北京大学基础医学院干细胞研究中心
- 作品数：68 被引量：273H指数：9
- 相关作者：王淑玲时艳胡江王宏陈静更多>>
- 相关机构：南方医科大学珠江医院暨南大学生命科学技术学院首都医科大学附属北京同仁医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划北京市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- 酶消化结合差时贴壁的方法体外分离培养人子宫内膜细胞被引量：2
- 2013年
- 目的探讨酶消化结合差时贴壁培养的方法对人子宫内膜细胞进行体外培养的培养效果,以寻找一种简单高效的人子宫内膜细胞体外分离培养的方法。方法采用胶原酶消化结合差时贴壁的方法,对人正常子宫内膜细胞进行体外分离培养,并传代、冻存及复苏。光镜下观察其培养效果,通过免疫荧光法对腺上皮细胞及间质细胞进行鉴定,并分析其纯度。结果共培养人子宫内膜38份,成功培养35份,培养成功率92%,冻存后成功复苏率达97%;子宫内膜腺上皮细胞和间质细胞分别经角蛋白单抗和波形蛋白单抗免疫荧光显色为阳性,腺上皮细胞和间质细胞原代纯度均达90%以上。结论酶消化结合差时贴壁的培养方法,操作简单、培养成功率高、污染机会少、省时、维持细胞活性好,是子宫内膜细胞体外分离培养的简单高效方法。
- 刘明慧晁贺张亚兰王鹏李建梅王淑玲刘英
- 关键词：子宫内膜
- 国际干细胞研究学会《干细胞临床转化指南》被引量：15
- 2009年
- 《干细胞临床转化指南》（以下简称《指南》），概括并讨论了将干细胞的基础研究恰当而负责任地应用在临床上治疗患者时所需要考虑的科学标准、临床准则、管理规则、伦理以及社会问题。《指南》根据科学、临床和伦理的普遍准则，为干细胞转化研究参与者、临床科学家及有关的国际机构的管理人员提出了干细胞临床转化研究应遵守的建议。
- 王太平徐国彤周琪李凌松裴雪涛
- 关键词：细胞转化干细胞科学家
- 胎儿胰腺组织中巢蛋白阳性细胞的分离和体外增殖以及诱导分化被引量：8
- 2003年
- 目的 研究从胎儿胰腺组织中分离巢蛋白 (Nestin)阳性细胞以及该细胞的体外扩增与向胰岛内分泌细胞分化的能力。 方法 采用胶原酶消化法 ,从胎儿胰腺组织中分离获得胰岛样细胞簇 (islet likecellclusters ,ICCs) ,ICCs经手工挑拣后接种 ,待形成单层上皮样细胞后 ,进行传代培养和诱导分化。利用逆转录 -聚合酶链反应 (RT PCR)、免疫荧光染色及放射免疫分析 (RIA)等方法 ,检测该细胞中分子标志物的表达 ,并对其向胰岛内分泌细胞分化的能力进行鉴定。 结果 (1)上述单层上皮样细胞具有很强的增殖能力 ,可至少连续传 16代 ;(2 )RT PCR、免疫荧光染色分析显示 ,该细胞可表达干细胞的标志分子巢蛋白和ABCG2 ;(3 )RT PCR分析显示 ,在多种细胞因子和无血清的条件下 ,巢蛋白阳性细胞经诱导后可出现胰岛素、胰升糖素和胰十二指肠同源盒基因 1(PDX 1)mR NA的表达 ,而巢蛋白和Neurogenin3 (Ngn3 )mRNA表达消失。RIA分析也可检测到诱导后的细胞内有胰岛素产生。 结论 从胎儿胰腺中分离得到的巢蛋白阳性细胞具有胰腺前体细胞的特性 ,在体外具有很强的增殖能力 ,并可诱导分化为胰岛内分泌细胞。该细胞有望为胰岛移植提供一种新的细胞来源。
- 张玲洪天配胡江吴永华李凌松
- 关键词：胎儿胰腺组织体外增殖诱导分化胰岛移植糖尿病
- 体外传代培养的角膜缘干细胞特性的研究
- 2006年
