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上海来益生物药物研究开发中心: 作品数：126 被引量：519H指数：12; 相关作者：罗敏玉饶敏苏旭霞李秋爽万国庆更多>>; 相关机构：上海医药工业研究院上海交通大学中国药科大学更多>>; 发文基金：国家科技重大专项国家自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学化学工程农业科学更多>>

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鱼腥藻N-乙酰-D-葡萄糖胺2-差向异构酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的高效表达被引量：2: 2008年; 目的从鱼腥藻7120(Anabaenasp.PCC 7120)中克隆N-乙酰-D-葡萄糖胺2-差向异构酶(N-acyl--Dglucosamine 2-epimerase,AGE)基因,并在大肠杆菌中表达。方法利用PCR技术从鱼腥藻染色体组扩增AGE基因,通过基因工程方法构建表达质粒pLY-11,在大肠杆菌中表达,并利用Ni-NTA柱分离纯化。利用柱前衍生化的方法,通过HPLC检测表达产物转化N-乙酰-D-甘露糖胺(N-acyl-D-mannosamine,ManNAc)的活性,并联合N-乙酰神经氨酸裂合酶(N-acetylneuraminatelyases,NAL),进行双酶转化生成N-乙酰神经氨酸(N-acetylneuraminic acid,Neu5Ac)实验。结果AGE基因在大肠杆菌中表达,可溶性产物蛋白占总可溶性蛋白质量的18%,经纯化后得到1.6 g.L-1产物蛋白。双酶转化实验中,转化终产物Neu5Ac质量浓度为14.8 g.L-1。结论鱼腥藻7120 AGE基因在大肠杆菌中的表达产物具有活性,为双酶转化制备Neu5Ac进行了初步的探索。; 王立军朱丽张怡轩戈梅; 关键词：N-乙酰神经氨酸双酶法

紫苏霉素抗性基因srm1的克隆及其特性研究: 2005年; 从伊纽小单孢菌(Micromonosporainyoensis)扩增到包含紫苏霉素抗性基因srm1的DNA序列LY102(847bp),并将其克隆到pUC19/18载体上.srm1基因是依靠它自身的启动子激活(ATG上游19bp序列),在E.coliDH5α中表达,并不受lacZ启动子的控制.其开放性阅读框长819bp,编码含273AA的多肽链.预测的Srm1蛋白序列与GrmB(来自玫瑰小单孢菌)、GrmA(来自绛红色小单孢菌)和Sgm(来自兹昂小单孢菌)的同源性依次为92%,89%和85%.srm1,grmA,grmB和sgm4个抗性基因具有相同的核糖体结合位点GGAGG,但是它们的核糖体结合位点与翻译起始密码子之间的序列互不相同.基因srm1以自阻遏方式在翻译水平上进行调节.; 洪文荣朱春宝陈代杰朱宝泉; 关键词：克隆

应用高速逆流色谱法分离茎点霉属真菌代谢物中脂肪酸成份的研究被引量：3: 2010年; 利用高速逆流色谱对一株茎点霉属内生真菌的代谢物质脂肪酸部分进行了分离。采用的两相溶剂系统为正庚烷:乙酸乙酯:甲醇:水=8.5:1:8.5:1,上相做固定相,下相做流动相。分离得到三个脂肪酸组分A5、A6、A7,经高效液相分析,纯度都在99%以上,其回收率分别为96.3%、93.5%,94.8%。经EI-MS、1H-NMR测定,确定A5为硬脂酸,A6为油酸,A7为亚油酸。; 王志强杨志钧陈代杰徐威; 关键词：高速逆流色谱脂肪酸

参与抗生素生物合成的FADH_2依赖型卤化酶研究进展被引量：5: 2010年; 从发现第一个天然卤化物到现在已有100多年了。在已发现的约4500个天然卤化物中有很多在医药等领域应用广泛,其中包括许多重要的抗生素。直到19世纪90年代中期,人们一直认为生物卤化反应主要由卤过氧化物酶负责催化。近期在许多关于抗生素生物合成基因簇的研究中发现FADH2依赖型卤化酶催化的卤化反应才是许多微生物及其它生物中的主要卤化机制。本文综述了参与抗生素生物合成的FADH2依赖型卤化酶的发现,催化机制及各种来源的该类卤化酶研究进展,并介绍了该类酶在组合生物合成及寻找天然卤化物等方面的应用。; 李航朱丽陈代杰; 关键词：抗生素卤化物

植物内生菌HCCB00167产物的发酵、分离和结构鉴定被引量：14: 2007年; 目的对植物内生菌HCCB00167发酵产物酯溶性部分的化合物进行分离和结构鉴定。方法采用乙酸乙酯萃取、硅胶柱色谱制备分离纯化;通过质谱和核磁共振等谱学数据进行化学结构鉴定。结果从HCCB00167菌株发酵液中分离并鉴定了3个化合物,分别为麦角甾醇(1)、过氧化麦角甾醇(2)和4-丁基-吡啶-2-羧酸(3)。结论其中4-丁基-吡啶-2-羧酸为首次从陆生真菌中得到。; 解翠华阮丽君夏焕章陈代杰葛梅; 关键词：麦角甾醇

