公共文化服务平台

结核分枝杆菌潜伏感染豚鼠模型的建立被引量：7: 2010年; 目的建立MTB潜伏感染豚鼠模型，研究MTB体内增殖动力学及与PPD试验的关系。方法62只豚鼠按随机数字表法分成对照组（20只）和模型组（42只），模型组又分为4周组（12只）、8周组（21只）和12周组（9只）。采用恢复毒力的H37Rv株500CFU经豚鼠腹股沟皮下注射攻毒，攻毒后2周，模型组给予异烟肼（10mg／kg）和吡嗪酰胺（40mg／kg）每周3次灌胃，控制MTB增殖，分别于4周、8周和12周停药。模型4周组停药后观察结核病自然复发情况，模型8周组和12周组停药后观察结核病自然复发和地塞米松诱导复发情况。在建立模型过程中进行PPD试验，检测豚鼠的脾、肺荷菌量及组织切片病理，分析PPD试验与结核病活动或潜伏感染的关系。结果对照组豚鼠攻毒后2周脾荷菌量为3．3lg CFU，6周后出现腹股沟淋巴结肿大，脾、肺荷菌量分别为4．5和1．8lg CFU，18周时脾、肺荷菌量分别达5．3和5．4lg CFU。观察期间，模型4周组停药后结核病均自然复发；模型8周组有结核病自然复发和地塞米松诱导复发；模型12周组无结核病自然复发，但地塞米松可诱导结核病复发。PPD试验反应越强，结核病越容易复发，PPD试验反应阴性豚鼠则无结核病复发。结论H37Rv攻毒豚鼠后，用异烟肼和毗嗪酰胺联合化疗可抑制MTB增殖，成功建立豚鼠MTB潜伏感染模型，潜伏感染可致豚鼠结核病的自然复发或地塞米松诱导复发。PPD试验反应强弱与结核病复发有关。; 黎友伦陈保文徐苗罗永艾王国治沈小兵苏城

武汉大学动物实验技术平台建设的探讨与实践被引量：4: 2010年; 从动物实验技术平台的建立、动物实验的规范管理、动物实验专业人员队伍建设以及动物实验研究的国际交流与合作等方面,介绍了武汉大学动物实验中心/ABSL-3实验室在建设面向国内外的公共技术服务平台过程中的思路、举措和成效。; 李湘东唐志佼孙理华; 关键词：动物实验室实验教学

DEAE-葡聚糖在SHIV病毒TCID50滴定及扩增中的作用被引量：1: 2011年; 目的确定DEAE-葡聚糖对CEMx174细胞的半数抑制浓度,明确其在SHIV病毒TCID50滴定及病毒扩增中的促进作用。方法分别使用含DEAE和无DEAE的DMEM完全培养基测定SHIVchn19p7的TCID50。用无血清DMEM培养基系列稀释DEAE,加入CEMx174细胞,使用cck-8测定细胞破坏率。分别选取DEAE浓度为28.125μg/mL和14.0625μg/mL的无血清DMEM培养基对CEMx174细胞预处理3 h。再加入SHIV-KB9病毒液,定期测定培养上清中的P24水平,同时做正常病毒对照和DEAE-1640对照,比对不同处理下的病毒扩增情况。结果使用了DEAE后,SHIVchn19p7的TCID50达到了3.16×104 TCID50/mL,不使用DEAE,病毒的TCID50测定为阴性。DEAE对CEMx174细胞的IC50为44.85μg/mL。经浓度为28.125μg/mL和14.0625μg/mL的DEAE预处理后,SHIV-KB9病毒扩增在13 d～17 d达到高峰。而用不含DEAE的1640生长液培养的实验孔在19 d才开始出现阳性反应。结论高浓度的DEAE对细胞有较强的杀伤作用,低浓度的DEAE对细胞的破坏率较低,并且能显著促进病毒扩增。DEAE在病毒进入细胞的过程中确实起了重要的作用。; 丛喆姚南蒋虹金光魏强; 关键词：半数抑制浓度

