江苏省自然科学基金(BK2009440)
- 作品数：5 被引量：10H指数：2
- 相关作者：潘世扬徐建黄蕾孙瑞红彭珊珊更多>>
- 相关机构：南京医科大学江苏省人民医院南京市胸科医院更多>>
- 发文基金：江苏省实验诊断学重点实验室基金江苏省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 慢病毒介导KSHV vIL-6基因稳定表达的血管内皮细胞株的建立被引量：2
- 2012年
- 目的建立慢病毒介导且稳定表达病毒白细胞介素6(viral interleukin-6,vIL-6)蛋白的血管内皮细胞株。方法以质粒pvIL-6-Flag为模板,PCR扩增vIL-6基因,克隆至慢病毒载体p3DLV,经酶切和测序鉴定后,将重组质粒与慢病毒辅助包装元件质粒共转染293T细胞,构建含vIL-6基因的重组慢病毒。重组慢病毒感染血管内皮细胞EA.hy926,经潮霉素筛选,获得稳定表达细胞株,western blot鉴定vIL-6蛋白的表达。结果酶切鉴定和基因测序证实长度为615 bp的vIL-6基因成功克隆至慢病毒表达载体;重组慢病毒经包装、纯化后测得滴度为1.0×107 TU/mL。重组慢病毒感染EA.hy926细胞,经潮霉素筛选,形成生长形态良好的单克隆细胞株EA.hy926-vIL-6。western blot鉴定该细胞株可稳定表达vIL-6蛋白。结论建立了稳定表达vIL-6的EA.hy926细胞株,为进一步研究vIL-6的生物学功能及致病机制提供了细胞模型。
- 许雨乔徐建潘世扬孙瑞红黄蕾彭珊珊
- 关键词：慢病毒血管内皮细胞
- 病毒白细胞介素6对甲基转移酶1表达的影响
- 2013年
- 目的:观察病毒白细胞介素6(viral interleukin-6,vIL-6)对甲基转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)表达的影响。方法:vIL-6真核表达质粒转染293T细胞,荧光定量RT-PCR和Western blot法检测DNMT1表达的变化,比色法检测DNMT1的活性。结果:荧光定量RT-PCR和Western blot均表明vIL-6可显著促进DNMT1的表达,且vIL-6能上调DNMT1的活性。结论:vIL-6能诱导DNMT1的表达,可能是卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)致DNA甲基化异常,促进肿瘤发生发展的分子机制之一。
- 徐建许雨乔潘世扬彭姗姗黄蕾孙瑞红
- 关键词：卡波济肉瘤相关疱疹病毒
- 血浆DNA定量检测在晚期肺癌患者个体化治疗中的应用被引量：6
- 2010年
- 目的通过监测晚期肺癌患者化疗过程中血浆DNA水平的变化,探讨其在疗效预测以及个体化治疗中的应用。方法采集35名晚期肺癌患者化疗前、后静脉血,用磁珠法提取血浆循环DNA和内参照质粒DNA,双重荧光定量PCR技术进行DNA定量检测,以100名体检健康者为对照。结果晚期肺癌患者化疗前血浆DNA平均含量为66.4（33.1-105.0）ng/ml,显著高于健康对照组血浆DNA平均含量22.4（16.2-30.0）ng/ml（P〈0.01）。一线药物化疗后,部分缓解组肺癌患者血浆DNA值较化疗前显著下降（P〈0.01）,且与病情稳定组、病情进展组患者血浆DNA值有显著差异（P均〈0.05）,而与健康对照组已无差异。生存曲线分析显示,化疗后血浆DNA〈50 ng/ml的患者生存率高于血浆DNA≥50 ng/ml的患者（P〈0.01）。结论血浆DNA的变化可敏感地反映晚期肺癌患者化疗疗效,在肿瘤个体化治疗中发挥重要作用。
- 夏文颖丁清清潘世扬束永前徐婷陆雅春耿雁陈丹黄珮珺黄蕾徐建
- 关键词：晚期肺癌化疗个体化治疗血浆DNA
- 病毒白细胞介素-6对抑癌基因p16启动子区甲基化及蛋白表达的影响被引量：2
- 2012年
- 目的观察病毒白细胞介素-6(viral interleukin-6,vIL-6)对抑癌基因p16启动子区甲基化及蛋白表达的影响。方法以vIL-6真核表达质粒转染293T细胞(转染组)为实验,空载体转染的293T细胞(空载体组)和未转染的293T细胞(未转染组)为对照,3组均采用Western blot法检测DNA甲基转移酶1的表达情况,甲基化特异性PCR法检测p16启动子区甲基化状态,荧光定量RT-PCR和Western blot法检测p16基因的表达。结果转染组DNA甲基转移酶1蛋白表达较未转染组和空载体组增加;转染组p16基因启动子区出现甲基化改变;转染组p16mRNA表达量明显低于未转染组和空载体组,差异有统计学意义(P<0.05);转染组P16蛋白表达较未转染组和空载体组降低。结论 vIL-6可上调DNA甲基转移酶1表达,导致抑癌基因p16启动子区甲基化,抑制p16基因表达;vIL-6所致的DNA甲基化改变,可能是其致瘤机制之一。
- 吴静许雨乔徐建潘世扬孙瑞红黄蕾
- 关键词：P16卡波济肉瘤相关疱疹病毒
- 甲基化CpG结合域重组蛋白的表达与鉴定
- 2012年
- 目的:在大肠杆菌中表达甲基化CpG结合域(methyl-CpG-binding domain,MBD)重组蛋白。方法:对人甲基化CpG结合蛋白2(methyl-CpG-binding protein 2,Mecp2)的MBD区行密码子优化,将人工合成的DNA克隆至原核表达载体pGS21a,在大肠杆菌E.coli Rosetta(DE3)中诱导表达,通过SDS-PAGE和Western blot鉴定蛋白表达;镍亲和层析柱纯化重组蛋白。表面等离子共振分析重组MBD蛋白与甲基化DNA的结合能力。结果:酶切和核酸测序证实,成功构建了含密码子优化的MBD基因的原核表达载体。SDS-PAGE和Western blot结果显示,MBD重组蛋白在大肠杆菌中得到表达。亲和层析法纯化后获得了相对分子量为38 000的MBD重组蛋白。SPR分析显示MBD重组蛋白能特异结合甲基化DNA。结论:成功构建含密码子优化的MBD基因的原核表达载体,MBD重组蛋白能在大肠杆菌中表达。
- 徐建潘世扬许雨乔孙瑞红黄蕾彭珊珊
- 关键词：原核表达
