国家重点基础研究发展计划(2003CB716804)
- 作品数：3 被引量：11H指数：3
- 相关作者：胡薇冯正卢艳黄成玉鞠川更多>>
- 相关机构：中国疾病预防控制中心华东理工大学上海交通大学更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划美国国立卫生研究院基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 日本血吸虫童虫cDNA文库免疫学筛选及阳性克隆的初步鉴定被引量：5
- 2009年
- 用日本血吸虫感染14d的小鼠血清免疫筛选日本血吸虫童虫cDNA文库,将获得的7个阳性克隆进行核苷酸序列同源性分析,结果显示其中一个克隆所测序列与日本血吸虫HSP70有很高的同源性(分值score=650),另有2个克隆所测序列分别与已报道的日本血吸虫FABP(score=229)和含锌指结构的CDGSH型蛋白样蛋白(score=246)明显同源,其余4个未找到已知的同源序列,为新基因。4个新基因序列已被GenBank接受(登录号为EU121231、202646、202647和202648)。
- 段新伟傅颖慧卢艳黄成玉鞠川徐斌许学年冯正胡薇
- 关键词：日本血吸虫童虫CDNA文库免疫筛选
- 日本血吸虫弹性蛋白酶基因的克隆、表达及虫期特异性转录被引量：3
- 2007年
- 目的克隆和表达日本血吸虫弹性蛋白酶基因(SjCE-2b),纯化表达重组蛋白,并研究该基因在各虫期的转录情况。方法预测SjCE-2b基因的编码序列。绘制血吸虫尾蚴弹性蛋白酶家族成员系统进化树。用RT-PCR和蛋白质印迹(Western blotting)分析SjCE-2b基因在日本血吸虫各期转录的差异。将RT-PCR扩增得到的SjCE-2b基因亚克隆至载体pET28b,在大肠埃希菌中诱导表达得到重组蛋白rSjCE-2b,用组氨酸标签亲和层析法纯化表达产物,Western blotting分析其免疫原性。结果在虫卵、子胞蚴和成虫检测到SjCE-2b基因转录本(714bp),表达的重组蛋白rSjCE-2b,相对分子质量约为Mr 31000,与预测的融合蛋白相对分子质量相符。构建了重组原核表达载体SjCE-2b/pET28b,并在大肠埃希菌中表达。纯化后的重组蛋白rSjCE-2b可被日本血吸虫感染的兔血清识别。结论在日本血吸虫虫卵、子胞蚴和成虫发现SjCE-2b基因转录本。SjCE-2b基因有可能成为潜在的日本血吸虫病疫苗候选抗原和药物及诊断靶点。
- 黄成玉卢艳王玮鞠川冯正杨忠王升跃胡薇
- 关键词：日本血吸虫原核表达
- 日本血吸虫腺嘌呤磷酸核糖转移酶基因的克隆、表达及虫期表达差异分析被引量：3
- 2011年
- 目的克隆和表达日本血吸虫腺嘌呤磷酸核糖转移酶基因1(SjAPRT1),并研究该基因在日本血吸虫不同发育阶段的转录和蛋白表达情况。方法根据SjAPRT1基因序列(GenBank登录号为AAW24796)设计引物,RT-PCR扩增目的基因,分析其在日本血吸虫各发育阶段转录本差异。将目的基因亚克隆至载体pET28a(+),转化至大肠埃希菌BL21(DE3)菌株,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,组氨酸亲和层析法纯化表达产物,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析纯化结果。纯化的蛋白SjAPRT1免疫新西兰白兔制备免疫兔血清,蛋白质印迹(West-ern blotting)分析其免疫反应性及其在日本血吸虫不同发育阶段表达的差异。结果在虫卵、尾蚴、童虫和成虫期均检测到SjAPRT1转录本(561 bp),获得了重组SjAPRT1蛋白。Western blotting分析表明,纯化的重组蛋白SjAPRT1可被日本血吸虫感染兔血清识别,虫卵、童虫和成虫粗抗原可被SjAPRT1免疫兔血清识别,在Mr 25 000处有特异性条带。结论日本血吸虫SjAPRT1蛋白在虫卵、童虫和成虫各期均有表达,并具有一定的免疫反应性。
- 孔娟冯正徐斌邓王平杨忠胡薇
- 关键词：日本血吸虫免疫反应性
