佛山大学医学院检验与药学系
- 作品数：1 被引量：1H指数：1
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- 相关机构：华南农业大学动物科学学院华南农业大学动物科学学院动物遗传育种与繁殖系更多>>
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- 大分子BAC基因打靶载体转染鸡胚原始生殖细胞被引量：1
- 2009年
- 背景：利用原始生殖细胞技术可以方便地将各种外源基因转入鸡体内,以较快的速度获得转基因鸡,但到目前为止原始生殖细胞的转染效率仍然很低,且很难进行较大基因片段的转染。目的：拟实现大分子BAC载体对鸡胚原始生殖细胞的转染。设计、时间及地点：基因水平的细胞学体外观察,于2006-08/2008-07在广东省佛山大学完成。材料：种蛋来自华南农业大学鸡场粤黄鸡群,受精蛋在37.5℃、相对湿度为65%的条件下孵化68~72h。BAC-TDN-GID载体由佛山大学分子生物学实验室保存。方法：以rRNA基因及其间隔序列作为同源重组引导序列,构建含GFP基因和hIFN基因的大分子BAC基因打靶载体,将鉴定为阳性的载体进行扩增培养并大量抽提。取课题组孵化至第19期的粤黄鸡胚,挑取其生殖嵴或性腺,胰酶消化法获得原始生殖细胞,并辅以饲养层和生长因子进行培养。采用脂质体介导法在原始生殖细胞内进行基因转移,对存活的细胞进行目的基因DNA水平和RNA水平鉴定。结果：第19期鸡胚性腺原始生殖细胞体外培养48h呈桑椹状或者椭圆状,72h形成细胞集落,过碘酸染色呈紫红色。分子量达30kb的大分子转基因载体BAC-TDN-GID转染鸡胚原始生殖细胞48h可见荧光细胞,表明转染成功。经PCR和RT-PCR鉴定,证实扩增的产物大小与预期结果大致相吻合,目的基因hIFN已经整合进入原始生殖细胞基因组,并已开始表达。结论：实验成功将大分子BAC载体上的外源基因转染入体外分离培养的鸡胚原始生殖细胞。
- 唐冬生刘晋荣蒋泓曾芳龚道元施振旦张细权
- 关键词：原始生殖细胞鸡胚BAC大分子
