国家自然科学基金(81170704) 作品数:5 被引量:20 H指数:3 相关作者: 李龙坤 宋波 邓建平 李佳 张腾 更多>> 相关机构: 第三军医大学新桥医院 第三军医大学西南医院 第三军医大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
改良大鼠膀胱平滑肌细胞急性酶分离法及膜片钳应用 被引量:3 2013年 目的改良大鼠膀胱平滑肌细胞急性酶分离方法,为利用膜片钳技术研究膀胱疾病提供必要的技术平台。方法采用木瓜蛋白酶和胶原酶Ⅱ,采用一步法和二步法,分别消化5只新生和成年Wistar大鼠膀胱组织,在膜片钳工作台上分别对平滑肌细胞钠钙交换体电流行全细胞记录。结果建立了稳定的新生和成年大鼠膀胱平滑肌细胞急性酶分离方法。新生大鼠钠钙交换体(Na+/Ca2+exchanger,NCX)电流密度(pA/pF)为[(0.21±0.07),n=4],成年大鼠NCX电流密度为[(0.19±0.06),n=6],差异有统计学意义(P<0.05)。KB-R7943在5μm浓度下,有阻滞NCX正向模式的能力。结论本方法改良了大鼠膀胱平滑肌细胞急性酶分离,并成功应用于膜片钳技术检测。 钟晓 王青青 何鹏 邓建平 李龙坤 黄赤兵 宋波关键词:膀胱 平滑肌 膜片钳 二甲基亚砜通过降低炎症和氧化应激改善鱼精蛋白诱导的大鼠膀胱炎 被引量:4 2015年 目的探讨二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)对鱼精蛋白(protamine sulfate,PS)诱导的大鼠间质性膀胱炎(interstitial cystitis,IC)治疗作用。方法 SD雌性大鼠48只,按随机数字表法分为正常组、PS灌注组、PS+DMSO组、盐水灌注组(NS组),每组12只大鼠。正常组大鼠未给予任何处理;PS组用0.5 m L,30 mg/m L的PS膀胱内灌注并在膀胱内保留30 min;PS+DMSO组使用50%DMSO溶解PS,按照0.5 m L,30 mg/m L的PS膀胱内灌注并在膀胱内保留30 min;NS组用0.5 m L生理盐水膀胱灌注并保留30 min,各组大鼠每周处理1次,连续处理4周。4周后,HE和甲苯胺蓝染色用于病理学评分和肥大细胞计数;尿动力学和肌条实验被用于评价大鼠膀胱功能和肌肉收缩性改变;Western blot检测SOD2、GSH-Px、IL-6、IL-1B、TNF-α的表达量。结果与PS组相比,PS+DMSO组大鼠膀胱病理学评分[(3.00±0.00)vs(0.83±0.40),P<0.05]、肥大细胞计数[(19.66±2.16)vs(6.16±1.16),P<0.05]以及炎症因子IL-6、IL-1B和TNF-α表达(P<0.05)显著降低,而抗氧化应激酶(SOD2和GSH)显著恢复(P<0.05);在膀胱功能学上,与PS组相比,PS+DMSO组大鼠膀胱排尿频率[(24.83±3.06)vs(9.83±1.47),P<0.05]显著降低,排尿间隔[(2.42±0.37)vs(6.40±0.57),P<0.05]显著延长,肌肉收缩频率[(6.93±0.97)vs(4.94±0.73),P<0.05]显著降低。结论 DMSO可能通过降低炎症和氧化应激改善鱼精蛋白诱导的大鼠膀胱炎。 林斌 董兴有 赵江 王亮 龙州 朱景振 丁国林 李龙坤关键词:间质性膀胱炎 鱼精蛋白 膀胱炎 尿源干细胞促进脊髓损伤后神经源性膀胱恢复 被引量:7 2016年 目的观察大鼠神经源性膀胱模型功能和组织学变化,探索尿源干细胞对大鼠神经源性膀胱的修复治疗作用。方法 45只健康清洁的正常SD大鼠按照完全随机法分为正常组、损伤组、干细胞组,每组15只。