国家自然科学基金(30570818)
- 作品数：5 被引量：23H指数：3
- 相关作者：冉宇靓杨治华胡海孙立新遇珑更多>>
- 相关机构：中国医学科学院北京协和医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 靶向HER2的抑制胃癌细胞功能性单抗的制备和鉴定被引量：1
- 2008年
- 目的:制备可特异识别人表皮生长因子受体-2(human epidermal growth factor receptor-2,HER2)膜抗原的单克隆抗体,筛选出亲和力较高并对胃癌细胞有明显抑制作用的克隆。方法:以高表达HER2膜抗原的人胃癌细胞系NCI-N87免疫BABL/c小鼠,免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,ELISA法筛选出HER2反应阳性克隆株,活细胞免疫荧光法检测获得膜阳性克隆株,使用抗体亚型鉴定试剂盒鉴定抗体亚型,MTT法检测抗体对NCI-N87细胞增殖的抑制,采用与群司珠单抗的夹心ELISA和竞争抑制ELISA鉴定单抗结合HER2抗原的表位,免疫组化、Westernblotting进一步检测抗HER2抗体在不同条件下与HER2抗原反应情况。结果:细胞融合产生1442个单个集落的杂交瘤,重组HER2抗原ELISA筛选出HER2反应阳性克隆79株,活细胞免疫荧光检测获得较强膜阳性克隆7株,并测定其亚型,其中命名为15C15的1株属IgG1κ类单抗,免疫竞争及结合实验显示15C15与群司珠人源化抗体识别不同的表位。细胞增殖筛选显示15C15能显著抑制人胃癌NCI-N87细胞的增殖,在80μg/ml时抑制率可达34.8%。免疫组化显示15C15能识别部分石蜡包埋的HER2抗原,Westernblotting显示15C15不能结合电泳条件下变性为线形结构的HER2抗原。结论:建立了高通量制备、筛选和鉴定靶向HER2抑制胃癌细胞生长的功能性单抗技术,获得1株可特异识别HER2抗原的明显抑制胃癌细胞增殖的IgG1类单抗15C15,具有人源化改造后用于治疗的应用潜力。
- 孙立新冉宇靓胡海遇珑周转赵西路杨治华
- 关键词：胃癌NCI人表皮生长因子受体-2单克隆抗体
- microRNA-10a对胃癌细胞系BGC823迁移和侵袭能力的影响被引量：16
- 2008年
- 目的:研究人微小RNA-10a(microRNA-10a,miR-10a)对胃癌细胞系BGC823迁移和侵袭能力的影响。方法:利用Transwell小室对胃癌细胞系BGC823进行侵袭筛选,获得高侵袭能力的BGC823-P3亚系;通过miRNA芯片差异分析发现miR-10a在高侵袭能力BGC823-P3细胞的表达显著高于BGC823细胞。通过化学方法合成成熟型的人miR-10a,以脂质体包裹合成的miR-10a(25、50、100、150nmol/L)转染BGC823细胞,并设空白转染、无关序列转染对照组;Real-timePCR分别检测以上各组细胞miR-10a的表达。采用细胞计数试剂盒-8(Cell Counting Kit-8,CCK-8)检测miR-10a对细胞增殖的影响,流式分析检测miR-10a对细胞凋亡的影响,Transwell小室检测miR-10a对细胞的迁移和侵袭能力的影响。结果:化学合成的成熟型miR-10a转染后,BGC823细胞miR-10a表达的提高以100nmol/LmiR-10a转染组最佳,较无关序列转染组提高了2.06倍。miR-10a(100nmol/L)的转染对胃癌细胞系BGC823的增殖和凋亡无明显影响,但对BGC823的迁移和侵袭能力有明显的促进作用,促进率分别为(88.34±0.61)%和(56.02±3.13)%。结论:转染成熟型人miR-10a能使胃癌细胞系BGC823中miR-10a的表达提高,并能显著促进胃癌细胞系BGC823的迁移和侵袭。
