染色技术鉴定其活化水平。结果:我们所分离的小胶质细胞中,>98%的细胞表达CD45,CD11b和CD68,并且能够吞噬荧光微球。结论:我们成功地分离和纯化了人小胶质细胞,所得到的小胶质细胞高表达CD45,CD11b和CD68分子,并且具有很强的吞噬功能,为进一步进行其功能和蛋白质组研究奠定基础。 黄秀艳 曾耀英 张彩 朱斌关键词:小神经胶质细胞 CD68 凋亡细胞线粒体膜电势与物理参数变化的可视化研究 被引量:2 2008年 目的:通过放线菌酮(CHX)诱导HL-60细胞凋亡模型,探讨线粒体膜电势与细胞物理参数的变化。方法:建立CHX诱导HL-60细胞凋亡模型。于6和18 h时点,利用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测凋亡和晚期凋亡细胞及坏死细胞比率;利用JC-1染色流式细胞术,通过对对照组和CHX组FL1/FL2散点图上具有不同荧光强度的细胞群划分为R2,R3,R4 3个细胞群,并分别对这些细胞群在FSC/SSC二维散点图上进行反向设门,分析细胞凋亡过程中线粒体膜电势变化与细胞物理参数间的关系。通过透射电镜观察凋亡细胞形态结构改变。结果:CHX可引起HL-60细胞凋亡;与对照组相比,CHX组R2和R3细胞群物理参数为FSC和SSC均显著增高,但线粒体膜电势无显著性差异,P>0.05;R4细胞群则为FSC降低,SSC增高,P<0.05,且线粒体膜电势降低。CHX可诱导HL-60细胞体积变小,皱缩,并出现凋亡特征,如核固缩形成新月体和质膜"出芽"现象。结论:流式细胞仪FSC/SSC图可视为细胞指纹图谱。本模型中线粒体膜电势降低的细胞变小,且颗粒程度增加,可能与细胞凋亡过程中的结构改变有关。 梁佩燕 曾耀英 王通 楼湘莹关键词:放线菌酮 HL-60细胞 IL-22参与介导NOD小鼠自发性胚胎丢失 2010年 为研究IL-22与NOD小鼠自发性胚胎吸收率增高的关系,多次腹腔注射中和抗体抑制IL-22,采用流式细胞术检测子宫CD4+IL-22+细胞百分率,并观察NOD×C57BL/6小鼠交配组合中孕鼠胚胎吸收率的变化。结果显示,NOD×C57BL/6孕鼠子宫CD4+IL-22+细胞百分率显著高于BALB/c×C57BL/6孕鼠(52.4%±2.1%与14.3%±4.4%,P<0.01)。多次腹腔注射中和抗体可显著降低NOD×C57BL/6孕鼠子宫内CD4+IL-22+细胞数量(18.7%±2.8%;与未抑制组相比,P<0.01),并可显著降低这些小鼠孕12.5 d的胚胎吸收率(4.8%±2.0%与19.1%±5.1%,P<0.05)。线性相关-回归分析显示,胚胎吸收率与子宫CD4+IL-22+细胞百分率呈正相关。提示妊娠子宫内CD4+IL-22+细胞相对数量过多是妊娠不利因素,可能是造成NOD×C57BL/6孕鼠胚胎吸收率增高的原因之一。 许洁涵 陈琳琳 赵晓明 陈翃 王文静 林羿关键词:流产 母-胎界面 免疫调节 免疫耐受 腺病毒介导细胞外信号调节激酶2表达对去分化软骨细胞增殖及胞外基质合成的影响 被引量:2 2006年 目的:观察腺病毒介导细胞外信号调节激酶2的过度表达对去分化软骨细胞增殖和细胞外基质合成的影响,以及腺病毒介导细胞外信号调节激酶2用于修饰去分化软骨细胞的可行性。方法:实验于2004-09/2005-05在暨南大学组织移植与免疫研究中心进行。SD大鼠5只,周龄为3~5周,此处请核对体质量为(150±20)g,分离、培养大鼠肋生长板软骨细胞,利用Adeasy系统构建携带细胞外信号调节激酶2基因的腺病毒载体。流式细胞仪检测不同感染复数的携带细胞外信号调节激酶2基因的腺病毒载体感染第5代大鼠肋生长板软骨细胞的效率,Westernblot检测携带细胞外信号调节激酶2基因的腺病毒载体感染大鼠肋生长板软骨细胞中细胞外信号调节激酶1/2和磷酸化细胞外信号调节激酶2的表达,3H-TdR,3H-proline和35S-sulfate同位素掺入检测携带细胞外信号调节激酶2基因的腺病毒载体感染对大鼠肋生长板软骨细胞增殖、胶原和蛋白多糖合成的影响。结果:①成功构建携带细胞外信号调节激酶2基因的腺病毒载体重组腺病毒。②100感染复数的携带细胞外信号调节激酶2基因的腺病毒载体感染第5代大鼠肋生长板软骨细胞的效率大于90%。③携带细胞外信号调节激酶2基因的腺病毒载体感染的第5代大鼠肋生长板软骨细胞中细胞外信号调节激酶1/2和磷酸化细胞外信号调节激酶2的表达均显著增加,分别是Ad-CMV组的15.58和1.85倍。④同位素检测结果表明携带细胞外信号调节激酶2基因的腺病毒载体的感染促进3H-TdR、3H-proline和35S-sulfate的掺入,分别是对照组的2.52,1.61和1.53倍(P<0.05)。结论:腺病毒介导细胞外信号调节激酶2基因的过度表达促进去分化大鼠肋生长板软骨细胞的增殖和细胞外基质成分的合成。 