纤维支气管镜在结核病非人灵长类动物模型建立中的应用被引量：4: 2010年; 目的:应用纤维支气管镜将结核分枝杆菌(MTB)接种猕猴肺部,建立结核病模型。方法:分别用不同菌量的MTBH37Rv株,Erdman株和临床耐药株、经纤维支气管镜接种实验猴右肺下叶,在规定的时间,观察其结核菌素皮肤试验和胸部X线表现、肺部病理学改变和肺组织细菌载量。结果:所有感染猕猴的结核菌素皮肤试验呈阳性,胸部X线呈现结核样改变,病理解剖显示肺部均有不同程度的病理变化;显微镜下肺组织中可见特征性的结核结节,肺组织中均培养出了数量不等的结核分枝杆菌。结论:经纤维支气管镜将一定量的结核分枝杆菌接种实验猕猴的右肺能成功建立结核病实验猴模型,该方法能为结核疫苗和药物疗效评价平台提供良好的技术支撑。; 鲜巧阳唐志佼李湘东王勇包容郭铭刘君炎; 关键词：纤维支气管镜结核分枝杆菌非人灵长类动物

模拟HIV性传播特点的SIVmac239恒河猴直肠黏膜感染被引量：3: 2010年; 目的制备SIVmac239恒河猴(Macaca mulatta)细胞适应株病毒,模拟HIV性传播感染特点进行恒河猴直肠黏膜感染研究,探索引起系统性感染的病毒阈值水平与机体病毒、免疫学之间相关性,为我国艾滋病黏膜疫苗等生物制剂有效性评价提供新的模型构建思路。方法参照HIV性传播自然感染剂量范围,选用SIVmac239连续升高的3种剂量直肠黏膜途径感染两只恒河猴,采取多种方法进行病毒血症和免疫反应特点分析。结果两只恒河猴经2×101TCID50和2×102TCID50病毒滴度2次攻击后45d,经检测均未建立系统性感染,病毒特异性免疫反应均为阴性;第3次2×103TCID50病毒滴度攻击后,M296猴表现出典型的系统性感染特点,并诱导特异性免疫反应。结论确认了HIV性传播过程中的病毒剂量效应关系,为预防性生物制剂的猴体有效性评价提供了新的思路。同时,发现SIVmac239Gag区特异性的T细胞免疫反应在病毒控制过程中发挥了关键作用,对于新一代艾滋病黏膜疫苗的抗原选择具有指导性意义。; 刘浩刘强丛茹王卫乔红伟陈志伟魏强; 关键词：SIVMAC239 恒河猴细胞免疫应答

SHIV-XJ02170感染恒河猴后期的传代特点和env基因变异: 2011年; 目的研究SHIV-XJ02170在中国恒河猴感染后期传代过程中病毒和宿主的变化特点,并分析env基因的序列变异。方法将感染中国恒河猴G0401V后期(5年)的SHIV-XJ02170病毒垂直传代2只猴(G0401V→G0402V→0403V),同时,剔除G0401V猴CD8+T细胞使潜伏的病毒大量复制后传代1只猴(G0401V→G0404V),应用流式细胞术、病毒载量测定、序列分析等方法研究该病毒在猴体内长期适应后的病毒和免疫学指标及序列变异特点。结果 G0401V在感染后期仍能稳定传代,且表现出毒力增强的特点。其传代猴G0402V在传代后41 d死亡,外周血CD4+T淋巴细胞衰竭,仅为43个/mL,符合艾滋病感染猴快速进展型的特征。剔除体内CD8+T细胞之后的传代猴G0404V的表现类似G0401V,即长期低水平的病毒血症水平。env基因序列分析发现SHIV-XJ02170在G0401V体内长期适应后发生了可遗传的序列变异,并引起糖基化位点的改变。结论 SHIV-XJ02170在猴体长期适应后的传代过程中表现出向强毒株过渡的特征,为进行SHIV-XJ02170感染性克隆的构建奠定了良好的实验基础。; 陶真丛喆刘强李悦刘浩王卫金光陈霆姚南蒋虹杨贵波李喆魏强; 关键词：传代 ENV

B亚型SHIV_(SF162p3)中国恒河猴小剂量多次阴道黏膜感染被引量：3: 2011年; 目的模拟HIV性传播感染特点进行中国恒河猴阴道黏膜小剂量多次感染研究,为我国艾滋病疫苗有效性评价提供新的模型构建思路。方法选用20-30TCID50剂量的SHIVSF162p3病毒阴道黏膜途径感染六只成年雌性中国恒河猴,共感染13次,每次攻毒间隔4～7 d。采取测定血浆病毒载量和外周血CD4+∶CD8+。结果 6只中国恒河猴经13次病毒攻击后,经检测均建立系统性感染,血浆病毒载量呈阳性;CD4+∶CD8+均有下降。结论成功建立了中国恒河猴阴道黏膜小剂量多次感染模型,为艾滋病研究提供了新的更接近于自然感染状态的模型建立模式。; 丛喆刘浩朵建英王卫蒋虹高虹杨志伟Sylvain Fleury魏强秦川; 关键词：黏膜感染