葡萄球菌素研究进展被引量：2: 2008年; 葡萄球菌素为细菌素的一种,是由葡萄球菌产生的一类具有抗菌活性的肽类物质,具有细菌不易产生抗性、体内无残留、对机体无毒副作用等特点,其开发应用前景广阔,但目前尚未作为抗感染药物进入临床应用。本文简要介绍几种葡萄球菌素的结构特征、抗菌机制及其抗菌活性的研究进展。; 王永亮杨志钧陈代杰; 关键词：细菌素葡萄球菌葡萄球菌素

一种利用荧光标记检测氨肽酶N抑制剂与肿瘤细胞结合的方法被引量：1: 2014年; 目的:建立利用荧光标记法检测氨肽酶抑制剂和肿瘤细胞结合的方法。方法:以异硫氰酸荧光素(FITC)标记氨肽酶N抑制剂LYRM03和Bestatin,制备荧光探针FITC-LYRM03、FITC-Bestatin,应用荧光显微成像观察和流式细胞仪检测标记化合物FITC-LYRM03、FITC-Bestatin对肿瘤细胞的结合与氨肽酶N抑制活性的相关性。结果:化合物LYRM03和Bestatin具有肿瘤细胞的氨肽酶N抑制活性,荧光标记化合物FITC-LYRM03、FITC-Bestatin能与肿瘤细胞有不同程度的结合。结论:标记化合物FITC-LYRM03、FITC-Bestatin和肿瘤细胞的结合与对肿瘤细胞的氨肽酶N抑制活性相一致。; 王婷阮林高戈梅钱秀萍; 关键词：氨肽酶N抑制剂 BESTATIN

兽用抗菌药物与细菌耐药性被引量：1: 2002年; 自70年代以来,细菌耐药性问题日趋严重。除了医院是重要的耐药菌产生地外,人们已经能够接受医院外健康人也是重要的耐药基因接受者的观点。很多抗菌药物在医院外不仅被用于人体,同时也被广泛地用于动物。这样,动物也不可避免地出现对耐药细菌的选择性。动物体内细菌转座子和质粒上的耐药性基因的扩散是由于在动物中大量使用抗菌药物的直接原因。动物间的粪便接触,特别是大规模圈养动物间很容易增加细菌耐药性的扩散程度。; 陈代杰; 关键词：细菌耐药性耐药率耐药菌屎肠球菌空肠弯曲杆菌

反义RNA介导的大肠杆菌非必需基因rpsF的基因沉默被引量：1: 2014年; 【目的】探讨反义RNA技术介导的大肠杆菌非必需基因rpsF基因沉默导致菌体生长受抑制的原因。【方法】将rpsF基因5'端41-230 bp的片段反向插入带有末端配对结构的反义表达载体pHN678,获得重组质粒,导入大肠杆菌宿主获得反义RNA菌株Escherichia.coli/pHNF,并用诱导剂IPTG诱导反义RNA表达,通过与对照菌E.coli/pHN678的液体生长状态差异判断菌体生长表型;采用Real time RT-PCR方法跟踪分析转录水平。【结果】构建了针对rpsF的反义RNA菌株,且其生长受抑制程度与IPTG浓度呈正相关。IPTG浓度为100μmol/L时,菌体生长未受抑制,但靶基因rpsF的mRNA量降低了36%,而rpsR是位于同一操纵子下游的必需基因,其转录水平却未受影响;IPTG浓度为200μmol/L时,菌体生长明显受抑制,经分析发现rpsR转录水平降低了12%。【结论】反义RNA菌株E.coli/pHNF生长受抑制的原因是由于此反义RNA引起了同一操纵子下另一必需基因rpsR的转录水平降低。; 唐欣茹殷瑜戈梅陈代杰; 关键词：反义RNA 基因沉默操纵子

具有糖基转移抑制活性的抗生素研究进展被引量：2: 2008年; 细菌细胞壁的骨架肽聚糖的生物合成过程在抗生素治疗中具有重要地位。随着细菌耐药性日益严重,糖基转移过程成为新型抗生素极有潜力的靶标。近年来,糖基转移酶的三维结构的确定,酶与抑制剂复合物结构及其相互作用的详细阐述,都为筛选和研究抑制糖基转移活性的新型抗生素提供了新的突破点。文中依照作用机制的不同,依次论述了直接抑制糖基转移酶活性的抗生素——默诺霉素及其类似物、万古霉素疏水衍生物,和作用于底物脂Ⅱ的抗生素——万古霉素和替考拉宁、雷莫拉宁、硫醚抗生素及一些推测的底物结合物,就其近年的研究进展做一综述。; 李芳芳陈代杰殷瑜; 关键词：抑制剂糖基转移酶

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