季煜华 曾耀英 俞瑜 邢飞跃 王会营 江颖娟关键词:软骨细胞 腺病毒科 基因修饰 艾滋病发病学研究进展与药物和疫苗研发新策略 被引量:3 2008年 A breakthrough has recently been made in the studies on pathogenesis of HIV disease,which result in some new theories.New strategies for HIV drug and vaccine development are emerging in the impact of these new understandings.The intestinal infection hypothesis proposes that HIV disease can be regarded as some kind of infectious disease of gut immune system as the major HIV infection is located in intestine.The acute catastrophe hypothesis suggests that the subsequent pathological changes are the fallout from a mucosal catastrophe of acute intestinal HIV infection,in which the majority of CD4+ T cells are deleted due to infection.The general immune overactivation hypothesis proposes that the general immune overactivation is harmful to patient as it increases the cell susceptibility to HIV infection and supportiveness of HIV replication.The host proteins related to HIV replication can be new targets for HIV drug discovery.The mucosal vaccine strategies,which attempt to induce HIV specific neutralizing antibodies on mucosal surface may be the first choice in development of prophylactic HIV vaccines.Induction of tolerance may be one of the strategies for HIV therapeutic vaccines because HIV disease can be regarded as autoimmune disease caused by HIV infection. 黄秀艳 曾耀英关键词:HIV 肠黏膜 艾滋病 连翘提取物对小鼠腹腔巨噬细胞体外吞噬和NO释放的影响 被引量:14 2008年 目的:分析连翘(FS)对小鼠腹腔巨噬细胞的体外吞噬和体外NO释放的影响。方法:无菌收集小鼠腹腔巨噬细胞和羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯(CFDA-SE)标记大肠杆菌DH5α,短期培养3h后流式细胞术(FCM)分析FS对腹腔巨噬细胞体外吞噬的影响。用LPS体外刺激活化腹腔巨噬细胞,Griess Reagent试剂盒检测并分析FS对巨噬细胞体外释放NO的影响。结果:FCM分析显示,终浓度为40、80、160mg/L的FS对小鼠腹腔巨噬细胞体外吞噬具有明显的促进作用(P<0.05)。不同终质量浓度的FS对LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞体外NO的释放均有抑制作用(P<0.05)。结论:FS可以促进小鼠腹腔巨噬细胞的体外吞噬和抑制NO体外的释放。 尹乐乐 曾耀英 侯会娜关键词:连翘提取物 腹腔巨噬细胞 可溶性Jagged1/Fc嵌合蛋白对小鼠淋巴细胞活化、增殖和周期的影响 被引量:1 2008年 目的:研究可溶性Jagged 1/Fc嵌合蛋白在小鼠淋巴细胞活化、增殖和周期中的作用。方法:选择有效剂量为500μg/L Jagged 1/Fc嵌合蛋白(Jagged 1/Fc),以活体染料/羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯染色,建立在多克隆刺激剂刀豆蛋白A(ConA)或佛波醇酯(PDB)加离子霉素(Ion)刺激下评价淋巴细胞增殖的模型,通过流式细胞术分析Jagged 1/Fc对淋巴细胞增殖的作用;采用碘化丙锭染色检测Jagged 1/Fc对PDB加Ion刺激的淋巴细胞周期变化的影响;利用荧光标记的mAb双染技术观察Jagged 1/Fc对T细胞早期和中期活化标志CD69和CD25表达的影响。结果:Jagged1/Fc对ConA刺激或非刺激的CD3+细胞CD69和CD25的表达无明显影响,对ConA或PDB加Ion刺激或非刺激的淋巴细胞的增殖指数也无明显影响,导致非刺激的淋巴细胞sub-G0期细胞百分比增高,S期细胞百分比降低,但并不影响PDB加Ion诱导的淋巴细胞各期的变化。结论:这些结果提示500μg/L Jagged 1/Fc对小鼠淋巴细胞活化和增殖无明显作用,对PDB加Ion刺激的淋巴细胞周期也无明显影响,但能促进未受刺激的淋巴细胞凋亡,使细胞停滞于G0/G1期,阻止其进入S期。 邢飞跃 于哲 刘静 季煜华关键词:JAGGED 淋巴细胞 活化 增殖 细胞周期