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国家自然科学基金(30973562)

作品数:8 被引量:18H指数:2
相关作者:贾培媛王玉霞武军华王晨宇赵宇更多>>
相关机构:军事医学科学院北京军区总医院中国人民解放军总医院更多>>
发文基金:国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家科技重大专项更多>>
相关领域:医药卫生更多>>

文献类型

  • 8篇中文期刊文章

领域

  • 8篇医药卫生

主题

  • 5篇酶联
  • 5篇酶联免疫
  • 5篇免疫
  • 4篇酶联免疫吸附
  • 4篇酶联免疫吸附...
  • 3篇单克隆
  • 3篇单克隆抗体
  • 3篇蛋白
  • 3篇抗体
  • 3篇克隆
  • 3篇蓖麻毒
  • 3篇蓖麻毒素
  • 2篇脱毒
  • 1篇蛋白质
  • 1篇低氧
  • 1篇毒素
  • 1篇毒素检测
  • 1篇抑制蛋白
  • 1篇印迹
  • 1篇英文

机构

  • 6篇军事医学科学...
  • 2篇北京军区总医...
  • 2篇北京市疾病预...
  • 2篇中国人民解放...
  • 1篇吉林大学
  • 1篇军事科学院
  • 1篇山东天兴生物...

作者

  • 6篇武军华
  • 6篇王玉霞
  • 6篇贾培媛
  • 4篇王晨宇
  • 3篇赵宇
  • 2篇李倩
  • 2篇魏文清
  • 2篇高珊
  • 2篇黄春倩
  • 2篇刘晶
  • 2篇董娜
  • 1篇吴少平
  • 1篇李倩
  • 1篇睢大筼
  • 1篇钟玉环
  • 1篇李桦
  • 1篇郎立伟

