国家自然科学基金(30400205)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
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- 肝细胞核因子4α对肝肿瘤细胞功能基因表达的影响被引量：3
- 2007年
- 目的利用AdEasy系统构建共同表达人肝细胞核因子4α(HNF4α)和绿色荧光蛋白(GFP)的复制缺陷型重组腺病毒——AdHNF4α,体外感染人肝肿瘤细胞株,观察HNF4α表达上调对肝肿瘤细胞的肝细胞功能基因表达的影响。方法通过逆转录(RT)-PCR方法获取目的基因HNF4αcDNA片段,利用腺病毒载体AdEasy系统构建腺病毒质粒pAdHNF4α,经293细胞包装后得到复制缺陷型重组腺病毒AdHNF4α;将AdHNF4α体外感染人肝肿瘤细胞株HepG2和Hep3B,通过RT-PCR、Western印迹法检测HNF4α在上述细胞中的表达;同时观察外源导入HNF4α对肝肿瘤细胞的肝细胞功能基因表达的影响。结果连接、重组后通过酶切和测序法筛选出病毒质粒pAdHNF4α;经293细胞包装,4 d后观察到GFP明显表达,反复扩增最终获得约1×10^(10)efu/ml滴度的重组腺病毒AdHNF4α;AdHNF4α体外感染人肝肿瘤细胞72 h后,有约90%以上的细胞表达GFP,HNF4αmRNA表达明显上调,蛋白表达分别增加3.4倍(HepG2)和5.2倍(Hep3B);同时肝细胞相关功能基因包括载脂蛋白、细胞色素P450家族、谷氨酰胺合成酶、磷酸烯醇丙酮酸羧激酶及葡萄糖-6-磷酸酶mRNA表达均明显上调,且肿瘤细胞凋亡率也明显增加。结论利用重组腺病毒载体可将外源HNF4α基因导入肝肿瘤细胞并维持高效表达,同时正常肝细胞重要功能基因表达亦增强,肿瘤细胞生物学特性明显改善,这将为基因修饰移植肝细胞研究提供新思路。
- 尹川林勇沈健伟张新王要军岳海燕谢渭芬曾欣
- 关键词：肝细胞核因子肝肿瘤基因
- 肝细胞核因子1α与肝脏功能调控
- 2010年
- 曾欣林勇谢渭芬
- 关键词：细胞生物学功能转录因子基因表达肝功能