- 目的探讨体外培养的角膜缘干细胞的特性并寻找其表面标志。方法体外扩增人角膜缘干细胞,检测第4代培养细胞Brd-U掺入率及p63、connexin43、角蛋白3/12的表达情况,分析细胞表面分子的表达。结果培养细胞Brd-U24h掺入率明显低于6d掺入率;第4代细胞表现为p63单阳、p63-connexin43双阳和角蛋白3单阳的混合体,而角膜上皮细胞只表达角蛋白。流式细胞分析传代的干细胞β4integrin,CD90(+),α6integrin,CD14(-),角膜上皮细胞CD14(+)。结论体外传代培养的角膜缘干细胞部分保持干细胞特性,具有增生能力。p63是增生细胞的标志。β4integrin+/α6integrin-联合CD90+/CD14-可能纯化角膜缘干细胞。
- 杜仪琴陈静朱秀安李凌松
- 关键词：角膜缘干细胞P63细胞表面分子
- 人肝干细胞移植增加四氯化碳诱导性肝硬化大鼠白蛋白表达
- 2007年
- 目的旨在研究人胚胎肝干细胞移植入四氯化碳(CCl4)诱导性肝硬化大鼠的肝组织后,大鼠血清及肝组织血清白蛋白(ALB)表达的变化情况。方法将健康雄性Wistar大鼠随机分为对照组和肝硬化组。对照组背部皮下注射橄榄油,CCl4组背部皮下注射CCl4橄榄油。连续注射6周后,肝硬化组再随机分为肝干细胞假移植组和肝干细胞移植组。对照组和假移植组在大鼠肝中叶注射细胞培养液,而移植组则在相应部位注射人胚胎肝干细胞2×106,移植4周后处死所有大鼠。右心室取血离心观察ALB的含量;肝中叶取材,免疫组织化学染色观察人表皮生长因子受体(EGFR)的表达,免疫荧光染色和免疫印迹法(Western blotting)法观察和测定肝组织ALB的表达变化。结果对照组和肝干细胞假移植组未见人EGFR阳性表达的细胞,肝干细胞移植组则可见大量排列成环状的EGFR阳性表达的细胞。在肝干细胞移植组的血清ALB含量、免疫荧光染色及Western blotting法检测肝组织ALB表达,均明显高于假移植组,而与对照组无明显著异。结论将人胚胎肝干细胞移植入肝硬化大鼠肝内可以长期存活,并可改善大鼠ALB的表达和分泌。
- 王晓红张立英张艳黄慧雅孔令英张书永沈丽张卫光
- 关键词：肝硬化四氯化碳免疫印迹法
- 侵袭性牙周炎家系组织蛋白酶C基因的突变分析被引量：4
- 2006年
- 目的研究侵袭性牙周炎家系组织蛋白酶C基因(CTSC)的突变及其突变类型。方法应用聚合酶链反应PCR和DNA测序的方法,对一例7岁侵袭性牙周炎患儿及其父母进行基因突变的分析。结果在患儿CTSC基因的第7外显子存在1015C＞T,R339C和1040A＞G,Y347C的杂合突变,测序图表现为两个杂合双峰,其中1015C＞T碱基突变来自父亲,1040A＞G碱基的突变来自母亲。结论本研究在一例青春前期的侵袭性牙周炎患儿检测到组织蛋白酶C基因的突变,该突变产生异常的组织蛋白酶C,导致疾病表型的发生。
- 杨媛白小文宋淑娟葛立宏曹采方
- 关键词：侵袭性牙周炎掌跖角化-牙周破坏综合征
- 人胚胎胰腺源nestin阳性细胞的快速获取被引量：2
- 2004年
- 目的 建立一种胰腺nestin阳性细胞的快速培养方法。方法 解剖分离 12～ 2 4周龄胎儿胰腺 ,通过胶原酶Ⅴ消化获得胰岛样细胞团 (ICCs) ;经原代培养及传代培养后获得nestin阳性细胞。结果 免疫荧光法观察发现 ,传代培养 4次后即可获得单纯的nestin阳性细胞。结论 从胎儿胰腺中可快速获取单纯的nestin阳性细胞。
- 陈燊胡江李凌松
- 关键词：胰腺胰岛样细胞团胰腺干细胞免疫荧光法细胞培养
- 细胞色素P450氧化酶基因MSP1位点多态性与早产的关联性研究被引量：6
- 2004年
