中国农业大学食品科学与营养工程学院食品生物技术实验室
- 作品数：9 被引量：42H指数：5
- 相关作者：王晓光刘金娜杨鹏跃朱宏亮更多>>
- 相关机构：天津农学院食品科学系东北林业大学林学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划引进国际先进农业科技计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 利用染色质免疫共沉淀技术确定转录因子RIN调控的靶基因被引量：5
- 2011年
- 以粉红期番茄果实为材料,用含不同浓度甲醛的缓冲液交联DNA和蛋白质,利用超声波将其染色质随机断裂成大小为200-1 000 bp的片段,用RIN蛋白的特异性抗体免疫沉淀与RIN蛋白结合的DNA片段,然后解交联和纯化DNA片段,最终用普通PCR试验和测序验证与转录因子RIN结合的DNA序列。结果表明,适用于番茄果实的最佳ChIP试验条件为:用1%甲醛溶液交联DNA和蛋白质的复合物;用20%功率,工作6 s,间隔10 s,脉冲3次超声破碎该复合物,可以得到适当大小的片段,用于后续的试验。普通PCR和测序验证结果证明转录因子RIN与LeACS2和LeACS4启动子区域的CArG box序列结合。
- 李玲傅达奇朱毅田慧琴罗云波朱本忠
- 关键词：番茄果实
- 染色质免疫共沉淀技术的应用和研究进展被引量：10
- 2012年
- 本文主要从染色质免疫共沉淀技术的基本原理、实验步骤、优缺点和应用等方面进行阐述,阐明了应用于ChIP技术下游的确定靶基因的不同方法,并对其中的两种重要方法作比较。特别介绍了ChIP技术在植物方面的最新研究进展,并对此技术作总结和展望。
- 李玲杨鹏跃朱本忠傅达奇田慧琴罗云波
- Green-ripe(Gr)基因植物表达载体的构建及在Micro-Tom番茄中的遗传转化
- 2012年
- Green-ripe(Gr)是一种番茄果实成熟突变体,有报道表明番茄中的Gr基因以某种形式参与乙烯信号转导途径,导致番茄果实成熟过程中的乙烯不敏感特性。从番茄果实中克隆Gr基因,成功构建Gr基因的植物表达载体pCAMBIA-1300-Gr,并以Micro-Tom番茄品种为材料,采用农杆菌介导叶盘法转化得到转基因植株,经PCR初步验证为阳性植株,为进一步研究Gr基因的功能奠定了基础。
- 杨鹏跃王云香李玲朱本忠傅达奇罗云波
- ABA处理不同成熟时期番茄果实中ACS和ACO家族基因的表达
- 2009年
- 番茄果实的成熟是由多基因精细调控的一个过程。其中作为重要的植物激素,乙烯和ABA又与成熟过程密切相关。在乙烯合成途径中,ACS和ACO两个基因家族起着非常重要的作用。而ABA与乙烯在植物成熟衰老过程中的相互作用也开始成为研究热点。采用真空渗透技术对不同时期的番茄果实(未熟、绿熟、破色)进行ABA渗透处理。然后根据处理4h(4hpi)和24h(24hpi)后的果实乙烯生成情况,确定处理后4h为基因表达测定时间。最后利用实时定量PCR技术,对3个不同成熟时期番茄果实中的ACS(LeACS1A,LeACS2,LeACS4和LeACS6)和ACO(LeACO1,LeACO3,LeACO4和LeACO6)进行基因表达测定。
- 王晓光李玲王晓辉马远征朱本忠
- 关键词：ACSACO乙烯
- 破色期番茄果实均一化cDNA沉默文库的构建和功能基因筛选模型的初步建立被引量：7
- 2009年
- 番茄果实的成熟是由多基因精细调控的一个过程.利用破色期番茄果实,根据复性动力学原理在mRNA水平进行均一化操作使高丰度和低丰度的mRNA丰度接近.然后把均一化之后mRNA反转录得到cDNA,再与基因沉默载体pTRV重组,最后把构建好的载体通过电转化的方法转入到GV3101农杆菌中,从而建立起破色期番茄果实均一化cDNA沉默文库.通过番茄果实中病毒诱导基因沉默技术,对cDNA沉默文库进行初步筛选,从而确定功能基因筛选模型.在模型建立阶段,以番茄红素合成途径相关的PDS基因作为内标基因,在100个混合农杆菌样中,成功筛选到了PDS基因.
- 王晓光马远征王晓辉李玲罗云波朱本忠
- 关键词：CDNA文库功能基因VIGS
- 病毒诱导烟草的基因沉默被引量：6
- 2005年
- 病毒诱导基因沉默是利用RNA介导病毒防卫机制的一项技术.构建含有目的基因片段的人工改造病毒载体,通过农杆菌侵染导致植物内源目的基因沉默.为建立病毒诱导基因沉默体系,选用烟草脆裂病毒(TRV)和烟草为实验材料.构建了八氢番茄红素去饱和酶基因(PDS)的基因沉默病毒载体,病毒载体侵染结果显示目的基因PDS沉默导致烟草幼苗出现光漂白现象.采用RT-PCR的方法检测目的基因PDS的沉默效果,结果显示PDS基因mRNA被显著降解.该体系的建立有利于将来对植物基因进行高通量功能分析.
- 傅达奇朱本忠赵晓丹朱宏亮谢远红罗云波
- 关键词：烟草脆裂病毒基因沉默烟草
- 水稻密码子优化的cry2A*基因在大肠杆菌中的表达及其表达产物的纯化被引量：7
- 2008年
- 通过PCR从克隆载体pUC18-3Z/Cry2A*上扩增水稻偏爱型密码子优化的抗虫基因cry2A*,经限制性内切酶NdeI和BamHI双酶切定向插入到原核表达载体pET-28a(+),成功构建了在表达蛋白的N端只带有6个组氨酸标签的融合蛋白表达载体pET-28a(+)/Cry2A*,并转入大肠杆菌BL21(DE3)中。通过对其表达条件进行优化,发现在IPTG浓度为0.05mmol/L、诱导时间为3h、诱导温度为20℃的表达条件下目的蛋白大部分以可溶形式进行表达。采用Ni-NTA亲和柱纯化得到高纯度目的蛋白,薄层扫描分析蛋白纯度达到95%。
- 秦伟黄昆仑贺晓云李欣许文涛林希瑾罗云波
- 关键词：抗虫基因转基因水稻纯化
