国家自然科学基金(31172211) 作品数:22 被引量:55 H指数:5 相关作者: 李鹏飞 黄洋 孟金柱 陈建伟 赵妙妙 更多>> 相关机构: 山西农业大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 山西省回国留学人员科研经费资助项目 引进国际先进农业科技计划 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 更多>>
绵羊卵巢卵泡颗粒细胞体外培养中促卵泡素和胰岛素浓度优化研究 被引量:3 2012年 为了进一步探讨在无血清体外培养条件下,促卵泡素(FSH)和胰岛素对绵羊卵巢颗粒细胞的影响,以优化颗粒细胞体外培养体系。试验设计6个FSH浓度梯度和3个胰岛素浓度梯度。体外培养7d后,检测培养体系中颗粒细胞数和雌激素浓度。与对照组相比,培养液中添加FSH与胰岛素可显著提高颗粒细胞的增殖和雌激素的分泌(P<0.01);且随着FSH浓度的增加,颗粒细胞数和雌激素分泌量显著增加,当FSH浓度为5.0μg·L-1时,雌激素分泌量最高;随着胰岛素浓度增加,颗粒细胞数和雌激素分泌量显著增加,当胰岛素浓度为10μg·L-1时,颗粒细胞数和雌激素分泌量最高。 庞钰莹 岳文斌 于雪静 李鹏飞 孟金柱 刘岩 李晓明 黄洋 任有蛇 吕丽华关键词:FSH 胰岛素 颗粒细胞 绵羊 CART和胰岛素对绵羊卵巢卵泡颗粒细胞雌激素产生的影响 2013年 为了研究CART和胰岛素对颗粒细胞的作用机制,实验采用细胞培养液中梯度量添加CART和胰岛素的方法,以探究CART对颗粒细胞增殖和E2分泌的影响。研究发现CART对颗粒细胞增殖和E2分泌有抑制作用,而胰岛素有促进作用。当CART1ng/mL且无胰岛素时,颗粒细胞和E2分泌量最小;胰岛素10ng/mL且无CART时,颗粒细胞和E2分泌量最大。 李晓明 岳文斌 孟金柱 刘岩 于雪静 庞钰莹 黄洋 吕丽华关键词:CART E2 胰岛素 颗粒细胞 可卡因-苯丙胺调控转录肽(CART)对猪卵巢卵泡颗粒细胞雌激素产生的影响 被引量:11 2012年 旨在研究可卡因-苯丙胺调控转录肽(Cocaine amphetamine regulated transcript,CART)对促卵泡素(Follicular stimulating hormone,FSH)诱导的猪卵巢卵泡颗粒细胞雌激素产生的影响。用Long-term培养方法在不同CART、FSH浓度下对猪卵巢卵泡颗粒细胞培养7d,在显微镜下观察各孔细胞生长情况并采集图像;采用双抗体夹心ABC-ELISA法测定各孔雌激素浓度。细胞培养168h后:(1)在培养液不添加CART时,添加FSH孔中的雌激素浓度与不添加孔相比,显著提高;浓度为25ng.mL-1时,雌激素浓度最高,为(17 295.57±184.03)pg.mL-1;(2)CART对体外培养的无FSH和FSH为5ng.mL-1的猪卵巢卵泡颗粒细胞雌激素的产生没有影响;(3)当培养体系FSH浓度分别为25和50ng.mL-1时,随着CART浓度的升高(0.01、0.1、1μmol.L-1),培养液雌激素浓度有下降的趋势,但各组间差异不显著(P>0.05)。但是,当FSH为25ng.mL-1,CART为0.1和1μmol.L-1时,与对照组相比,颗粒细胞雌激素的产生明显受到抑制(P<0.05)。但是,统计分析FSH和CART互作效应并不显著(P>0.05),这一点需进一步试验证明;(4)当培养液添加50ng.mL-1 FSH时,随着CART浓度的升高(0.01、0.1、1μmol.L-1),与对照组相比,雌激素浓度各组差异不显著(P>0.05)。猪卵巢卵泡颗粒细胞雌激素的产生需在FSH诱导下进行;当培养液FSH为25和50ng.mL-1时,CART对FSH诱导的猪卵巢卵泡颗粒细胞雌激素的产生有抑制作用,但抑制效果并不显著。由此推断,并不像单胎的牛、羊,CART在猪卵泡发育过程中,可能并非是个主要的局部负调控因子。 