国家自然科学基金(30570859)
- 作品数：5 被引量：62H指数：3
- 相关作者：张志刚吴慧娟郭慕依刘媛陈琦更多>>
- 相关机构：复旦大学上海医学院上海交通大学医学院附属新华医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 泛素羧基末端水解酶-1的研究进展被引量：7
- 2008年
- 泛素羧基末端水解酶-1(UCH-L1),又名蛋白基因产物9.5,是泛素-蛋白酶体系统中的重要成员,它除了去泛素化作用外,还具有泛素连接酶和稳定细胞内泛素单体的功能。UCH-L1通过泛素相关途径调节细胞的增生、分化和凋亡,并可能参与与之相关的神经退行性疾病、肿瘤等的发生发展过程。最近UCH-L1的特异性底物的发现为探讨其作用的具体机制开辟了新的途径。
- 刘媛张志刚
- 关键词：泛素-蛋白酶体通路
- 转染结缔组织生长因子基因的大鼠肾系膜细胞纤连蛋白和Ⅳ型胶原表达的改变被引量：4
- 2006年
- 目的观察大鼠肾系膜细胞(MsC)转染结缔组织生长因子(CTGF)基因转染阳性细胞克隆中纤连蛋白(FN)和Ⅳ型胶原(Col Ⅳ)表达的改变,探讨 CTGF 在肾小球硬化发生中的作用。方法经脂质体介导将含有 CTGF 的重组表达质粒转染至大鼠 MsC,用 G418筛选及 Western blot 和半定量逆转录聚合酶链反应作鉴定;检测阳性克隆 FN、Col Ⅳ蛋白及其 mRNA 表达的改变。结果成功建立高表达 CTGF 的阳性 MsC 克隆(MCT-1,2),并证实其与对照组相比,阳性 MsC 克隆 FN、Col Ⅳ的表达均有上调,其 FN 蛋白及其 mRNA 表达分别增高2.9倍和3.2倍,Col Ⅳ蛋白和 mRNA 表达分别增高为2.4倍和3.8倍。结论 CTGF 可促进 MsC 的 FN、Col Ⅳ的表达,表明其在肾小球硬化发生中起促进作用。
- 王小刚吴慧娟陈琦赵仲华张志刚郭慕依
- 关键词：转染纤连蛋白类
- 泛素-蛋白酶体途径及意义被引量：49
- 2006年
- 泛素-蛋白酶体途径介导的蛋白降解是机体调节细胞内蛋白水平与功能的一个重要机制。负责执行这个调控过程的组成成分包括泛素及其启动酶系统和蛋白酶体系统。泛素启动酶系统负责活化泛素,并将其结合到待降解的蛋白上,形成靶蛋白多聚泛素链,即泛素化。蛋白酶体系统可以识别已泛素化的蛋白并将其降解。此外,细胞内还有另一类解离泛素链分子的去泛素化蛋白酶形成反向调节。泛素-蛋白酶体途径涉及许多细胞的生理过程,其调节异常与多种疾病的发生有关。
- 吴慧娟张志刚
- 关键词：泛素-蛋白酶体途径蛋白质降解
- 饰胶蛋白聚糖与转化生长因子β1对大鼠肾系膜细胞生长及相关信号途径的影响被引量：1
- 2007年
- 目的探讨饰胶蛋白聚糖（DCN）与转化生长因子β1（TGF-β1）对大鼠肾系膜细胞（MsC）生长及相关信号途径的影响。方法经脂质体介导将DCN基因转染体外培养的大鼠肾MsC,经筛选和鉴定后,收集阳性细胞克隆的培养上清（DCN上清）。采用流式细胞仪检测经TGF-β1（2μg/L）和（或）DCN上清作用后MsC细胞周期的变化。采用Western印迹法分别检测两者单独或联合作用后,MsC磷酸化丝裂原活化蛋白激酶（p-MAPK）、磷酸化Smad2 （p-Smad2）和p21蛋白表达情况。