传媒

  • 3篇中国药理学与...
  • 2篇国际药学研究...
  • 1篇The Ch...
  • 1篇中国社会工作
  • 1篇军事医学

年份

  • 1篇2018
  • 3篇2013
  • 4篇2011
8 条 记 录,以下是 1-8
排序方式:
脱毒蓖麻籽粕中蓖麻毒素的提取及测定被引量:1
2013年
目的优化双夹心ELISA法检测蓖麻籽粕中蓖麻毒素含量检测方法,并对方法学进行必要的验证。方法以蓖麻籽粕中蓖麻毒素的含量为指标,对提取溶剂、蓖麻籽粕与溶剂体积比、提取时间、提取过程是否匀浆进行单因素实验,选取最佳提取条件。在最佳提取条件下对方法的精密度和准确度进行验证。结果优化出双夹心ELISA法检测蓖麻籽粕中蓖麻毒素的最佳提取溶剂为含0.1%Tween 20的磷酸盐缓冲液(PBST),提取溶剂体积为1∶10(质量/体积),匀浆后提取浸泡时间为1 h。该方法特异性高,蓖麻籽粕中杂质成分对测定无干扰。蓖麻毒素在3.91~250μg/L浓度范围内线性关系良好,日内和日间精密度测定的相对标准偏差(RSD)值分别小于3.2%和11.8%。同一样品重复测定日间RSD值小于5.5%。结论蓖麻籽粕中的残余蓖麻毒素可采用优化后的实验方法进行有效提取,应用双夹心ELISA方法进行毒素含量的定量分析,该方法为蓖麻籽粕脱毒工艺的确定及脱毒样品的质量控制提供了技术支持。
李倩董娜武军华王玉霞贾培媛张任鹏睢大筼
关键词:蓖麻毒素酶联免疫吸附分析
膨化脱毒处理后蓖麻籽粕中蓖麻毒素的检测被引量:1
2013年
目的检测膨化脱毒蓖麻籽粕中的残余毒素。方法蓖麻籽粕经过粉碎、匀浆及离心后得到匀浆上清,应用酶联免疫吸附分析(ELISA)、免疫印迹、金标免疫层析试纸检测蓖麻籽粕在PBST匀浆上清中的蓖麻毒素;应用细胞生长抑制实验测定蓖麻籽粕在生理盐水匀浆上清的细胞毒性。结果经双夹心ELISA检测蓖麻原粕匀浆含有较高浓度的蓖麻毒素,达到0.25 mg/g;对细胞生长有明显的抑制作用;应用蓖麻毒素检测试纸显示强阳性条带。应用试纸条检测经加热膨化处理后的样品只显示微弱条带。ELISA检测结果表明加热膨化处理后蓖麻籽粕中的毒素含量明显下降,脱毒率达到99%以上。加热膨化处理后样品的匀浆上清在高浓度时对细胞生长仍有一定抑制作用,但与原粕比较细胞毒性明显下降;应用免疫印迹检测蓖麻籽粕结果与ELISA和细胞实验结果一致。结论本研究将ELISA、免疫印迹和免疫层析试纸相结合,建立了有效检测蓖麻籽粕中残余蓖麻毒素的方法,为蓖麻籽粕脱毒处理样品的质量检测及其应用提供了实验依据。
武军华李倩董娜王玉霞贾培媛梁晓赵元忠
关键词:蓖麻毒素酶联免疫吸附分析免疫印迹
竞争性ELISA方法检测小鼠血清中的P53蛋白被引量:2
2011年
目的建立动物组织内P53蛋白的免疫检测分析方法,为P53生物药物的代谢分布研究提供检测手段。方法辣根过氧化物酶(HRP)标记抗P53蛋白单克隆抗体3P40,应用标记后的抗体及重组P53蛋白的检测,建立竞争性ELISA检测方法;应用此方法建立血清样品中P53蛋白标准曲线,测定腹腔注射P53后不同时间小鼠血清中P53浓度。结果利用亲和层析纯化的3P40,进行HRP标记,ELISA检测3P40HRP滴度可达1∶200 000;建立的竞争性ELISA方法可以检测PBST中P53蛋白,灵敏度达30 ng/ml,日内精密度较高,相对标准偏差(RSD)小于5%,体现较好的重复性;分别应用正常小鼠血清、PBST稀释的重组P53蛋白样品进行竞争性ELISA检测,结果显示小鼠血清成分对P53蛋白检测有一定的影响;应用血清制备P53蛋白的标准曲线,检测了腹腔注射P53蛋白后不同时间点小鼠血清样品中的P53蛋白浓度。结论进行了抗P53单克隆抗体3P40的HRP标记,建立了竞争性ELISA方法,可用于P53蛋白药物血药浓度检测。
武军华魏文清贾培媛王晨宇赵宇刘晶黄春倩王玉霞
关键词:P53蛋白单克隆抗体酶联免疫吸附分析
金黄色葡萄球菌肠毒素A检测方法的建立及其应用(英文)被引量:1
2018年
目的建立一种敏感、特异、便捷的方法,用于检测食源性金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)。方法采用经典的细胞融合技术制备抗SEA的单克隆抗体,亲和层析纯化抗体蛋白,ELISA方法测定抗体滴度,免疫层析分析抗体亚型。以抗SEA单抗为一抗,建立Western印迹法,检测不同食物样品中的SEA。结果筛选出3株抗SEA的单抗,命名为SEA-7,SEA-18和SEA-86。纯化后的3株单抗纯度均>90%,抗体滴度均在1∶32 000,经鉴定均为IgG1亚型。利用3株单抗建立检测SEA的Western印迹法,SEA-7的检测灵敏度最高,可达1.56 ng。以SEA-7为一抗,可检测出不同食物中污染的SEA,如污染了1.56 ng SEA的水,污染了5 ng SEA的粥或火腿肠匀浆。结论建立的检测SEA方法可靠灵敏,可用于监测食源性金黄色葡萄球菌污染。
李倩武军华高珊高珊魏文青王玉霞
关键词:金黄色葡萄球菌肠毒素A单克隆抗体毒素检测
Preparation of monoclonal antibody to P53 and its clinical application被引量:1
2013年
