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Irradiation Injury Temporarily Induces Enhancement of APN/CD13 Peptidase Activity on Aorta-gonads-mesonephros (AGM)-derived Stromal Cells: 2007年; This study was designed to investigate the expression of aminopeptidase N （APN）/CD13 on intraembryonic AGM stromal cells, and the change of its enzymatic activity after irradiation injury. The expression of APN/CD13 on AGM stromal cells was assayed by RT-PCR and immunihistochemistry. After the stromal cells in AGM region were irradiated with 8.0 Gy of ^60Co T-rays, APN/CD13 enzymatic activity was measured by spectrophotometer at different time points. The result showed that AGM stromal cells strongly expressed APN/CD13. The enzymatic activity of APN/CD13 decreased temporarily after irradiation injury, then increased to higher level 4 h after irradiation, and it returned to the pre-irradiation level 24 to 48 h after the irradiation. The enzymatic activity of APN/CD13 was temporarily enhanced after irradiation injury, which might be one of the compensatory mechanisms that promote the hematopoietic recovery after irradiation.; 朱艳黄丽芳罗小华孙汉英冉丹张可杰郑邈周琨刘文励

联合成骨细胞移植促进骨髓移植小鼠的造血功能重建被引量：2: 2011年; 目的探讨联合成骨细胞移植对骨髓移植小鼠造血功能重建的影响。方法Balb／e小鼠60只，取其中18只制备移植用骨髓有核细胞和成骨细胞。将其余42只小鼠分为3组。单纯移植组：小鼠18只，仅进行骨髓移植（BMT）；联合移植组：18只，进行BMT的同时每只小鼠输入成骨细胞2×10^6个；正常对照组：小鼠6只，不做任何处理，仅作为移植前的正常对照。移植组小鼠在全身照射（TBI）预处理后4h经尾静脉注入骨髓细胞2×10^6个。移植后第7、14和21天，分别处死移植组小鼠6只，对小鼠的外周血细胞和骨髓单个核细胞（BMMNC）进行计数，采用流式细胞术测定BMMNC中CD34^＋细胞的百分比，使用HPIAS-1000高清晰度彩色病理图像系统测量骨髓造血组织面积，采用免疫组化染色法测定骨髓组织微血管密度（MVD）。结果移植后第7天，单纯移植组和联合移植组小鼠外周血细胞计数及BMMNC数均明显低于正常对照（P〈0．01）。第21天时联合移植组小鼠白细胞、红细胞及BMMNC数明显恢复，血小板数已接近正常对照组；单纯移植组小鼠外周血细胞数和BMMNC数虽然有所恢复，但其恢复程度明显弱于联合移植组。移植后第7、14和21天，联合移植组外周血细胞计数及BMMNC数均明显高于同期单纯移植组（P〈0．01或P〈0．05）。移植后第7、14、21天，单纯移植组和联合移植组小鼠骨髓造血组织面积、BMMNC中CD34^＋细胞百分比及骨髓组织MVD均明显低于正常对照组（P〈0．01），但联合移植组均高于同期单纯移植组（P〈0．01或P〈0．05）。结论联合成骨细胞移植能有效促进骨髓移植小鼠骨髓造血系统的重建。; 郑邈郑凯孙汉英徐慧珍刘文励; 关键词：骨髓移植成骨细胞造血系统小鼠

Notch通路与骨髓基质细胞衰老的关系探讨被引量：2: 2010年; 本研究探讨Notch通路活化与骨髓基质细胞衰老的关系。用脂质体转染法将Notch1胞内区(ICN)转入体外培养的小鼠骨髓基质细胞,转染后3天,用MTT法检测细胞增殖率;用流式细胞术检测细胞周期分布;用细胞化学法检测衰老相关β-半乳糖苷酶(senescence-associated β galactosidase,SA-β-gal)阳性细胞百分率;用RT-PCR及Western blot法分别检测周期蛋白激酶抑制因子P53、p21Cip1/Waf1基因水平和蛋白水平的表达。结果表明,ICN转染入小鼠骨髓基质细胞后3天,骨髓基质细胞增殖受抑,细胞周期阻滞在G1期,SA-β-gal阳性细胞百分率增加,无论从基因水平还是蛋白水平均显示P53、p21Cip1/Waf1表达增高,与未转染组及转空貭粒组相比差异均具有统计学意义。结论:Notch通路活化可导致骨髓基质细胞衰老,这种作用可能是通过增加p53、p21Cip1/Waf1蛋白的表达实现的。; 张可杰黄丽芳孙汉英朱艳肖毅黄梅刘文励; 关键词：NOTCH通路骨髓基质细胞