- 目的：探讨早产与母、婴细胞色素 P450氧化酶基因(CYPIAI)MSPI 位点多态性的关系 方法：于1999年到2001年，采用病例对照及核心家系的研究设计，在安徽省安庆市调查了496个核心家系，包括247个正常孕周出生的核心家系(对照核心家系)和249个早产中核心家系 采用盐沉淀法提取基因组 DNA，通过聚合酶链式反应(PCR)对细胞色素 P450氧化酶基因 MSPI 位点进行基因型签定 采用对数-线性回归模型(log-Iinear model)分析母亲和婴儿 CYPIAI 基因 MSPI 位点多态性与早产的关联 观察母亲与婴儿 CYPIAI 基因之间的联合作用是否对早产有影响，并采用 TDT 方法检验早产对照核心家系 CYPIAI 基因 MSPI 位点、等位基因传递是否平衡。结果：婴儿 CYPIAI 基因 C/C6235基因型能明显增加早产的发生危险性(RR=1.80，95%CI=1.02～3.18)。同时，我们也发现母亲 CYPIAI 基因 C/C6235基因型对早产有显著影响(RR=1.82，95%CI=1.11～2.98)。母亲与婴儿CYPIAI 基因之间无明显联合作用存在 对照核心家系 CYPIAI 基因 MSPI 突变等位基因传递符合孟德尔遗传规律。结论：婴儿 CYPIAI 基因 C/C6235基因型和母亲 C/C6235基因型均能够明显增加早产发生风险，在早产核心家系中 CYPIAI 基因 MSOI 突变等位基因传递不符合孟德尔遗传规律。
- 金莹陈大方杨帆李志平方治安李凌松王黎华
- 关键词：早产核心家系MSP多态性位点细胞色素
- 体外诱导Balb/C小鼠ES细胞定向分化为胰岛样细胞团的形态观察被引量：1
- 2005年
- 目的体外诱导Balb/C小鼠胚胎干细胞定向分化为胰岛样细胞团,观察细胞表面形态学的变化.方法选用Balb/C小鼠ES细胞,经过拟胚体(EB)发育分化4 d后开始定向诱导培养,不同时间段分别向细胞培养基中添加碱性成纤维细胞生长因子、胰岛素样生长因子-1和尼克酰胺和N等细胞生长因子,使ES细胞定向分化为胰岛样细胞团.免疫细胞化学检测表达胰岛素和胰高血糖素的阳性细胞.原子力显微镜(AFM)原位扫描阳性细胞团.结果EB细胞生长为大小不一、境界清楚的细胞团,细胞团内细胞排列紧密.胰岛B细胞数量多,主要分布在细胞团的中央,边缘少,染色较淡.而表达胰高血糖素的A细胞主要分布在细胞团的边缘,数量相对较少.AFM扫描可见表达胰岛素的阳性细胞团,其表面有很多类似神经纤维束,接成网络状.在细胞质中,还有很多类圆形的颗粒物质,其大小几乎一致,粒径都处于0.5～1.0μm间.结论诱导分化得到的细胞团不仅有形态和功能上的成熟,而且还具备良好的组织结构,为细胞的移植疗法提供了可靠的凭据.
- 刘美莉熊轶蔡继业潘运龙孟凡义李凌松
- 关键词：胚胎干细胞定向分化胰岛样细胞团
- 核素显像活体示踪脊髓内移植的间充质干细胞被引量：2
- 2006年
- 目的探索脊髓内移植间充质干细胞的活体监测方法。方法从胎儿血分离培养人间充质干细胞,流式细胞分析、免疫荧光染色、放射性配基结合实验检测其转铁蛋白受体的体内外表达。移植于兔正常脊髓后,放射性碘I标记铁饱和转铁蛋白为示踪剂,进行活体闪烁扫描成像和脊髓切片放射自显影(A组);放射性碘标记人血清白蛋白为示踪剂作为非特异显像对照组(B 组);单纯移植磷酸盐缓冲液(PBS)作为移植对照组(C组)。结果体外培养和移植于脊髓第2天的间充质干细胞表达转铁蛋白受体,第10天不表达。移植第2天,活体闪烁扫描成像和脊髓切片放射自显影均显示A组细胞移植部位放射性聚集。B、C组仅见本底影像。A组与B、C组之间在脊髓移植部位的相对放射性(RI／RN)差异均有统计学意义(P<0．05);移植后第10天,3组脊髓内移植部位均未见阳性显像。结论放射性碘标记铁饱和转铁蛋白为示踪剂,进行活体闪烁扫描成像可以示踪到脊髓内移植第2天的间充质干细胞。提供了一种以移植干细胞表面标志为靶点进行核素显像的活体示踪方法。
- 白金柱刘忠军丁为民徐光辉沈丽王凡杜进田嘉禾
- 关键词：间充质干细胞转铁蛋白受体脊髓核素
