国家自然科学基金(30400118)
- 作品数：5 被引量：24H指数：3
- 相关作者：周蓉蓉廖遇平肖华平肖志强陈嘉更多>>
- 相关机构：中南大学福建医科大学卫生部更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 血管内皮生长因子干扰RNA对人鼻咽癌CNE-2Z细胞VEGF表达调控的实验研究被引量：5
- 2007年
- 目的研究血管内皮生长因子(VEGF)的特异性小片段干扰RNA(siRNA)对低分化人鼻咽癌CNE-2Z细胞VEGF表达的抑制作用,为鼻咽癌的治疗提供新的途径。方法体外培养人鼻咽癌细胞CNE-2Z,并分成正常氧状态培养组(20%)和低氧(1%)培养组。采用脂质体(LF2000)将VEGFsiRNA转染两组细胞,并采用RT-PCR、ELISA检测鼻咽癌细胞在正常氧状态和低氧状态下VEGFmRNA和蛋白质表达的差异。结果与未转染组和转染空载体组相比,在正常氧和低氧状态下,VEGFsiRNA均能明显抑制VEGFmRNA的表达(P<0.01);正常氧状态下VEGFsiRNA的抑制效率比低氧状态高。正常氧状态下:未转染组、转染空载体组、转染VEGFsiRNA组CNE-2Z细胞培养上清液中VEGF165的含量分别为:423.92、419.68和328.86pg/mL;低氧状态下VEGF165的含量分别为:813.62、799.89和500.96pg/mL,转染VEGFsiRNA组VEGF的表达下调。结论VEGFsiRNA能有效地、特异地抑制人鼻咽癌CNE-2Z细胞VEGFmRNA和蛋白质的表达,因而有望成为治疗鼻咽癌的一种有效方法。
- 周蓉蓉申良方
- 关键词：RNA干扰血管内皮生长因子鼻咽癌基因治疗
- E1A基因下调人鼻咽癌细胞血管内皮生长因子的表达提高放疗敏感性被引量：8
- 2008年
- 目的:探讨腺病毒E1A基因通过下调人鼻咽癌CNE-2Z细胞血管内皮生长因子(VEGF)的表达,来提高人鼻咽癌CNE-2Z细胞对放疗的敏感性。方法:选用人鼻咽癌CNE-2Z细胞为靶细胞,分别用PBS、Ad-β-gal、Ad-E1A作用48h后,用6MVX线分别给予0、2、4、6、8和10Gy剂量照射后,用MTT法和流式细胞仪检测3组细胞存活率及细胞周期变化来观察E1A基因对人鼻咽癌CNE-2Z细胞放疗敏感性的影响,同时用RT-PCR和免疫细胞化学法检测3组细胞VEGF水平的表达。结果:经照射后Ad-E1A组的细胞存活率明显低于PBS对照组和Ad-β-gal对照组。Ad-E1A组细胞的生长速度明显慢于PBS对照组和Ad-β-gal对照组。RT-PCR和免疫细胞化学结果显示Ad-E1A组比PBS对照组和Ad-β-gal对照组的人鼻咽癌CNE-2Z细胞的VEGF表达明显下降。结论:E1A基因通过下调VEGF的表达来提高人鼻咽癌细胞对放疗的敏感性。
- 周蓉蓉肖志强廖遇平肖华平
- 关键词：血管内皮生长因子鼻咽肿瘤放疗
- E1A基因对鼻咽癌细胞放射敏感性影响的初步实验研究被引量：2
- 2009年
- 目的探讨E1A基因对鼻咽癌细胞放射增敏作用及相关机制。从而为提高鼻咽癌放射治疗疗效提供实验依据。方法经腺病毒介导，将E1A基因导入人鼻咽癌细胞系CNE2细胞。经RT-PCR鉴定，获得含E1A的阳性克隆。将未转染的CNE2细胞、转染对照空载体Ad-B-gal的CNE2细胞和转染Ad-E1A的CNE2细胞用6MVX线分别照射0、2、4、6、8Gy后进行成克隆分析并绘制细胞存活曲线，计算放射增敏比。流式细胞术和RT—PCR检测转染前后的细胞周期分布以及wtp53表达情况。结果转染后阳性克隆细胞RT—PCR结果说明E1A已整合到细胞基因组中并且稳定表达。细胞存活曲线结果显示转染E1A的CNE2细胞放射增敏比分别为1．37（D0值比）、1．95（Dq值比）、1．46（SF2值比）。未转染及空载体转染后的CNE2细胞照射后细胞存活曲线分析结果显示无差异，D0、Dq、SF2值分别为1．57Gy及1．53Gy、1．82Gy及1．78Gy、0．89及0．82。流式细胞术显示细胞周期出现G2＋M期阻滞，RT-PCR结果显示E1A基因能提高wtp53的表达。结论E1A基因能显著提高人鼻咽癌细胞的放射敏感性，其作用机制可能与E1A基因提高wtp53基因的表达和引起G2＋M期阻滞有关。