Objective:The aim of this study was to prepare monoclonal antibody against P53, a kind of tumor suppressor protein,and use the antibody initial y in clinical immunoassay. Methods:Monoclonal antibody was prepared and identified via the classic protocol of monoclonal antibody preparation. Identified monoclonal antibodies were purified by af inity chro-matography. Antibody titer was determined by enzyme linked immunosorbent assay (ELISA). The specific binding activity of antibody was detected by Western blotting and immunohistochemistry. Results:Three strains of monoclonal antibodies named 1P15, 2P37 and 3P40 were obtained and purified by af inity chromatography. The purity of antibodies was higher than 90%. The titers of antibodies were more than 1:6000. Western blot and immunohistochemistry assay showed that the specific antibody can combine with endogenous P53 protein in the tumor celllines and determine the expression of P53 in tumor tis-sue. Conclusion:Three strains of monoclonal antibodies with high af inity to P53 were successful y established, which can be used for detecting the expression of P53 in tumor cells or tissue.
Wenqing WeiJunhua WuJing LiuYuxia Wang
生物样品中蓖麻毒素的双夹心酶联免疫定量检测方法及应用被引量:11
2011年
目的建立定量检测生物样品中蓖麻毒素的双夹心ELISA方法并研究毒素在大鼠体内的分布。方法利用抗蓖麻毒素的单克隆抗体(MAb)3D74和辣根过氧化物酶(HRP)标记的小鼠抗蓖麻毒素单克隆抗体4C13,建立了定量检测血清和组织样品中蓖麻毒素的双夹心ELISA方法,并对方法学进行了必要的验证。结果建立的双抗夹心ELISA方法检测组织中蓖麻毒素的浓度范围为1.25~320 ng/ml,最低定量限为2.5 ng/ml,日内和日间精密度分别小于3.5%和9%。将该方法应用于蓖麻毒素组织分布的定量测定,结果显示,大鼠静脉染毒后毒素可以在心、肝、脾、肺、肾、肠和脂肪等组织分布,以脾脏的分布为最高,其次为肝脏,染毒后0.5和2 h脾与血清的比值分别为3.9和7.2。在脑和肌肉中未检出毒素。结论建立的双夹心ELISA方法简便、灵敏,可以用于定量检测血清和组织等生物样品中的毒素含量,为蓖麻毒素的毒物代谢动力学研究及毒素中毒的快速检测提供了技术支撑。
王晨宇郎立伟钟玉环王玉霞贾培媛武军华李桦
关键词:蓖麻毒素酶联免疫分析
肿瘤抑制蛋白质P53单克隆抗体的制备及其免疫活性分析被引量:3
2011年
目的制备可特异性地识别肿瘤抑制蛋白质P53的单克隆抗体。方法应用重组人野生型P53蛋白为免疫抗原,采用经典的细胞融合技术制备单克隆抗体。亲和层析纯化抗体蛋白;ELISA测定抗体滴度。纯化的抗体作用于含有不同p53基因型的MDA-MB-231〔p53(mutant)〕和〔H1299,p53(null)〕肿瘤细胞系,Western印迹、免疫组化和免疫荧光染色法检测抗体与内源性P53蛋白的结合特异性。结果对筛选到的3株单克隆抗体1P15,2P37和3P40,进行了亲和层析技术纯化。SDS-PAGE结果显示,纯化后的3株抗体纯度均在90%以上;ELISA滴度测定结果显示,3株单抗的滴度均在1∶6000以上。免疫印迹结果表明,3株抗体在p53检测中具有较高的灵敏度,其中3P40的灵敏度最高,可以达到5 ng。Western印迹、免疫组化以及免疫荧光染色结果显示,抗体与细胞内源性P53蛋白的结合特异性,说明3P40可以特异性地结合细胞总蛋白提取物以及细胞中内源性P53蛋白,而在检测不表达P53蛋白的细胞系样品时,没有非特异性结合。结论成功制备3株对P53具有高亲和力的单克隆抗体,其中3P40的抗体滴度和灵敏度最佳。
武军华魏文清贾培媛赵宇王晨宇刘晶王玉霞
关键词:肿瘤抑制蛋白质P53单克隆抗体酶联免疫吸附分析
反式激活蛋白-氧依赖性降解结构融合结构域介导蛋白跨膜转运和氧依赖性降解作用
2011年
目的研究反式激活蛋白(TAT)蛋白转导结构域介导的融合蛋白的跨膜转运,以及氧依赖性降解(ODD)结构域介导融合蛋白在体内外不同氧分压环境中的降解作用。方法将TAT,ODD以及增强绿色荧光蛋白(EGFP)基因序列进行融合,构建了TAT-ODD-EGFP融合蛋白基因。将该序列克隆到原核表达载体pET28a中,在BL21工程菌中进行表达,通过亲和柱层析法纯化,得到高纯度的融合蛋白。同方法制备EGFP和TAT-EGFP融合蛋白作为对照。在20%O2和1%O2将融合蛋白与A549,H1299和MDA-MB-231细胞系孵育,荧光显微镜下观察融合蛋白在细胞中的分布以及稳定性。小鼠尾静脉注射不同融合蛋白(10 mg.kg-1),分别在注射后1,6和12 h处死动物,取脏器在荧光显微镜下观察融合蛋白的分布及稳定性。结果由于EGFP相对分子质量大,无法穿透细胞及组织。TAT可以有效地介导TAT-EGFP进入细胞和动物实体组织,其稳定性不受细胞或组织中氧分压的影响,而TAT-ODD-EGFP进入细胞或组织后,在20%O2条件下迅速降解,但可稳定存在于1%O2细胞及组织中。结论 TAT可以有效地转导融合蛋白穿过细胞膜。引入ODD,20%O2下融合蛋白TAT-ODD-EGFP迅速降解,但可以稳定存在于1%O2细胞和组织中,说明TAT-ODD可以转导蛋白进入并靶向存在于低氧的肿瘤组织中。
赵宇武军华贾培媛吴少平高珊王晨宇黄春倩王玉霞
关键词:低氧TAT增强型绿色荧光蛋白
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