Notch信号在放射损伤小鼠骨髓基质细胞中的表达被引量：3: 2006年; 目的探讨小鼠骨髓基质细胞放射损伤后Notch信号的表达。方法应用小鼠骨髓基质细胞体外放射损伤模型，采用RT-PCR检测了小鼠骨髓基质细胞Notch1、Jagged1、Hes1基因的表达。结果正常小鼠骨髓基质细胞中未见Notch1受体、Notch1配体Jagged1、Notch通路活化的下游基因Hes1mRNA的表达，给予^60Coγ射线照射后2h即可见上述基因的表达，照射后4h达高峰，8～12h恢复正常。各组间比较，差异有统计学意义（P〈0．001）。结论γ射线作用于小鼠骨髓基质细胞后有Notch通路的活化。Notch通路参与了小鼠骨髓基质细胞的放射损伤过程。; 张可杰刘文励付劲蓉朱艳黄丽芳孙汉英周剑峰; 关键词：骨髓基质细胞 NOTCH信号

AGM区基质细胞对异基因骨髓移植后造血重建及GVHD的影响: 2006年; 目的探讨AGM区基质细胞对异基因骨髓移植后造血重建及GVHD的影响。方法以7．5Gy60Co γ射线照射的BALB／ C小鼠为骨髓移植模型,将小鼠分为四组,A:正常对照组、B:空白对照组、C:异基因骨髓单个核细胞单纯移植组、 D:异基因AGM区基质细胞和骨髓单个核细胞联合移植组,计数并比较各组小鼠骨髓移植后第4、11、18d的WBC及BMMNC 数目,观察并记录比较C、D两组小鼠的一般情况和存活时间及存活率等各项GVHD指标。结果联合移植组在照射后第 11、18d的白细胞及骨髓单个核细胞计数均高于单纯移植组,至第18d已趋近于正常。且联合移植组GVHD发生时间较晚, 存活率显著高于单纯移植组。结论 AGM区基质细胞不仅能加快造血重建,还能延缓移植后GVHD的发生,降低死亡率, 提高移植成功率。; 罗曼孙汉英徐慧珍周晟刘文励陶思; 关键词：AGM区基质细胞造血重建 GVHD

AGM区基质细胞促进小鼠胚胎干细胞向成血-血管干细胞分化的实验研究: 2006年; 目的探讨主动脉-性腺-中肾(AGM)区来源的基质细胞诱导胚胎干细胞(ESC)向成血-血管干细胞分化的促进作用。方法从孕11 d的小鼠胚胎AGM区分离、培养基质细胞,鉴定后用作支持细胞,与小鼠胚胎干细胞共同培养,通过原始细胞集落(BL-CFC)的形成情况及流式细胞仪检测CD34+/Flt-1+细胞比例,评价AGM区基质细胞对小鼠ESC-D3细胞系向成血-血管干细胞的定向诱导作用。结果在AGM区基质细胞的支持下,由ESC来源的CD34+细胞由(12.71±1.76)%增加到(39.71±3.76)%,并且CD34+/Flt-1+细胞比例明显提高,达到(26.59±1.77)%;同时由ESC来源的代表成血-血管干细胞的BL-CFC集落增加了3倍。结论AGM区基质细胞可促进胚胎干细胞向成血-血管干细胞分化,探明其机制对研究造血及血管发育机制有积极意义。; 付劲蓉刘文励周剑锋孙汉英冉丹郑邈; 关键词：胚胎干细胞造血发育血管发育

