广东省医学科学技术研究基金(A2008227)
- 作品数：4 被引量：7H指数：2
- 相关作者：付强李友瑞张艺平徐亚娟覃峰更多>>
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- 细胞骨架完整性在流体剪切力诱导成骨细胞COX-2基因表达中的作用被引量：3
- 2009年
- 目的探讨细胞骨架完整性在流体剪切力诱导成骨细胞COX-2基因表达中的作用。方法原代培养BALB/c小鼠颅骨成骨细胞,采用细胞松弛素D(CD)破坏细胞骨架完整性;以12dyne/cm2的流体剪切力对成骨细胞加载1.5h;分别应用实时荧光定量巢式PCR和免疫荧光的方法检测COX-2基因mRNA和蛋白的表达水平,并对结果进行双因素方差分析。结果采用CD破坏细胞骨架完整性,可以对流体剪切力诱导成骨细胞COX-2mRNA和蛋白的表达起拮抗作用(P<0.05);在无流体剪切力加载条件下,CD处理对COX-2mRNA和蛋白的表达水平无显著影响(P>0.05);流体剪切力加载1.5h能使成骨细胞COX-2mRNA和蛋白的表达水平显著升高(P<0.05);CD处理可显著降低流体剪切力诱导成骨细胞COX-2mRNA和蛋白的表达水平(P<0.05)。结论保持细胞骨架完整性是流体剪切力诱导成骨细胞COX-2基因表达过程中所必需的。
- 吴昌敬李友瑞徐亚娟郭玲张艺平付强
- 关键词：COX-2基因流体剪切力细胞骨架成骨细胞
- 细胞骨架完整性对流体剪切力诱导成骨细胞c-fos基因mRNA和蛋白表达的影响被引量：2
- 2009年
- 目的研究细胞骨架完整性在流体剪切力诱导成骨细胞c-fos基因mRNA和蛋白表达中的作用，为进一步探索骨组织力传导机制提供依据。方法原代培养BALB／c小鼠成骨细胞，将原代培养的成骨细胞分为对照组和细胞松弛素D组，细胞松弛素D组使用细胞松弛素D破坏细胞骨架。每组一半细胞加载1．2Pa的流体剪切力，另一半不加载。分别用实时荧光定量聚合酶链反应（real-timePCR）和免疫荧光检测c—fos基因mRNA和蛋白、细胞骨架蛋白的表达水平，并对结果进行双因素方差分析和成组t检验。结果无论是对照组还是细胞松弛素D组，流体剪切力加载均可使成骨细胞c-fos基因mRNA相对水平（分别为0．1637±0．0303和0．0104±0．0070）和蛋白荧光强度（分别为177．14±9．37和150．95±6．17）升高，与未加载流体剪切力的对照组和细胞松弛素D组细胞（mRNA相对水平分别为0．0057±0．0021和0．0032±0．0014，蛋白荧光强度分别为117．96±4．11和119．77±5．19）相比，差异均有统计学意义（P〈0．05）。流体剪切力加载下，细胞松弛素D组细胞c—fos基因mRNA和蛋白的表达均低于对照组，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论细胞松弛素D对流体剪切力诱导成骨细胞c—fos基因mRNA和蛋白的表达起拮抗作用。保持细胞骨架的完整性是流体剪切力诱导成骨细胞c—fos基因表达过程中的重要条件。
- 徐亚娟张艺平覃峰吴昌敬李友瑞付强
- 关键词：细胞骨架成骨细胞基因FOS流体剪切力
- 沉默LIMK2基因对成骨细胞c—fos基因力学敏感性的影响被引量：2
- 2009年
- 目的采用RNA干扰沉默LIMK2基因来抑制细胞骨架的改建，观察流体剪切力作用下其对成骨细胞c—fos基因力学敏感性的影响。方法对小鼠颅骨分离的成骨细胞分别给予RNA干扰、阴性RNA干扰2种处理后，进行流体剪切力加载或不加载。分别应用逆转录（RT）一PCR和免疫荧光检测c—fosm RNA和蛋白的表达，并进行统计学分析。结果在无流体剪切力加载条件下，单纯应用RNA干扰方法抑制细胞骨架改建，并不能使成骨细胞c-fos mRNA（0．0108±0．0074与0．0042±0．0018，t=-1．86，P〉0．05）和蛋白（121±7与1194-6，t=-1．272，P〉0．05）的表达升高；流体剪切力能使成骨细胞c-fosmRNA（0．22034-0．1532比0．0042±0．0018，t=-707．35，P〈0．05）和蛋白（1784-12比119±6，t=-30．761，P〈0．05）的表达水平显著升高；RNA干扰处理可显著提高流体剪切力诱导成骨细胞c-fosmRNA（0．52804-0．0879比0．22034-0．1532，t=-1007．00，P〈0．05）和蛋白（224±46比1784-12，t=-6．853，P〈0．05）的表达水平；采用RNA干扰的方法抑制细胞骨架的改建，可以对流体剪切力诱导成骨细胞c—fosmRNA（F=84．388，P〈0．05）和蛋白（F=42．409，P〈0．05）的表达起协同作用。结论采用RNA干扰沉默LIMK2基因抑制细胞骨架的改建，可以促进成骨细胞在流体剪切力作用下的c-fos基因表达。
- 张艺平覃峰吴昌敬李友瑞陈睿邵敏峰付强
- 关键词：成骨细胞基因FOS流体剪切力
- 丝切蛋白在成骨细胞细胞骨架改建中的作用探讨
- 2010年
- 目的 采用流体剪切力加载成骨细胞,通过观察细胞骨架改建和测定丝切蛋白及磷酸化丝切蛋白的含量,探讨丝切蛋白在流体剪切力引起成骨细胞细胞骨架改建中的作用.方法 采用1.2 Pa的流体剪切力作用于成骨细胞0（空白对照组）、15、30、45、60、120 min后,蛋白质印迹法测定细胞内丝切蛋白及磷酸化丝切蛋白的含量,采用异硫氰酸荧光素标记的鬼笔环肽染色观察纤维型肌动蛋白的变化.结果 成骨细胞受流体剪切力刺激后,随加载时间延长,细胞内磷酸化丝切蛋白含量持续升高.流体剪切力作用60 min内丝切蛋白随加载时间延长有所下降,但加载120 min时细胞内丝切蛋白含量（0.254±0.026）为加载60 min（0.162±0.004）的1.5倍.随流体剪切力作用时间延长,各组细胞纤维型肌动蛋白染色逐渐增强,纤维增粗;加载120 min时的平均荧光强度（42.93±6.41）为空白对照组（15.41±3.60）的2.8倍（P＜0.05）.结论 流体剪切力刺激可通过丝切蛋白磷酸化,使成骨细胞细胞骨架发生改建.
- 刘艳辉李友瑞邵敏锋张晓娟付强
- 关键词：成骨细胞细胞骨架流体剪切力