采用免疫共沉淀方法检测阳性细胞克隆上清中DCN与TGF-β1的结合情况。结果TGF-β1或DCN上清单独作用时均可抑制MsC的增殖,G_2-M期细胞数分别为对照组的81%及86.5%,而两者共同作用时G_2-M期细胞数与对照组差异无统计学意义。经TGF-β1和DCN上清单独作用12 h后,p-ERK1/2表达为对照组的4.4、3.7倍和3.2、3.7倍;p-SAPK/JNK表达为对照组的2.0、1.5倍和1.9、1.5倍;而两者共同作用组p-ERK1/2和p-SAPK/JNK表达与对照组差异无统计学意义。TGF-β1单独作用12 h后,MsC p-Smad2的表达为对照组的2.6倍,而DCN单独作用组及2者联合作用组其表达与对照组差异无统计学意义。DCN单独作用12 h后p21蛋白的表达为对照组的2.6倍,而TGF-β1单独作用及2者联合作用组其表达与对照组差异无统计学意义。阳性细胞克隆上清中DCN可以直接与TGF-β1结合。结论TGF-β1与DCN单独作用均可抑制MsC增殖及激活MAPK信号途径,但2者共同作用时其作用相互抵消。TGF-β1激活Smad信号途径作用可被DCN阻断;DCN上调p21蛋白作用可被TGF-β1阻断。2者通过不同信号分子抑制细胞生长,其作用可能与两者相互结合有关。
- 冯秀艳卫敏江张志刚吴伟岚沈加郭慕依
- 关键词：饰胶蛋白聚糖丝裂原激活蛋白激酶SMAD2系膜细胞
- 转染结缔组织生长因子基因的大鼠肾系膜细胞纤连蛋白和Ⅳ型胶原表达的改变
- 目的通过对大鼠肾系膜细胞 （Mesangial cell,MsC）转染结缔组织生长因子 （Connective tissue growth factor,CTGF）基因, 观察转染阳性细胞克隆中纤连蛋白（Fibronec...
- 王小刚吴慧娟陈琦赵仲华张志刚郭慕依
- 文献传递
- 稳定过表达饰胶蛋白聚糖基因对大鼠肾系膜细胞凋亡的影响被引量：1
- 2008年
- 目的观察稳定过表达饰胶蛋白聚糖（DCN）基因对大鼠肾系膜细胞（MsC）凋亡的影响。方法采用脂质体介导法将pcDNA3．1A-DCN质粒稳定转染MsC，G418筛选阳性克隆。细胞免疫荧光法、逆转录．聚合酶链反应（RT-PCR）和Western印迹法鉴定并获得转染DCN阳性的细胞株（MsC／DCN）；脂质体介导法将DCN-siRNA瞬时转染MsC／DCN以干扰DCN表达，Western印迹法鉴定。Hoechst染色和流式细胞仪观察细胞凋亡及比率，Western印迹法检测活性凋亡相关激酶半胱氨酸蛋白酶3（Caspase-3）蛋白的表达。结果成功建立了过表达DCN基因的细胞株MsC／DCN。MsC／DCN中凋亡率为（20．40±8．01）％，显著高于MsC的凋亡率（2．07±0．99）％（P〈0．01），部分MsC／DCN发生典型的形态学改变。活性Caspase-3的蛋白表达也明显高于MsC（P〈0．01）。DCN-siRNA瞬时转染不仅有效干扰了MsC／DCN中DCN的表达和降低了细胞凋亡率，而且显著下调了活性Caspase-3的蛋白表达。结论大鼠MsC中DCN基因的过表达能诱导MsC发生凋亡，为肾小球疾病中调控MsC增生提供了新的实验依据。
- 吴慧娟刘媛薛爱民刘晔王素霞陈琦郭慕依张志刚
- 关键词：肾小球肾炎膜性
