重庆市卫生局医学科研项目(2012-2-053)
- 作品数：3 被引量：10H指数：2
- 相关作者：付健罗文军唐博孙建明陈以宽更多>>
- 相关机构：重庆医科大学附属第二医院更多>>
- 发文基金：重庆市卫生局医学科研项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 新型大鼠下腔静脉血栓模型的建立及血栓溶解演变过程研究被引量：8
- 2015年
- 目的探讨一种新的大鼠下腔静脉血栓模型建立方法,并动态研究静脉血栓溶解的自然演变过程和相关机制。方法 SD大鼠48只随机分为实验组和对照组。实验组缩窄下腔静脉管腔面积80%~90%,然后随机分为3组（n=12）：A组结扎左肾静脉以下下腔静脉所有属支并以神经生物夹刺激静脉壁诱导血管内皮损伤;B组联合神经生物钳损伤下腔静脉壁;C组联合结扎下腔静脉所有属支。对照组（D组,n=12）为假手术组,仅游离而不缩窄下腔静脉。术后比较各组静脉血栓的长度、重量和管腔面积百分比,确定下腔静脉血栓动物模型的最佳建模方式。另取大鼠30只,按最佳方式建模,术后行下腔静脉造影及血栓HE和Masson染色、ED-1免疫组化染色,动态分析静脉血栓溶解的自然演变过程及参与此过程的细胞类型。结果大体观察结果显示A、B、C组均成功诱导血栓形成,A组血栓长度及重量明显高于B、C组（P〈0.01）,而B、C组间比较无明显差异（P〉0.05）,D组无血栓形成。A组静脉血栓占下腔静脉管腔面积明显大于B、C组（P〈0.01）,确定A组为最佳动物模型组。最佳模型组血栓HE和Masson染色结果显示,随时间推移,血栓溶解过程中新生毛细血管逐渐增多,胶原纤维及细胞外基质成分含量逐渐增加;ED-1染色结果显示血栓溶解过程伴有大量巨噬细胞浸润;静脉造影结果表明下腔静脉血栓自然溶解完全再通需3~4周。结论采用缩窄下腔静脉管腔联合结扎静脉属支并损伤血管壁法诱导形成的大鼠下腔静脉血栓与人类深静脉血栓近似,可作为建立深静脉血栓动物模型的首选方法。大鼠下腔静脉血栓的自然溶解演变过程伴随血管新生,而巨噬细胞在此过程中具有重要作用。
- 付健唐博陈以宽孙建明罗文军
- 关键词：静脉血栓形成疾病模型动物病理过程
- 大鼠血小板衍生生长因子C重组腺病毒载体的构建及在内皮祖细胞中的表达
- 2013年
- 目的构建含大鼠血小板衍生生长因子C(PDGF-C)基因的pAD-EGFP-PDGF-C的重组腺病毒表达载体,体外转染骨髓源性内皮祖细胞(EPCs)并观察目的基因蛋白及mRNA表达情况。方法通过逆转录聚合酶链式反应技术(RT-PCR)法从pIRES2-EGFP-PDGF-C真核表达载体中获得PDGF-C目的片段,经BP重组与LR重组插入到pAD/CMV/V5-DEST,构建pAD-PDGF-C-IRES2-EGFP腺病毒载体。酶切及DNA测序鉴定后转染HEK293A包装、纯化,测定病毒滴度后转染大鼠骨髓源性EPCs,应用Real-time qPCR、蛋白免疫印迹法(Western blotting)等方法检测PDGF-C蛋白及mRNA的表达。结果核酸内切酶消化及PCR分析证实PDGF-C基因成功插入pAD/CMV/V5-DEST腺病毒载体,转染后荧光显微镜下观察可见绿色荧光蛋白表达,转染48h后实时定量酵素聚合反应技术(Real-time qPCR)测定EPCs中PDGF-C含量明显提高(P<0.05),Wester blotting检测证实在46×103存在特异性条带。结论成功构建了大鼠PDGF-C基因的腺病毒表达载体pAD-EGFP-PDGF-C,体外转染大鼠骨髓源性EPCs能高效表达目的基因产物,为后续研究PDGF-C基因功能以及进一步开展基因治疗奠定了基础。
- 李锋罗文军唐博陈以宽孙建明付健
- 关键词：CMV内皮祖细胞
- 血小板衍生生长因子CC在大鼠静脉血栓溶解过程中的表达及其意义被引量：2
- 2013年
- 目的探讨静脉血栓溶解过程中血小板衍生生长因子CC(PDGF-CC)的表达情况及其意义。方法取健康成年雄性SD大鼠建立下腔静脉血栓模型,设对照组及血栓组,血栓组分别于术后1、3、7、14、21、28d收集下腔静脉血管壁及血栓标本(n=12)。应用Western blotting及实时荧光定量PCR分别检测血栓自然溶解过程中大鼠下腔静脉管壁及血栓内PDGF-CC蛋白及mRNA的表达;取术后7d大鼠下腔静脉血管壁及血栓标本(n=3),用于病理组织形态学及PDGF-CC免疫组化观察。结果 Western blotting检测显示,术后1～28d大鼠下腔静脉血栓中均有PDGF-CC蛋白表达,以术后7d表达量最高(P<0.05);Real-time qPCR检测显示,术后1～28d大鼠下腔静脉血栓中均有PDGF-CC mRNA表达(P<0.05),其中术后7d相对表达量最高,为对照组的77.71倍;下腔静脉血管壁中同样有PDGF-CC蛋白及mRNA表达,但表达量均较低,组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。免疫组化染色显示术后7d的血栓标本中,新生血管周围有PDGF-CC特异性表达。结论 PDGF-CC在大鼠下腔静脉血栓自然溶解过程中呈较高水平表达,且在血栓中的新生血管周围有特异性表达,提示其在血栓溶解过程中可能具有重要作用。
- 付健罗文军孙建明唐博陈以宽
- 关键词：静脉血栓形成血小板源性生长因子新生血管化病理性