治疗组建模7 d后,尾静脉注射尿源性干细胞。28 d后,尿动力学检测大鼠尿动力各项指标,肌条实验观察膀胱收缩情况,Western blot观察P2Y4在膀胱中的表达,TUNEL染色观察细胞凋亡情况。结果干细胞组大鼠膀胱湿质量(0.31±0.01)g和膀胱湿质量/体质量值(1.19±0.41)、尿动力指标[收缩时间(112.75±16.52)s、离体膀胱逼尿肌肌条指标[收缩时间(16.47±2.29)s]、膀胱肌细胞凋亡率(28.22±11.08)%均优于损伤组[膀胱湿质量(0.66±0.07)g,膀胱湿质量/体质量值(2.30±0.26),尿动力指标:收缩时间(59.00±5.68)s,离体膀胱逼尿肌肌条指标:收缩时间(19.80±3.77)s,膀胱肌细胞凋亡率(59.80±14.18)%]。Western blot检测结果显示干细胞组的蛋白P2Y4的表达低于损伤组。结论尿源干细胞可促进脊髓损伤后大鼠神经源性膀胱的功能恢复。 张腾 董兴有 刘骞 吴超 李佳 夏六兵 胡晓燕 宋波 邓建平 李龙坤关键词:神经源性膀胱 凋亡 干扰素α-1b联合环氧化酶-2抑制剂对肾癌细胞及其裸鼠移植瘤的抑制作用 被引量:3 2016年 目的探讨干扰素α-1b(interferonα-1b,IFNα-1b)联合环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)抑制剂对人肾癌ACHN细胞及其裸鼠肾癌移植瘤生长的抑制作用及其相关机制。方法 ACHN细胞及裸鼠根据用药不同分为IFNα-1b组、NS398组(COX-2抑制剂)、联合用药组及空白对照组。CCK8检测用药24 h和48 h后各组细胞增殖抑制率;Western blot检测用药前后各组细胞bcl-xl、COX-2蛋白表达变化。测量并记录各组裸鼠移植瘤的大小,免疫组化方法检测裸鼠移植瘤组织中VEGF的表达。结果 2种药物对ACHN细胞均有抑制作用,且呈剂量依赖性,联合用药优于单用(P<0.05);IFNα-1b和NS398均能促进肿瘤细胞凋亡,联合用药促凋亡效果优于单用(P<0.05);Western blot结果显示用药各组的bcl-xl、COX-2蛋白表达与对照组相比均下调,联合用药的抑制效果优于单用(P<0.05)。免疫组化显示用药各组的裸鼠移植瘤中VEGF均受抑制,联合组抑制作用最明显(P<0.05)。结论 IFNα-1b联合COX-2抑制剂对ACHN细胞增殖及其移植瘤生长具有一定的抑制作用。 夏六兵 龙洲 张腾 董兴有 李佳 吴超 刘骞 宋波 李龙坤关键词:肾癌 COX-2抑制剂 裸鼠 膀胱ICC细胞的研究现状和展望 被引量:3 2012年 膀胱ICC细胞(Interstitial cells of Cajal in bladder)早在上个世纪已被发现,与胃肠道ICC细胞同族,膀胱ICC以自发电活动为特性,源于胞内贮存钙离子释放和钙激活的氯同道开放引起自发短暂去极化。膀胱ICC细胞起初被理解为起搏细胞,其自发的电活动作为起搏器引起下游平滑肌的收缩,这种假说尚缺乏立足的直接证据,目前认为ICC细胞仅仅是膀胱平滑肌收缩活动的调节器,与上皮-传入神经以及神经-平滑肌的信号传递密切相关。病理状态下ICC细胞的作用似乎比生理状态下更为突出,例如膀胱过度活动症,多篇文献报道膀胱过度活动症患者膀胱的ICC细胞数目比正常增多,而且其平滑肌的收缩对酪氨酸激酶受体(tyrosine kinase receptor,c-Kit)拮抗剂格列卫更加敏感。未来膀胱ICC细胞的研究集中在阐明病理及生理状态下ICC的作用机制和信号通路。 王凯 邓建平 宋波 李龙坤关键词:C-KIT 逼尿肌 膀胱过度活动症