国家自然科学基金(30400220)
- 作品数：6 被引量：9H指数：2
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- 相关机构：华中科技大学武汉市普爱医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 重组腺相关病毒介导的VLDLR基因对2型糖尿病大鼠脂代谢紊乱的作用被引量：2
- 2009年
- 目的:探索增加极低密度脂蛋白受体(VLDLR)基因表达对2型糖尿病大鼠脂代谢紊乱和动脉粥样斑块的影响。方法:构建携带人VLDLR基因的重组腺相关病毒载体(rAAV-VLDLR)。高脂高糖饮食8周后尾静脉注射小剂量链脲佐菌素(STZ)造2型糖尿病动物模型,VLDLR治疗组大鼠注射rAAV-VLDLR,糖尿病对照组注射rAAV-0。RT-PCR及Western blotting分别检测大鼠骨骼肌、心脏、主动脉、肝脏、脂肪VLDLR mRNA及蛋白表达水平。检测VLDLR基因对血糖、胰岛素、稳态模型胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、脂蛋白脂酶(LPL)活性及主动脉粥样斑块的影响。结果:rAAV-0组大鼠骨骼肌、主动脉、脂肪VLDLR mRNA及蛋白水平低于正常组,VLDLR治疗组VLDLR mRNA及蛋白水平较rAAV-0组有不同程度增加。VLDLR治疗后4、8周的TG及4、8、12周的TC明显降低(P<0.05),8周HOMA-IR明显降低(P<0.05),LPL活性明显增强(P<0.05),主动脉内膜损伤减轻。结论:增加VLDLR基因表达对改善2型糖尿病大鼠脂代谢紊乱效果显著,并可在此基础上减轻主动脉粥样斑块程度。
- 刘永健张木勋张建华徐咏平孙婷婷杨雁李昌林袁刚
- 关键词：LDL基因疗法腺病毒糖尿病
- 携带全长人极低密度脂蛋白受体基因的重组腺相关病毒的构建被引量：2
- 2007年
- 目的构建携带全长人极低密度脂蛋白受体(very low-density lipoprotein receptor,VLDLR)基因的重组腺相关病毒。方法通过设计含有特定酶切位点的引物,从人的骨骼肌中提取RNA,合成cDNA,扩增人VLDLR全长基因5′端约1 000 bp的DNA,并以含人VLDLR基因片段的质粒为模板,合成人VLDLR全长基因近3′端约1 600 bp的DNA,通过粘端连接将2片段连接成全长VLDLR后,再将其连接到重组腺相关病毒包装系统的特定载体raav-UF1上,用293细胞作为包装细胞,配合重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus,rAAV)相关质粒:辅助质粒(phelp-er)和包装质粒(Pxx2),包装大量携带人VLDLR基因的重组腺相关病毒(raav-VLDLR-UF1),以含绿色荧光蛋白(greenfluorescence protein,GFP)基因的重组腺相关病毒(raav-GFP-UF1)为对照,测定raav-VLDLR-UF1及raav-GFP-UF1的滴度。结果raav-GFP-UF1和raav-VLDLR-UF1的滴度均为4×1011pfu/ml,达到实验要求。结论成功构建携带全长人VLDLR基因的重组腺相关病毒,有望为2型糖尿病高脂血症的基因治疗提供一种新的方法。
- 徐咏平张木勋袁刚
- 关键词：人骨骼肌重组腺相关病毒
- 重组腺相关病毒介导的VLDLR基因转移改善2型糖尿病大鼠大脑海马tau蛋白Alzheimer病样改变
- 2010年
- 目的:Tau蛋白过度磷酸化是Alzheimer病(AD)的重要特征,在2型糖尿病中tau蛋白呈AD样过度磷酸化改变。本研究运用极低密度脂蛋白受体(VLDLR)基因转移干预2型糖尿病大鼠(T2DM),观察海马tau蛋白磷酸化修饰水平的变化。方法:将8周龄雄性Wistar大鼠随机分为3组,正常对照组(CTL)以普通饮食喂养,2型糖尿病组(T2DM)及2型糖尿病处理组(T2DM+VLDLR)。葡萄糖氧化酶法检测血浆血糖,放免法检测血浆胰岛素,Western blotting分析海马内总tau、tau蛋白上部分位点磷酸化及VLDLR水平。[γ-32P]标记的ATP和特异性底物肽检测海马内胰岛素信号转导系统中的关键酶糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)活性。结果:T2DM组大鼠经VLDLR基因处理之后(T2DM+VLDLR)与对照组(CTL)海马回总tau蛋白水平无差异,T2DM组tau(pS214)、tau(pS396)、tau(pS422)及tau(pSpS199/202)位点上的磷酸化水平显著高于CTL组,而在tau-1位点免疫反应显著弱于CTL组;运用VLDLR基因处理之后,tau蛋白上tau(pT217)、tau(pS396)及tau(pSpS199/202)位点磷酸化水平显著下降,tau-1位点显著增强,但tau(pS214)及tau(pS422)位点磷酸化水平无显著下降。免疫组化结果检测到T2DM组大鼠海马区tau蛋白在Ser214位点上磷酸化程度较CTL组显著增高,运用VLDLR基因处理之后,tau蛋白磷酸化程度逆转不明显。3组大鼠海马细胞内总GSK-3β无显著差异,但T2DM组GSK-3β磷酸化程度显著下降,运用VLDLR基因处理后GSK-3β磷酸化程度显著上升。结论:重组腺相关病毒介导的VLDLR基因处理可能是通过抑制GSK-3β活性来改善2型糖尿病大鼠海马tau蛋白上部分位点的Alzheimer病样过度磷酸化状态。
