山东省自然科学基金(Y2004C22)
- 作品数：5 被引量：15H指数：2
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- 相关机构：山东省寄生虫病防治研究所中国人民解放军第456医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 微小隐孢子虫重组BCG-CP15/60-23疫苗的构建及鉴定被引量：1
- 2008年
- 目的构建和鉴定微小隐孢子虫CP15/60-23基因重组卡介苗。方法以pET-30 a-CP15/60-23质粒为模板,PCR扩增CP15/60-23基因片段,然后克隆至TA载体;通过酶切、测序鉴定后,将CP15/60-23基因片段用限制性内切酶切下定向克隆至大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭表达载体pMV262结核杆菌热休克蛋白(HSP)启动子下游,构建重组质粒pMV262-CP15/60-23,用电穿孔将该质粒导入野生卡介苗(BCG-WT)构建微小隐孢子虫CP15/60-23基因重组卡介苗。结果扩增出792bp的微小隐孢子虫CP15/60-23基因片段,成功构建pMV262-CP15/60-23质粒,并通过PCR扩增和提取质粒、酶切等表明该质粒被正确导入BCG-WT中。结论成功构建微小隐孢子虫CP15/60-23基因重组卡介苗,为研究隐孢子虫病新的防治方法打下了基础。
- 李瑾黄炳成魏庆宽肖婷崔勇傅婷霞江洪涛胡颖新文桂香张佃波韩广东刘克义
- 关键词：微小隐孢子虫重组卡介苗
- 微小隐孢子虫重组BCG-CP15/60-23疫苗免疫原性的研究被引量：5
- 2008年
- 目的探讨微小隐孢子虫重组BCG-CP15/60-23疫苗(rBCG-CP15/60-23)的免疫原性。方法用rBCG-CP15/60-23免疫BALB/c小鼠,免疫前后取血,用ELISA法检测IgG抗体,末次免疫后2周取淋巴细胞作体外培养,测定培养上清IFN-γ、IL-2和IL-12的水平。设实验组、BCG组、载体组和PBS对照组。结果rBCG-CP15/60-23免疫后2周开始小鼠IgG抗体水平逐渐升高,与BCG组和载体组比较差异均有统计学意义(P均<0.01);免疫鼠脾淋巴细胞培养上清中IFN-γ和IL-2的含量与PBS对照组和BCG组比较差异有统计学意义(P均<0.05),IL-12水平组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论rBCG-CP15/60-23免疫小鼠后能刺激机体产生IgG抗体,IFN-γ和IL-2的分泌增加,具有较好的免疫原性。
- 黄炳成李瑾魏庆宽肖婷崔勇韩广东
- 关键词：微小隐孢子虫疫苗免疫原性
- 微小隐孢子虫重组BCG-Cp23疫苗的构建及鉴定被引量：1
- 2008年
- 目的构建和鉴定微小隐孢子虫Cp23基因卡介苗重组疫苗。方法用微小隐孢子虫感染免疫抑制BALB/c小鼠,用蔗糖密度梯度离心法纯化其粪便中的卵囊,酚-氯仿法提取微小隐孢子虫的基因组DNA,PCR扩增Cp23基因片段,然后将其克隆TA载体;通过酶切、测序鉴定后,将Cp23基因片段用限制性内切酶切下克隆至大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭表达载体pMV262结核杆菌热休克蛋白(HSP)启动子下游,构建重组质粒pMV262-Cp-23,用电穿孔将该质粒导入野生卡介苗(BCG-WT)构建微小隐孢子虫Cp23基因卡介苗重组疫苗。结果扩增出约360bp的微小隐孢子虫Cp23基因片段并成功构建pMV262-Cp23质粒,通过PCR扩增和提取质粒、酶切表明质粒正确导入BCG-WT中。结论成功构建微小隐孢子虫Cp23基因卡介苗重组疫苗。
- 李瑾黄炳亮魏庆宽肖婷崔勇刘克义
- 关键词：微小隐孢子虫重组卡介苗
- 基因重组卡介苗研究进展被引量：6
- 2009年
- 卡介苗是用来预防结核病的牛型结核分枝杆菌减毒活疫苗。以卡介苗为载体的基因重组卡介苗因其具有集疫苗与佐剂于一体的特点,近年来成为研究的热点。基因重组卡介苗在免疫功能的研究、传染病和肿瘤的防治中均发挥了重要作用。本文就近年来这方面的研究作一简要概述。
- 李瑾黄炳成
- 关键词：卡介苗基因重组免疫
- 微小隐孢子虫重组BCG疫苗免疫保护作用观察被引量：2
- 2010年
- 目的研究微小隐孢子虫重组BCG疫苗的免疫保护作用。方法 100只BALB/c小鼠随机分为4组,BCG组免疫BCG,载体组免疫含PMV262质粒的BCG(BCG-PMV262),实验组免疫rBCG-CP15/60-23(各组均为每鼠尾静脉注射0.1mL,接种物浓度均为106细菌/mL),对照组每鼠尾静脉注射0.05mol/LpH7.2PBS0.1mL。免疫后,每组分别随机选6只小鼠检测其血清抗体和脾细胞培养液中的CD4+、CD8+以及细胞因子水平,各组剩余小鼠进行攻击实验。结果 rBCG-CP15/60-23能诱发小鼠产生细胞免疫和体液免疫反应,小鼠血清抗体水平于免疫后2周逐渐升高,与BCG组和载体组差异显著(P均<0.01);实验组CD4+T细胞增殖明显,CD4+/CD8+比值显著升高(P<0.05);脾细胞培养液中白细胞介素2(IL-2)、IL-12、γ干扰素(IFN-γ)均有不同程度的升高,实验组IFN-γ和IL-2含量与对照组和BCG组差异显著(P均<0.05),IL-12水平组间差异无统计学意义(P>0.05)。各组小鼠经隐孢子虫卵囊攻击感染后,实验组小鼠卵囊排泄数量减少40%～60%,初始排卵囊时间延长2d,卵囊持续排出时间缩短5d;组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论微小隐孢子虫重组BCG-CP15/60-23疫苗免疫小鼠后,能产生良好的免疫保护作用。
- 魏庆宽贾凤菊李瑾肖婷崔勇韩广东李伟黄炳成
- 关键词：微小隐孢子虫疫苗免疫保护