造血发育过程中造血祖细胞生物学特性的时空变化: 2009年; 本实验以小鼠胚胎主动脉-性腺-中肾(aorta-gonad-mesonephros,AGM)区、胎肝(fetalliver,FL)以及小鼠骨髓(bonemarrow,BM)为研究对象,研究各阶段造血祖细胞在发育过程中的c-kit的表达变化和部位迁移,以及不同发育阶段、不同造血部位来源c-kit+细胞的生物学特性。用流式细胞术检测小鼠胚胎10.5天(embryonic10.5,E10.5)、E11.5的AGM区,E12.5、E14.5、E16.5、E18的FL以及BM来源的单个核细胞中c-kit+细胞的比例。用磁珠分选法分离E10.5AGM区、E14.5FL以及BM来源c-kit+细胞,贴壁培养法分离小鼠E14.5FL基质细胞。建立体外Transwell共培养体系,比较不同来源的c-kit+细胞增殖、分化、迁移以及集落形成能力。流式细胞术检测发现:相对于BM,E10.5AGM区和E12.5FL中c-kit+细胞比例较高。进行体外培养,AGM区来源c-kit+细胞具有较强的增殖潜能,而FL、BM来源的c-kit+细胞在体外培养中更容易分化;AGM区和FL来源的c-kit+细胞比BM来源的c-kit+细胞在体外培养中具有更强的趋化迁移能力。集落形成能力方面,AGM区来源c-kit+细胞具有较强形成混合集落形成单位(CFU-Mix)的能力;FL、BM来源c-kit+细胞则能形成更多粒单系集落形成单位(CFU-GM)。以上结果表明,和FL、BM来源的c-kit+细胞相比,AGM区来源c-kit+细胞具有更强的体外增殖、多系分化潜能以及趋化迁移能力,在未来可能有着更广阔的应用前景。; 周琨黄丽芳胡采红刘文励孙汉英; 关键词：造血祖细胞造血发育主动脉-性腺-中肾区胎肝

辐射导致小鼠骨髓基质细胞衰老的机制研究被引量：4: 2006年; 目的探讨辐射导致骨髓基质细胞损伤的机制。方法应用BALB/c小鼠骨髓基质细胞体外放射损伤模型,分别于照射后24h、72h、1周、2周用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测细胞增殖率;用Giemsa染色法观察细胞形态;用流式细胞仪检测细胞周期;用细胞化学法检测衰老相关β半乳糖苷(SA-β-gal)阳性细胞百分率;用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测周期蛋白激酶抑制因子p21Cip1/Waf1和p53的基因表达。结果8Gy60Co-γ射线照射后骨髓基质细胞增殖降低;流式细胞仪结果显示照射后骨髓基质细胞发生G0/G1期阻滞,照射后1周G0/G1期细胞百分率由正常的66·95%±0·36%增加至89·83%±0·05%(P<0·01);细胞体积增大变平;照射后24h、72h、1周、2周SA-β-gal染色阳性细胞百分率照射组(20·33%±0·03%,34·33%±0·03%,86·33%±0·02%,95·67%±0·02%)显著高于正常组(P<0·01);p53、p21Cip1/Waf1基因表达水平分别于照射后24h或72h即见升高,一直持续至照射后两周,与正常对照组相比差异均有统计学意义(P<0·01)。结论γ射线作用于小鼠骨髓基质细胞后,导致小鼠骨髓基质细胞早期衰老,p53-p21Cip1/Waf1通路在其中可能发挥重要的作用。; 张可杰朱艳孙汉英黄丽芳付劲蓉刘文励; 关键词：骨髓细胞细胞衰老

Wnt和Notch信号通路在造血干细胞自我更新调控中的研究进展: 2006年; 造血干细胞的自我更新受自身内在基因和其所处微环境信号的共同调控。两条经典的发育调控通路Wnt,Notch信号通路在造血干细胞自我更新调控中起着至关重要的作用。目前研究证实Notch信号对Wnt信号介导的维持造血干细胞未分化状态是必需的。在此对Wnt和Notch信号在造血干细胞自我更新调控中的作用,尤其是二者的串话作一综述,并对其应用前景和今后的研究方向作出展望。; 朱艳刘文励; 关键词：造血干细胞自我更新 WNT信号通路 NOTCH信号通路

Tcf-1基因在再生障碍性贫血患者骨髓CD4^+T细胞中的表达: 2006年; 目的探讨Tef-1基因在再生障碍性贫血(再障)患者骨髓CD4^+T细胞中的表达情况。方法用Mini-MACS磁珠分选系统分离出骨髓CD4^+T细胞,用半定最RT-PCR方法检测Tef-1 mRNA在再障患者和正常人骨髓CD4^+T细胞中的表达。结果Tef-1 mRNA在再障患者骨髓CD4^+T细胞中的表达水平显著高于正常人(P＜0．01),且重型再障患者骨髓CD4^+T细胞中的表达水平明显高于非重型再障患者(P＜0．01)。结论与正常人相比,Tef-1基因在再障患者骨髓CD4^+T细胞中表达上调,且在重型再障患者骨髓CD4^+T细胞中表达水平更高,推测Tef-1基因表达水平的高低可能与骨髓CD4^+T细胞增殖活化的程度相关。; 郑邈刘文励孙汉英周剑峰付劲蓉罗莉; 关键词：再生障碍性贫血 CD4+T细胞

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