李鹏飞 岳文斌 李富禄 黄洋 孙晋艳 朱芷薇 于秀菊 贺俊平 范瑞文 任有蛇 吕丽华关键词:促卵泡素 雌激素 颗粒细胞 蛋鸡卵巢PRSS23基因CDS序列分析 被引量:2 2014年 为获得蛋鸡丝氨酸蛋白酶23(PRSS23)的CDS序列并分析其结构域,试验根据NCBI中公布的其它物种PRSS23的mRNA序列,设计了特异性引物,采用RT-PCR技术扩增PRSS23 CDS全序列。BLAST比对发现,与其它物种PRSS23预测序列以及氨基酸序列同源性分别为99%、92%、91%、86%和100%、96%、96%、90%;通过分析该序列的三级结构,发现在第117到362位氨基酸之间含有一个典型的Tyrp-SPc结构域,该结构域具有典型丝氨酸肽链内切酶活性;通过对其蛋白信号肽预测分析,发现序列中含有信号肽,信号锚定的可能性为72.8%。 孟金柱 李鹏飞 姜小龙 陈建伟 刘岩 黄洋 吕丽华关键词:蛋鸡 卵泡 外源注射CART特异性dsRNA对蛋鸡产蛋性能和蛋品质的影响 2016年 选择500只健康、20周龄的海兰褐蛋鸡,预饲30 d后随机平均分为5组,每组4个重复,分别进行如下处理:生理盐水仅第1天注射一次组(A组,对照组)、可卡因—苯丙胺调节转录肽(CART)特异性双链RNA(dsRNA)仅第1天注射一次组(B组)、CART dsRNA每40 d注射一次组(C组)、CART dsRNA每20 d注射一次组(D组)、CART dsRNA每10 d注射一次组(E组),120 d后对各处理组蛋鸡的产蛋性能、蛋品质、蛋组分和体重变化进行测定,研究CART对产蛋期蛋鸡的产蛋性能和蛋品质的影响.结果表明:各试验组之间以及与对照组之间在产蛋率上均存在差异(P<0.05);B组的日产蛋量与对照组的差异不显著,其他试验组与对照组的差异显著(P<0.05);各试验组的采食量均高于对照组(P<0.05);从蛋料比来看,B、C组与对照组的差异不显著,D组与E组的差异不显著,但均与对照组存在差异(P<0.05);各试验组蛋品质、蛋组分与对照组的差异不显著;试验结束后,各试验组蛋鸡的体重变化与对照组均存在差异(P<0.05).总之,CART dsRNA对海兰褐蛋鸡产蛋性能和体重变化的影响显著,对蛋品质和蛋组分的影响不显著. 李鹏飞 景炅婕 毕锡麟 王锴 张子宁 吕丽华关键词:蛋鸡 产蛋性能 蛋品质 卵泡发育相关基因在牛优势和从属卵泡颗粒细胞中表达的研究 被引量:3 2014年 旨在探究卵泡发育相关基因在牛发情周期内第一卵泡波中优势卵泡(Dominant follicles,DF)和从属卵泡(Subordinate follicles,SF)颗粒细胞中表达差异,进而筛选影响牛卵泡发育的相关基因。通过GEO数据库与基因功能分析筛选与牛卵泡发育相关基因,采用qRT-PCR检测牛第一卵泡波DF和SF颗粒细胞中各基因的表达差异。结果显示:筛选出6个候选基因(SFRP2、CPEB1、PRKAG2、MAPK8、PPP2R2A和PRSS23)与牛卵泡发育有关;qRT-PCR检测,CPEB1在DF中的表达量极显著高于SF(P<0.01),PRKAG2在DF中的表达量显著高于SF(P<0.05);SFRP2和MAPK8在SF中的表达量极显著高于DF(P<0.01);PPP2R2A和PRSS23虽然在DF和SF的表达量存在倍数关系,但差异并不显著。综上表明,在牛卵泡发育过程中,CPEB1和PRKAG2促进卵泡发育,SFRP2和MAPK8对卵泡的发育可能有抑制作用。 姚晓磊 李鹏飞 姜晓龙 孟金柱 黄洋 刘岩 陈建伟 赵妙妙 吕丽华关键词:卵泡发育 基因 胰岛素对体外培养猪卵巢卵泡颗粒细胞生长及增殖的影响 被引量:1 2014年 试验添加不同浓度的胰岛素,检测对颗粒细胞增生和雌激素分泌的影响。培养7d,检测雌激素的浓度和细胞数目。结果表明,随着胰岛素浓度的增加,颗粒细胞的数目和雌激素的分泌量明显提高,当胰岛素的浓度为100ng/mL时,颗粒细胞的数量达到最大值,当胰岛素的浓度达到10ng/mL,卵巢卵泡颗粒细胞分泌雌激素的浓度达到最大值。 刘岩 姜小龙 陈建伟 孟金柱 黄洋 吕丽华关键词:胰岛素 卵泡颗粒细胞 FSH及Wnt信号通路对绵羊卵泡颗粒细胞的增殖及雌激素分泌的影响 被引量:3 2016年 旨在研究Wnt信号通路对绵羊卵泡颗粒细胞增殖及雌激素分泌的影响,探究其是否与促卵泡素(Follicular stimulating hormone,FSH)有关。