- 彭亮潘健胡海孙力超周转冉宇靓杨治华
- 关键词：胃癌细胞迁移
- 采用抗体库技术筛选抑制肺癌的功能性抗体被引量：4
- 2007年
- 目的研制抑制肺癌细胞功能性单抗,为治疗肺癌提供靶向治疗剂,并为分离获得肺癌相关的分子靶标打下基础。方法从新鲜人肺癌组织分离肿瘤细胞免疫Balb/c小鼠,免疫小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合后接种于甲基纤维素,制备大容量功能性抗体库。采用活细胞荧光、ELISA、免疫组化、肿瘤增殖、侵袭、黏附、动物体内治疗实验等方法筛选鉴定抑制肿瘤细胞的功能性单抗。结果本次融合共获得了1573株杂交瘤克隆,在能与肺癌细胞膜反应的314株克隆中,154株与正常肺组织不反应或低反应。功能性筛选发现41株单抗显著地抑制肺癌细胞增殖,24株能抑制肺癌细胞对Matrigel的侵袭,15株能抑制肺癌细胞与CollagenI的黏附,进一步实验验证了2株单抗能在体内抑制肺癌移植瘤的生长。结论采用大容量功能性抗体库技术成功获得了多株具有抑制肺癌细胞恶性生物学行为的功能性单抗,其中2株可能具有靶向治疗肺癌的应用潜力。
- 胡海冉宇靓陈立钊遇珑孙立新杨治华
- 关键词：肺癌抗体库靶向治疗
- 抑制胃癌增殖功能性单抗的制备、筛选及鉴定被引量：3
- 2008年
- 目的:批量制备、筛选、鉴定抑制人胃癌细胞增殖的功能性单克隆抗体,为筛选获得与胃癌增殖相关的基因/蛋白奠定基础。方法:以人胃癌细胞系NCI-N87免疫BALB/c小鼠,经脾细胞融合后制备单抗,活细胞免疫荧光、免疫组化、细胞增殖实验、ELISA、Western blotting等方法筛选鉴定抑制胃癌生长的功能性单抗。结果:共获得1012株杂交瘤,252株能与胃癌细胞膜反应,145株与正常胃组织不反应或低反应。11株单抗在体外能够显著抑制N87的增殖。其中1株单抗1B7属IgMκ类,其识别的抗原的相对分子质量为32kDa。结论:成功获得了多株能够抑制胃癌细胞增殖的功能性单抗,其中1株单抗识别的抗原可能具有作为胃癌靶向治疗靶标的潜在应用价值。
- 赵西路陈立钊冉宇靓胡海孙立新遇珑杨治华
- 关键词：胃癌增殖靶向治疗
- 抑制结肠癌细胞与肝窦内皮细胞黏附的功能性抗体的初步研究
- 2008年
- 目的：研制抑制结肠癌细胞与肝窦血管内皮细胞黏附的功能性单抗,鉴定该单抗识别的抗原分子。方法：以人肝窦内皮细胞（human liver sinusoidal endothelial cell,HLSEC）免疫BALB/c小鼠,将小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,采用甲基纤维素选择培养液培养,制备抗HLSEC的单克隆抗体库。采用免疫荧光染色、黏附实验等方法筛选、鉴定能抑制结肠癌Ls174T细胞与肝窦内皮细胞黏附的功能性单克隆抗体。提取肝窦内皮细胞膜蛋白,采用Western blotting方法鉴定单抗识别的功能性抗原蛋白。结果：HLSEC免疫小鼠的脾细胞与SP2/0细胞融合后产生1440个杂交瘤株,获得119株产生抗HLSEC抗体的阳性克隆,其中20株能显著抑制具有肝转移能力的结肠癌Ls174T细胞与HLSEC的黏附;其中15株为IgM型,3株为IgG型,2株测不到重链;其中1株抗黏附能力最强的单抗（黏附抑制率为51%）命名为12B6,该单抗在5～200μg/ml范围内显著阻断HLSEC与Ls174T的黏附,且呈剂量依赖性;单抗12B6所识别的HLSEC抗原蛋白的相对分子质量为46000。结论：建立了抗HLSEC单克隆抗体库,获得了20株具有抑制结肠癌细胞与肝窦血管内皮细胞黏附的功能性抗体,初步鉴定了一种可能参与结肠癌肝转移的黏附分子,为结肠癌的组织器官特异转移机制及靶向治疗的研究奠定了一定的基础。
- 孙力超冉宇靓遇珑胡海钟星孙立新杨治华
- 关键词：结肠癌肝窦内皮细胞功能性单克隆抗体
