江西省卫生厅重大招标项目(200205)
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
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- hTERT基因启动子调控表达绿色荧光蛋白基因的逆转录病毒载体的构建及在人宫颈癌Hela细胞中的表达
- 2008年
- 目的探讨人端粒酶逆转录酶(humantelomerase reserved transcriptase,hTERT)基因启动子调控表达增强型绿色荧光蛋白基因(enhanced green fluorescence protein,EGFP)的逆转录病毒载体的构建及其在人宫颈癌Hela细胞中的表达。方法经SacI/BglⅡ双酶切phTERT-luc质粒,获得hTERT启动子的基因片段;定向连接到被SacI/BamHⅠ双酶切的pEGFP-N2质粒上,获得phTERT-EGFP-N2,并以其为模板,利用PCR技术,克隆出hTERT启动子和EGFP基因片段;再经EcoRI/BamHⅠ双酶切,定向插入到逆转录病毒plxsn的多克隆位点,再获得目的重组载体plxsn-hTERT-EGFP,并进行酶切鉴定,并将重组质粒转染人宫颈癌Hela细胞36 h后观察荧光表达情况。结果phTERT-EGFP-N2的构建与鉴定结果显示,phTERT-EGFP-N2构建成功。plxsn-hTER-T-EGFP的构建与鉴定结果显示,阳性重组质粒plxsn-hTERT-EGFP(7 023 bp)经EcoRI/BamHⅠ双酶切,获得1 165、5 858 bp 2片段;阴性重组质粒plxsn(5 874 bp)经EcoRI/BamHⅠ双酶切,获得16、5 858 bp 2片段;证实plxs-n-hTERT-EGFP构建成功。倒置荧光显微镜下观察结果显示,plxsn空载体及重组质粒plxsn-hTERT-EGFP转染Hela细胞,经plxsn空载体转染的Hela细胞不能观察到任何荧光;而经plxsn-hTERT-EGFP转染的Hela细胞可见到绿色荧光蛋白的表达。结论成功构建了hTERT基因启动子调控的表达绿色荧光蛋白基因的逆转录病毒载体并获得表达。
- 邓俊晖余新邵江华
- 关键词：绿色荧光蛋白逆转录病毒人宫颈癌HELA细胞
