北京市教委科技发展计划(KM200610025029)
- 作品数：1 被引量：1H指数：1
- 相关作者：徐有青朱圣韬张澍田孙秀静更多>>
- 相关机构：首都医科大学附属北京天坛医院首都医科大学附属北京友谊医院更多>>
- 发文基金：北京市教委科技发展计划北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测人c-myc基因方法的建立被引量：1
- 2009年
- 目的构建含有c-myc基因的重组质粒并以其为模板,建立以SYBR GreenⅠ染料为荧光指示剂的实时荧光定量PCR(FQ-PCR)技术检测c-myc的标准曲线,为FQ-PCR准确检测c-myc奠定基础。方法用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法从人食管鳞癌组织的总mRNA中反转录扩增c-myc cDNA,将纯化的PCR产物与pGEM-T Easy载体进行连接,转化宿主菌DH-5α,然后挑选阳性克隆重组质粒,分别用PCR扩增、限制性核酸内切酶EcoRⅠ酶切进行鉴定并测序分析。用紫外分光光度计测质粒浓度,计算拷贝数制备FQ-PCR浓度梯度标准品。最后对质粒标准品进行FQ-PCR检测。结果PCR扩增、酶切鉴定及测序分析均证实c-myc重组到pGEM-T Easy载体上。建立了人c-myc标准曲线,其对数与相应的Ct值(循环阈值)具有良好的相关性,相关系数r2=-0.99～-1,斜率为-3.1～-3.6。结论所构建的人c-myc质粒标准品应用SYBR GreenⅠ荧光染料技术建立的标准曲线线性关系好,灵敏性和特异性高,准确可靠,此方法可作为FQ-PCR检测c-myc基因的标准方法。
- 孙秀静朱圣韬徐有青张澍田
- 关键词：SYBR实时荧光定量反转录聚合酶链反应C-MYC基因
