山东省自然科学基金(ZR2010CM011)
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
- 相关作者：吴翠娇王斌赵巍张姗姗王伟伟更多>>
- 相关机构：青岛大学更多>>
- 发文基金：山东省自然科学基金教育部留学回国人员科研启动基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- MB染色检测PKA调节亚基对烟曲霉萌发孢子活性的影响
- 2017年
- 烟曲霉是一种机会性致病真菌,肺巨噬细胞(AM)通过活性氧物质(ROS)清除萌发的烟曲霉孢子。蛋白激酶A(PKA)参与调节多种生物体内的氧化损伤应答反应。本实验通过亚甲基蓝(MB)染色和再培养试验,检测烟曲霉野生株(WT)与PKA调节亚基(pkaR)缺失株(ΔpkaR)萌发孢子的活性,分析pkaR基因对烟曲霉萌发孢子抗氧化损伤的影响。实验结果表明,ΔpkaR株的萌发孢子,对于氧化压力有更强的抵抗能力,表明pkaR基因参与调节烟曲霉对于氧化损伤的抵抗。
- 张姗姗吴翠娇赵巍邵建业王伟伟牛倩倩王斌
- 关键词：烟曲霉
- 巢式-重叠PCR构建金属还原酶基因缺失片段
- 2013年
- 目的利用重叠PCR构建敲除烟曲霉金属还原酶基因所需的融合片段,并检测巢式PCR对重叠PCR的影响。方法比对烟曲霉金属还原酶基因上下游的同源性,在其同源性较好的区域设计引物,扩增出金属还原酶基因上下游片段。同时,利用PCR获得潮霉素抗性标记基因的两个片段。再通过巢式PCR将基因上下游片段与相应的标记基因片段分别连接,获得转化所需的融合片段。获得的融合片段用凝胶电泳和测序进行鉴定。结果获得的融合片段经凝胶电泳检测大小正确。经测序鉴定证实融合片段正确连接并与理论序列有很高的一致性。与常规重叠PCR相比,巢式PCR的引入减少了杂带量。结论获得构建金属还原酶基因缺失所需的融合片段,为实现烟曲霉金属还原酶基因的敲除与功能研究奠定基础。巢式-重叠PCR可以提高产物的特异性。
- 牛倩倩吴翠娇赵巍喻娜娜王斌
- 关键词：曲霉菌属聚合酶链反应氧化还原酶类
- 金属还原酶FreB2对烟曲霉铁吸收及氧化压力应答的影响被引量：1
- 2016年
- 利用构建的烟曲霉金属还原酶基因(AFUA-1G00350,Fre B2)缺失突变株,对烟曲霉金属还原酶基因Fre B2功能进行初步研究,为揭示该基因与烟曲霉的致病关系提供依据。比较野生株和基因缺失突变株在AMM和无铁AMM液体培养基中生长时高铁还原酶的活性,绘制不同时间野生株和基因缺失突变株在AMM和无铁AMM液体培养基中生长时高铁还原酶活性曲线。利用Real-Time PCR方法分析Sre A、Sid A、Fet C、Ftr A和Fre B这些与铁的吸收相关基因的mRNA的表达量变化。测定野生株和基因缺失突变株对氧化压力的敏感性及胞内活性氧物质含量。不论在AMM液体培养基中还是在无铁AMM液体培养基中培养时,突变株高铁还原酶的活性都明显高于野生株高铁还原酶活性。与野生株相比培养60 h时,突变株Sre A、Sid A、Fet C、Ftr A和Fre B这些与铁的吸收相关基因的表达量出现明显上调。氧化压力敏感性实验显示,基因缺失突变株对H2O2的敏感性显著增强,同时胞内活性氧物质含量明显增多。金属还原酶基因Fre B2在烟曲霉铁吸收及氧化压力应答过程中发挥作用;烟曲霉与铁吸收相关基因之间存在功能互补效应。
- 王伟伟吴翠娇赵巍张姗姗王斌
- 关键词：烟曲霉REAL-TIME活性氧物质
