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广东省科技计划工业攻关项目(2003C32729)

作品数:2 被引量:8H指数:2
相关作者:王巧愚王欣璐王全师李洪生吴湖炳更多>>
相关机构:南方医科大学南方医院广州军区广州总医院中山大学附属第三医院更多>>
发文基金:广东省科技计划工业攻关项目国家自然科学基金广东省自然科学基金更多>>
相关领域:医药卫生生物学更多>>

文献类型

  • 1篇中文期刊文章

领域

  • 1篇生物学

主题

  • 1篇端粒
  • 1篇端粒酶
  • 1篇端粒酶逆转录...
  • 1篇逆转
  • 1篇逆转录
  • 1篇逆转录病毒
  • 1篇逆转录病毒载...
  • 1篇逆转录酶
  • 1篇人端粒酶
  • 1篇人端粒酶逆转...
  • 1篇转录
  • 1篇转录酶
  • 1篇靶向
  • 1篇RNA干扰
  • 1篇病毒载体
  • 1篇RNAI

机构

  • 1篇广州军区广州...
  • 1篇中山大学附属...
  • 1篇南方医科大学...

作者

  • 1篇王全师
  • 1篇王欣璐
  • 1篇王巧愚
  • 1篇李华

传媒

  • 1篇南方医科大学...

年份

  • 1篇2006
2 条 记 录,以下是 1-1
排序方式:
靶向人端粒酶逆转录酶进行RNAi的逆转录病毒载体的构建被引量:2
2006年
目的构建靶向性干扰人端粒酶逆转录酶表达的特异性小干扰RNA的真核表达载体。方法采用PCR法分别扩增增强型绿色荧光蛋白的DNA序列、U6启动子序列和靶向性干扰人端粒酶逆转录酶的特异性小干扰RNA对应的DNA序列,随后将与之相应的DNA序列片断依次克隆入真核表达载体pLXSN中,并通过限制性内切酶和测序对该重组表达载体进行鉴定。以荧光显微镜和利用流式细胞仪分析重组病毒表达EGFP蛋白的情况。以MTT方法检测初步分析重组病毒对人Hela细胞的RNAi效果。结果限制性内切酶酶切和测序结果均表明成功构建了靶向人端粒酶逆转录酶的小干扰RNA的逆转录病毒表达载体pLXSN/EGFP-U6-siTERT。以磷酸钙共转染法制备的重组逆转录病毒滴定了病毒滴度后,重组病毒感染人Hela细胞24h时用流式细胞仪测得EGFP表达的阳性率为24.1%。重组逆转录病毒感染人Hela细胞48h时,MTT实验测得细胞死亡率为53.2%。结论成功构建了针对人端粒酶逆转录酶小干扰RNA的逆转录病毒表达载体pLXSN/EGFP-U6-siTERT,并制备了重组逆转录病毒,初步观察了效应,为进一步利用小干扰RNA技术研究肿瘤的基因治疗奠定了基础。
王全师王欣璐李华王巧愚王全颖杨广笑
关键词:RNA干扰逆转录病毒载体人端粒酶逆转录酶
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