在添加有FSH以及不同浓度Wnt信号通路抑制剂IWR-1的培养基中培养绵羊卵巢卵泡颗粒细胞168h,利用Guava ViaCount?Reagent测定细胞数目的变化,利用绵羊ELISA试剂盒检测雌激素浓度的变化,利用qRT-PCR检测FSH靶基因CYP19和CCND2的相对表达量差异。结果表明,无论有无FSH,抑制剂IWR-1使颗粒细胞数目显著减少(P<0.05);当有FSH时,抑制剂IWR-1的添加导致雌激素浓度显著降低(P<0.05)。IWR-1的浓度为1.0μmol·L-1时,对颗粒细胞的抑制效果最明显。IWR-1还导致CYP19和CCND2mRNA的表达量降低。综上表明,Wnt信号通路对绵羊卵泡颗粒细胞的生物学功能具有促进作用,并且这种促进作用可能与FSH有关。 赵妙妙 姜晓龙 陈建伟 黄洋 姚晓磊 曹霞 李鹏飞 吕丽华关键词:绵羊 卵泡颗粒细胞 WNT信号通路 细胞培养 牛卵泡ODF1与ODF2转录组发育相关基因筛选及表达差异分析 被引量:5 2015年 旨在从牛发情周期第一卵泡波中最大卵泡ODF1(The largest follicle at onset of deviation)和第二大卵泡ODF2(The second largest follicle at onset of deviation)转录组水平上筛选卵泡发育差异表达基因。采集牛发情周期第一卵泡波ODF1和ODF2,分别分离颗粒细胞并提取总RNA,构建RNA文库,通过Illumina平台对ODF1和ODF2测序;筛选出ODF1与ODF2两个转录本之间比值大于2的差异表达基因,并采用qRT-PCR对筛选出的基因在牛发情周期内第一卵泡波优势卵泡(Dominant follicles,DF)和从属卵泡(Subordinate follicles,SF)颗粒细胞中功能验证。共获得8个卵泡发育差异表达基因,其中7个基因筛选自ODF1/ODF2(BEX2、UBN1、SIK1、SPARCL1、LOC784256、LOC789231和LOC785462),1个筛选自ODF2/ODF1(SAFB2);qRT-PCR结果表明,BEX2、UBN1、LOC784256和LOC789231在DF中mRNA表达量极显著高于SF(P<0.01),SAFB2在SF中mRNA表达量极显著高于DF(P<0.01),SIK1和SPARCL1在SF中mRNA表达量显著高于DF(P<0.05),虽然LOC785462在SF中mRNA表达量高于DF,但差异不显著(P>0.05)。qRT-PCR检测BEX2、UBN1、LOC784256、LOC789231和SAFB2的结果与高通量测序中该基因在ODF1和ODF2的RPKM的差异趋势基本一致,而SIK1、SPARCL1和LOC785462不一致。 李鹏飞 孟金柱 谢建山 朱芷葳 刘岩 姜晓龙 陈建伟 姚晓磊 赵妙妙 吕丽华关键词:转录本 卵泡发育 基因 FSH和胰岛素对绵羊卵巢卵泡颗粒细胞体外培养的影响 被引量:8 2013年 旨在探讨在无血清体外培养条件下,促卵泡素(Follicular stimulating hormone,FSH)和胰岛素对绵羊卵巢卵泡颗粒细胞增殖和雌激素分泌的影响。收集卵巢卵泡颗粒细胞,Long-term培养方法在FSH、胰岛素不同浓度下培养168h后,在显微镜下观察各孔细胞生长情况并计数;采用双抗体ABC-ELISA法测定雌激素浓度。结果表明,FSH与胰岛素的共培养体系,颗粒细胞的增殖和雌激素的分泌量显著高于各单独处理组;胰岛素浓度为10ng·mL-1,FSH浓度分别为5.0和25.0ng·mL-1时,2组颗粒细胞数最高,但差异不显著;当胰岛素浓度为10ng·mL-1,FSH浓度为5.0ng·mL-1时,雌激素分泌量最高,与其他组差异显著(P<0.05),此时颗粒细胞的生长状况最好,培养体系最佳。绵羊卵巢卵泡颗粒细胞增殖和雌激素分泌需在FSH诱导下进行;胰岛素对FSH诱导的绵羊卵巢卵泡颗粒细胞增殖和雌激素的分泌有促进作用;二者对颗粒细胞增殖和雌激素的分泌存在剂量效应关系。 李鹏飞 岳文斌 庞钰莹 于雪静 黄洋 任有蛇 吕丽华关键词:绵羊 颗粒细胞 体外培养 促卵泡素 胰岛素