- 杨雁孙婷婷徐永平张建华张木勋张晓洁刘永健袁刚
- 关键词：TAU蛋白质类
- 胰岛素对3T3-L1脂肪细胞中极低密度脂蛋白受体基因表达的影响被引量：5
- 2007年
- 体外培养3T3-L1细胞分化模型,研究不同浓度胰岛素及慢性胰岛素刺激对3T3-L1脂肪细胞中极低密度脂蛋白受体(VLDLR)基因表达的影响.在不同浓度胰岛素及胰岛素慢性刺激的干预下,用半定量RT-PCR检测细胞VLDLRmRNA水平的变化.微量化GOD-PAP法检测培养基中残存的葡萄糖.在细胞诱导分化过程中,胰岛素浓度的增高促进VLDLR的表达;胰岛素慢性刺激下,VLDLR表达因浓度差异呈现不同变化.研究结果表明,胰岛素的浓度及慢性刺激对3T3-L1脂肪细胞的成熟和VLDLR基因的表达有显著作用,而胰岛素抵抗明显减低成熟脂肪细胞VLDLR的表达.
- 孙婷婷张木勋张建华袁刚
- 关键词：脂肪细胞胰岛素极低密度脂蛋白受体基因表达调控
- 极低密度脂蛋白受体及其亚型在2型糖尿病大鼠组织中的分布与表达
- 2008年
- 目的观察极低密度脂蛋白受体(VLDLR)的总量及两种亚型在正常(NC)大鼠与2型糖尿病(T2DM)大鼠各种组织(心、脑、肾、肌肉、脂肪)中的分布与表达。方法取NC大鼠与T2DM大鼠的各组织,提取mRNA,用半定量PCR方法进行扩增。结果T2DM大鼠各组织中的VLDLR总量与NC组相比有不同程度下降,在脑、肾、肌肉、脂肪组织中下降明显(P<0.01)。在脑、肾脏组织中I型与II型VLDLR均有明显下降,肌肉组织以I型下降为主(P<0.001),脂肪组织以II型下降为主(P<0.001)。结论T2DM胰岛素抵抗与血脂紊乱状态影响了VLDLR的分布与表达。
- 孙婷婷张木勋徐咏平张建华袁刚
- 关键词：极低密度脂蛋白受体基因表达糖尿病
- 人组织激肽释放酶基因治疗对2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗和肾脏并发症的影响被引量：1
- 2008年
- 目的探讨人组织激肽释放酶（HK）基因对2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗和慢性肾脏并发症的治疗作用及其机制。方法在雄性Wistar大鼠以高脂高糖饲料加小剂量链脲佐菌素建立2型糖尿病动物模型。以重组腺相关病毒为载体介导HK基因（HK组）或对照基因LacZ（LacZ组）在糖尿病大鼠体内表达，观察实验动物血压、血糖、血胰岛素、尿微量白蛋白、尿渗透压的变化。计算稳态模型评估的胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）、内生肌酐清除率（Ccr）和尿白蛋白排泄率（UAER）。Western印迹法检测肝脏、骨骼肌磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）的110亚基（p110）和蛋白激酶B（Akt／PKB）第308位苏氨酸（pThr308）的磷酸化水平。肾脏切片作形态学分析。结果HK组第2周开始出现血压下降，并一直持续到实验结束（12周时），而LacZ组血压无明显下降。HK组和LacZ组大鼠空腹血糖无明显变化[（13．09±3．01vs13．58±2．88）mmol／L]，但两组空腹血胰岛素水平[（8．19±2．45vs13．85±3．76）mIU／L，P〈0．01]和HOMA—IR（4．76±0．33vs8．36±0．48，P〈0．01）差异有统计学意义。HK组大鼠肌肉和肝脏p110和pThr308的表达明显增加。HK组UAER[（7．90±2．76vs19．07±9．17）mg／24h，P〈0．01]和Ccr（0．16±0．12vs0．43±0．25，P〈0．01）明显低于LacZ组，而尿渗透压明显高于LacZ组[（1150．3±301．9vs737．8±184．5）mmol／L，P〈0．05]。肾脏病理学结果显示LacZ组肾小球和肾小管损害明显，而HK组明显减轻。结论重组腺相关病毒介导HK基因表达可能通过增加PI3K／Akt磷酸化明显改善2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗，同时明显减轻糖尿病肾脏损害。
- 袁刚邓娟娟王涛赵春霞肖啸汪培华汪道文
- 关键词：重组腺相关病毒载体组织激肽释放酶胰岛素抵抗
