河北省科技支撑计划项目(09227134D) 作品数:7 被引量:48 H指数:4 相关作者: 李君华 吴萌 闫静辉 李春生 康占省 更多>> 相关机构: 河北省科学院 河北大学 河北交通职业技术学院 更多>> 发文基金: 河北省科技支撑计划项目 河北省自然科学基金 石家庄市科技局“科技支撑计划项目” 更多>> 相关领域: 农业科学 理学 医药卫生 更多>>
荧光胺柱前衍生高效液相色谱法测定牛肉中的盐酸克伦特罗 被引量:9 2011年 建立了高效液相色谱-荧光检测器测定牛肉中的盐酸克伦特罗的方法。样品通过提取、净化、荧光胺柱前衍生化,用配有荧光检测器的高效液相色谱仪测定,外标法定量。方法检出限为0.5μg/g,在2.0~100ng/mL范围内,线性相关系数R为0.9996。在2.0、10、20μg/g3种浓度添加水平,盐酸克伦特罗的回收率为85.15%~93.25%,相对标准偏差为2.81%~3.16%。该方法重现性好、灵敏度高、特异性强,可用于牛肉中盐酸克伦特罗残留的检测。 庞坤 张敬轩 俞婧 李挥关键词:高效液相色谱 盐酸克伦特罗 磺胺二甲嘧啶人工抗原合成及单克隆抗体制备 被引量:2 2011年 采用重氮化法将SM2分别与BSA、OVA偶联,合成人工免疫抗原SM2-BSA和人工检测抗原SM2-OVA,并通过紫外光谱扫描(UV)、SDS-PAGE、红外光谱扫描(IR)验证偶联成功,偶联比分别为14∶1、10.5∶1。用SM2-BSA免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合技术制备了2株特异性分泌SM2抗体的杂交瘤细胞株,分别是3A12和4H4,亲和力常数均为1×108~1×1010 L/mol,3A12的检测灵敏度为0.6 ng/mL,免疫球蛋白亚型鉴定为IgG1,4H4的检测灵敏度为1.8 ng/mL,免疫球蛋白亚型鉴定为IgG2α,这两株抗体均与其他6种磺胺类无交叉反应。 李君华 吴萌 李春生 齐颖颖 张小兵 闫静辉关键词:磺胺二甲嘧啶 人工抗原 单克隆抗体 ELISA 凝胶渗透色谱-固相萃取净化-超快速液相色谱-串联质谱法检测牛肉中9种类固醇激素残留 被引量:23 2010年 建立了凝胶渗透色谱分离-固相萃取净化-超快速液相色谱-串联质谱(GPC-SPE-RRLC-MS/MS)测定牛肉中群勃龙、勃地龙、诺龙、睾酮、美雄酮、甲基睾酮、司坦唑醇、黄体酮、苯丙酸诺龙9种类固醇激素残留的方法。试样经β-盐酸葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶酶解,叔丁基甲醚超声提取,凝胶渗透色谱和HLB固相萃取柱净化,以乙腈-0.1%甲酸水溶液为流动相,经Agilent Plus C18柱分离后以MS/MS多反应监测扫描模式检测。方法线性相关系数r>0.999,定量限为0.2~0.7μg/kg。在3种浓度添加水平0.3,1.0,4.0μg/kg下,其平均回收率为81.4%~110%;相对标准偏差(RSD)为2.2%~9.8%。本方法已成功应用于高脂肪和基质复杂样品中9种类固醇激素残留的检测。 孙汉文 康占省 李挥关键词:凝胶渗透色谱 固相萃取 牛肉 气相色谱-质谱法同时检测婴幼儿配方奶粉中的6种雌激素残留 被引量:6 2011年 建立了婴幼儿配方奶粉中6种雌激素残留(己烯雌酚diethylstilbesterol,17α-乙炔基雌二醇17α-ethynylestradiol,17α-雌二醇17α-estradiol,17β-雌二醇17β-estradiol,雌三醇estriol,雌酮estrone)的气相色谱-质谱(GC-MS)的检测方法.