中国恒河猴结核病模型的建立与评价被引量：1: 2012年; 目的探讨中国恒河猴结核病模型的建立方法，并对中国恒河猴作为结核病动物模型做出评价。方法应用简单随机分组法将12只中国恒河猴分为注入低菌量组（20CFU）、注入高菌量组（100CFU）和滴注高菌量组（100CFU），每组4只，雌雄各半。将MTB分别通过支气管镜和气管内滴注法感染猴，动态观察恒河猴的临床表现，定期进行ESR、C反应蛋白、PPD试验和x线胸片检查，感染后24周行病理检查。采用方差分析进行多组间比较。结果3组感染MTB的恒河猴均出现不同程度的体温升高、体重下降、食欲下降和咳嗽等症状，体温于感染后8周达到高峰[（40．1±0．2）℃]，感染后24周体重下降明显[（-5．5±5．6）％]，感染后6～8周ESR明显升高[（36±40）mm／1h]，感染后6—24周C反应蛋白明显升高[（75．8±49．8）mg／L]，旧结核菌素试验均为阳性。注入低菌量组动物的病变进展缓慢，X线胸片以斑片影为主，注入高菌量组和滴注高菌量组动物的病变发展迅速，4—12周以斑片影和结节影为主，12—24周以片状影和实变影多见。肺组织、纵隔淋巴结、肾脏和脾脏可见与人结核病相似的结核性肉芽肿及干酪样坏死，抗酸染色均为阳性，病理改变严重程度为注入高菌量组〉滴注高菌量组〉注入低菌量组，注入高菌量组右肺细菌载量[（6．7±1．0）lg CFU／g]高于注入低菌量组和滴注高菌量组[（5．9±1．3）lg CFU／g和（5．8±2．0）lg CFU／g]，3组间比较，差异无统计学意义（F=0．97，P〉0．05）。结论中国恒河猴经支气管镜和气管内滴注MTB均可成功建立非人灵长类动物结核病模型，其临床表现、疾病进展及病理改变与人原发性结核病和血行播散性结核病相似。; 王勇莫平征唐志佼鲜巧阳黄智翔饶艳包容郭铭王欣李湘东霍文哲; 关键词：恒河猴分枝杆菌结核动物

血清E型沙眼衣原体的Real-time PCR定量分析: 2011年; 目的沙眼衣原体感染是最常见的性传播疾病,本文拟建立一种准确快速、标准化的感染动物组织衣原体载量检测体系。方法体外扩增感染用沙眼衣原体血清E型,克隆衣原体特异基因OMP1基因片段作为标准品,用Real time PCR法测定衣原体基因组拷贝数进行衣原体定量。结果 Real time PCR在OMP1基因片段200至2×108拷贝检测结果成线性,在模板中加入小鼠基因组未出现非特异扩增,同时未影响扩增效率。结论针对衣原体特异基因OMP1的实时定量PCR方法可以较为灵敏的特异的定量检测感染动物样本中的衣原体。; 李涛向志光林树柱秦川; 关键词：衣原体 REAL-TIME PCR

SHIV-1157i及衍生病毒的研究进展: 2011年; C亚型是世界上流行的HIV-1主要亚型,带有HIV-1 C亚型env区的SHIV和相应的非人灵长类模型是研究人类艾滋病的有效工具。SHIV-1157i及其衍生病毒能够成功地通过黏膜途径感染恒河猴和猪尾猴,并诱发艾滋病类似症状,而且恒河猴缓慢的发病进程与人类感染HIV-1相似。因此,掌握SHIV-1157i及其衍生病毒感染恒河猴的发病规律并探索其机制,将对研究人类HIV-1感染和发病机制,以及评价HIV-1 C亚型env区为靶点的艾滋病候选疫苗具有重要意义。; 金光丛喆王卫魏强; 关键词：恒河猴

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国家科技重大专项(2009ZX10004-402)

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