- 肖华平陈建武廖遇平周蓉蓉
- 关键词：E1A基因放射增敏野生型P53
- E1A抑制鼻咽癌细胞裸鼠移植瘤的生长并增强其对放疗的敏感性被引量：3
- 2009年
- 目的:探讨E1A基因对人鼻咽癌CNE2细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用和对放疗的增敏作用及其相关机制。方法:以腺病毒为载体,将E1A基因导入CNE2细胞,获得含E1A的阳性克隆。通过裸鼠致瘤实验,观察E1A基因的抑瘤作用。观察E1A基因疗法及其与放疗联合应用对CNE2细胞裸鼠移植瘤的疗效。RT-PCR法检测E1A基因治疗对P53基因表达的影响。结果:建立稳定转染Ad-E1A的CNE2阳性细胞克隆(CNE2-Ad-E1A),CNE2-Ad-E1A组小鼠细胞移植瘤较CNE2组和CNE2-Ad-β-gal组(稳定转染Ad-β-gal对照质粒的CNE2细胞)成瘤时间晚、肿瘤小。单纯放疗、单纯Ad-E1A基因治疗及Ad-E1A+放疗3种治疗方法均可抑制CNE2裸鼠移植瘤的生长,抑瘤率分别为(60.32±5.34)%、(70.53±6.12)%和(97.15±4.87)%。E1A基因治疗能上调鼻咽癌组织中P53的表达。结论:E1A可抑制人鼻咽癌细胞裸鼠移植瘤的生长并增加其对放疗的敏感性,该作用可能与E1A上调P53基因的表达有关。
- 肖华平周蓉蓉廖遇平
- 关键词：E1A基因鼻咽肿瘤P53
- E1A基因对人鼻咽癌动物模型放射增敏的实验研究被引量：8
- 2009年
- 目的:探讨腺病毒E1A基因对人鼻咽癌动物模型放射增敏的实验研究。方法:取对数生长期的CNE-2Z细胞5×105/0.2 mL,接种于4周龄左右裸鼠右前肢腋部皮下致瘤,第7天裸鼠皮下肿瘤长至直径0.6～0.8 cm时,随机分为6组(n=10):PBS组,Ad-β-gal组,放射组,Ad-β-gal+放射组,Ad-E1A组,Ad-E1A+放射组。Ad-β-gal组/Ad-E1A组在第2周开始给予荷瘤裸鼠皮下肿瘤内滴度为5×109PFU/50μL的Ad-E1A/Ad-β-gal注射,每周2次,连续2周,放射组在第3周给予6MV-X照射,每天2 Gy,连续5 d。Ad-β-gal+放射组/Ad-E1A+放射组在第2周开始,给予荷瘤裸鼠皮下肿瘤内滴度为5×109PFU/50μL的Ad-E1A/Ad-β-gal注射,每周2次,连续2周,在第3周给予6MV-X照射,每天2 Gy,连续5 d。第1次治疗后,每隔4天用卡尺测量1次肿瘤的体积,记录其直径,裸鼠的生存时间。当肿瘤的直径超过2 cm时,处死裸鼠,分离肿瘤组织,采用免疫组织化学方法分析血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和CD34表达,TUNEL分析细胞凋亡。结果:Ad-E1A+放射组较其他组能明显延缓移植瘤生长时间,Ad-E1A+放射组裸鼠的肿瘤平均体积比单独放射组小4.7倍,比单独用Ad-E1A组的小5.3倍。Ad-E1A+放射组的裸鼠生存率显著高于其他治疗组。Ad-E1A+放射组的VEGF蛋白表达和微血管密度较其他各组明显下降(P<0.01)。TUNEL分析结果显示Ad-E1A组和Ad-E1A+放射组及放射组的肿瘤组织内均可明显观察到凋亡细胞。并且Ad-E1A+放射组肿瘤细胞凋亡数目明显高于Ad-E1A组或者放射组。结论:E1A基因通过抑制肿瘤血管的形成和诱导肿瘤细胞的凋亡来提高人鼻咽癌细胞对放射的敏感性。
- 周蓉蓉陈嘉肖志强
- 关键词：鼻咽癌E1A血管内皮生长因子CD34
