山东省自然科学基金(ZR2010CM026)
- 作品数：2 被引量：13H指数：2
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- 茶树PPO融合蛋白真核表达载体的构建与表达被引量：2
- 2012年
- 以迎霜品种茶树基因组为模板,利用高保真聚合酶pfu,通过PCR方法扩增得到茶树PPO基因的编码区序列。通过设计酶切引物将其成功融合至真核表达载体pPICZa中,构建出茶多酚氧化酶的融合蛋白真核表达载体pPICZa-PPO,并将其转化进入巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115中,成功筛选出多个阳性转化子。对阳性转化子进行甲醇诱导,采用Western-Blotting方法在培养液中成功检测到诱导表达的目的蛋白。酶活检测结果也显示诱导产物具有较高的相对酶活性,能够正确发挥酶蛋白的生物功能。
- 王乃栋张丽霞黄晓琴韩晓阳李智
- 关键词：茶树多酚氧化酶巴斯德毕赤酵母
- 茶树多酚氧化酶基因的生物信息学分析及原核表达被引量：11
- 2011年
- 通过PCR方法扩增出迎霜品种茶多酚氧化酶(PPO)的编码区序列,并将其登录于GenBank,注册号为GQ214317。生物信息学分析表明,该基因编码区全长1 800 bp,编码599个氨基酸,分子式为C3008H4677N813O900S18,存在两个铜离子结合域,没有跨膜区;进化树分析表明,茶与毛叶茶亲缘关系最近。成功构建了原核表达载体pET-ppo,并转化E.coli BL21(DE3),实现了PPO的原核表达。SDS-PAGE电泳检测结果表明,在71 KD处有一条特异蛋白条带,与预测大小相符。
- 王乃栋张丽霞向勤锃李巍巍
- 关键词：多酚氧化酶生物信息学分析原核表达