样品经酶解后,用乙腈超声提取.提取液蒸发至近干,五氟丙酸酐(PFPA)衍生化后,经HP-5MS弱极性色谱柱分离,在SIM模式下进行定性分析和定量检测.结果表明:在0.1~50ng/mL内,6种药物的校准曲线呈现良好的线性,相关系数(r)大于0.999.17α-乙炔基雌二醇的定量限为0.8μg/kg,其余5种的定量限为0.1μg/kg.6种药物在3.0,5.0,10.0μg/kg质量浓度添加水平下,其平均回收率为60.6%~120.6%;相对标准偏差(RSD)为7.8%~19.6%.该方法已成功应用于婴幼儿配方奶粉中6种雌激素残留的定性定量检测. 孙汉文 李挥 康占省 张敬轩 吕运开关键词:气相色谱-质谱 雌激素 奶粉 沙丁胺醇人工抗原的合成及其多克隆抗体的制备 被引量:2 2012年 为了合成沙丁胺醇(Sal)人工抗原、制备沙丁胺醇多克隆抗体,试验采用碳二亚胺法和琥珀酸酐法合成了免疫抗原Sal-HS-BSA和检测抗原Sal-HS-OVA,通过紫外扫描(UV)法和SDS-PAGE电泳法进行鉴定,并以Sal-HS-BSA免疫新西兰大白兔,获得了高效价和高敏感性的多克隆抗体。结果表明:Sal与载体蛋白上的牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵白蛋白(OVA)耦联成功,耦联比分别为7.7∶1和8.6∶1;抗体效价达到1∶1×105,对Sal的半数抑制浓度(IC50)为9.12 ng/mL。说明对人工合成抗原进行免疫可获得高效价、敏感的多克隆抗体。 李春生 吴萌 李君华 李玉静 程华 张小兵 闫静辉关键词:沙丁胺醇 人工抗原 多克隆抗体 磺胺二甲嘧啶药物残留ELISA检测试剂盒的研制及初步应用 被引量:2 2013年 本试验旨在采用重氮化法合成的免疫抗原通过免疫BALB/c小鼠进行融合,获得高特异、高灵敏度的单克隆抗体。在建立磺胺二甲嘧啶单克隆抗体(SM2 mAb)杂交瘤细胞株和阻断ELISA的基础上,初步研制出一种一步法检测磺胺二甲嘧啶(SM2)的ELISA快速检测试剂盒(SM2-Kit)。结果表明:SM2-Kit检测范围为0.5~40.5μg/L,检测时间为30 min,IC50为1.4μg/L,最低检测限达0.1μg/L。经大量现场试验,猪肉组织最低检测限为1μg/kg,猪饲料最低检测限为1μg/kg,猪尿最低检测限为1.8μg/L,牛奶最低检测限为1.5μg/L,测试的回收率平均在70%~110%。 李君华 米振杰 李志平 金世清 陈宝明 吴萌关键词:ELISA 抗沙丁胺醇单克隆抗体制备与鉴定 被引量:4 2011年 [目的]制备特异性抗沙丁胺醇单克隆抗体,为其免疫学检测方法的建立奠定基础。[方法]用SAL-BSA抗原免疫BALB/c小鼠;使用细胞融合技术建立抗SAL的单克隆抗体(SAL mAb)杂交瘤细胞株;体内诱生腹水法制备SAL mAb,并鉴定其免疫学特性。[结果]筛选出2D9和1C4两株杂交瘤细胞,其细胞培养上清效价达1∶104,腹水效价达1∶106;免疫球蛋白亚型鉴定为IgG1;抗体对SAL的半数抑制浓度(IC50)为1.14 ng/ml;与沙丁胺醇和盐酸克伦特罗的交叉反应率(CR)分别为100.00%和26.09%,与其他化合物无交叉反应。[结论]获得了高效价、敏感且异性的抗SAL抗体,为沙丁胺醇残留的免疫学检测方法的建立奠定了基础。 李春生 吴萌 李君华 齐颖颖 李玉静 闫静辉关键词:沙丁胺醇 杂交瘤 单克隆抗体