四川省重点科学建设项目(SZD0421)
- 作品数：24 被引量：71H指数：4
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- 相关机构：泸州医学院附属医院西南医科大学附属医院荆州市中心医院更多>>
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- 肝纤维化相关细胞因子双重RNA干扰质粒的构建及转染肝星状细胞研究被引量：1
- 2012年
- 目的构建以大鼠CTGF和TIMP-1基因为靶点的双重RNA干扰表达载体质粒,以检测其转染肝星状细胞的效率。方法筛选出对CTGF和TIMP-1基因最有效的RNA干扰靶位,各设计1对含有短发夹结构的RNA干扰靶点序列,分别克隆到质粒载体psiRNA-DUO-GFPzeo,构建含目的靶基因片段的重组质粒载体psiRNA-GFP-CT-GF、psiRNA-GFP-TIMP-1和psiRNA-GFP-Com(含有CTGF和TIMP-1),进行酶切和测序鉴定。将构建成功的重组质粒psiRNA-GFP-CTGF、psiRNA-GFP-TIMP-1和psiRNA-GFP-Com转染大鼠肝星状细胞,在荧光显微镜下观察质粒转染情况,用流式细胞仪检测转染效率。结果酶切与测序结果提示重组质粒psiRNA-GFP-CTGF、psiR-NA-GFP-TIMP-1和psiRNA-GFP-Com成功构建;成功将重组质粒psiRNA-GFP-CTGF、psiRNA-GFP-TIMP-1和psiRNA-GFP-Com转染肝星状细胞,在24小时,空质粒组、CTGF组、TIMP-1组和CTGF+TIMP-1组转染效率分别为15±2%、13±1%、15±1%和14±2%,均低于质粒psiRNA-GFP-Com转染组(Com组,20±2%,P<0.05);在48小时,空质粒组、CTGF组、TIMP-1组和CTGF+TIMP-1组转染效率分别为10±2%、9±1%、8±2%和10±1%,均低于Com组的15±2%(P<0.05)。结论成功构建靶向大鼠CTGF和TIMP-1最有效的RNA干扰靶位的双重RNA干扰表达质粒,能转染至肝星状细胞,并且psiRNA-GFP-Com转染效率最高。
- 蒋玉凤周德江张建军黄飞史小玲
- 关键词：RNA干扰质粒载体结缔组织生长因子金属蛋白酶组织抑制因子-1肝星状细胞
- CYP2E1和NAT2基因多态性与抗结核药物诱导的药物性肝损伤关系的荟萃分析被引量：3
- 2017年
- 目的明确细胞色素氧化酶P450 2E1(cytochrome P450 2E1,CYP2E1)和N-乙酰基转移酶-2(N-acetyltransferase-2,NAT2)基因多态性与抗结核药诱导的药物性肝损伤(anti-tuberculosis drug-induced hepatotoxicity,ATDH)之间的关系。方法计算机检索Medline/Pubmed、EMBASE、Web of Science数据库和Cochrane图书馆中所有有关CYP2E1基因多态性与ATDH关系的研究文献。根据文献纳入及排除标准筛选文献,并对文献进行质量评价。采用OR及95%CI作为分析疗效的统计量。采用Revman 5.0软件统计分析。结果共计纳入研究文献9篇,入选2049例研究对象。CYP2E1基因Pst I/Rsa I多态性中,c1/c1型比c1/c2和c2/c2型有更高的ATDH发生率(OR=1.38,95%CI:1.08~1.77,P=0.01);在Dra I多态性中各型之间无差异(OR=0.78,95%CI:0.51~1.18,P=0.23)。与携带NAT2快速或中速乙酰化的c1/c1型人群比较,携带NAT2慢速乙酰化的c1/c1型人群具有更高的ATDH风险(OR=3.10,P<0.0001)。结论 CYP2E1基因c1/c1型是ATDH发生的风险因素,且合并慢速乙酰化的NAT2基因型时可进一步增加ATDH发生率。
- 盛云建何鸿雁
- 关键词：基因多态性结核药物性肝损伤
- 血清转化生长因子β_1及肝细胞生长因子与慢性乙型肝炎早期肾损害关系的研究
- 2005年
- 目的探讨血清转化生长因子β1(TGF-β1)、肝细胞生长因子(HGF)与慢性乙型肝炎(CHB)早期肾损伤的关系。方法对2004年泸州医学院附属医院感染科44例慢性乙型肝炎(轻度)住院患者用双抗体夹心ELISA法和放射免疫法测定血清TGF-β1、HGF和尿α1微球蛋白(α1-MG)、尿微量白蛋白(mALB)质量浓度并与20名健康人作对照。结果44例CHB中早期肾损害组24例,无肾损害组20例;慢性乙型肝炎患者血清TGF-β1、HGF高于对照组(P<0.01);早期肾损害组患者血清TGF-β1、HGF明显高于无肾损害组患者(P<0.01);且血清TGF-β1、HGF与早期肾损害指标:尿α1-MG、mALB质量浓度呈正相关(r分别=0.718,0.683,0.664,0.637)。结论慢性乙型肝炎早期肾损害患者血清TGF-β1、HGF均升高,可能是机体损害与抗损害反馈调节所致。
- 宋新文邓存良盛云建陈枫王明勇史小玲
- 关键词：早期肾损害慢性乙型肝炎细胞因子
- 两种不同肝纤维化相关细胞因子shRNA重组质粒的构建被引量：2
- 2011年
- 目的构建以大鼠结缔组织生长因子(CTGF)和金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP-1)基因为靶点的短发夹RNA(shRNA)表达质粒。方法根据前期筛选出的对CTGF和TIMP-1基因最有效的RNA干扰靶位,各设计一对有短发夹结构的RNA干扰(RNAi)靶点序列,退火形成双链DNA,克隆到质粒载体psiRNA-h7SKGFPzeo;构建重组质粒载体psiRNA-GFP-CTGF和psiRNA-GFP-TIMP-1,并进行酶切与测序鉴定。结果酶切与序列测定均提示重组质粒psiRNA-GFP-CTGF和psiRNA-GFP-TIMP-1构建成功。结论成功构建靶向大鼠CTGF和TIMP-1最有效的RNAi靶位的shRNA表达质粒,为进一步探索肝纤维化基因治疗的新途径打下了实验基础。
- 蒋玉凤刘加群张建军孙华丽黄飞
- 关键词：金属蛋白酶类RNA干扰质粒肝纤维化
- 肾上腺髓质素在肝硬化大鼠肝脏、门静脉的表达及意义被引量：1
- 2005年
- 目的 探测肾上腺髓质素(ADM)在肝硬化大鼠门静脉血浆浓度及在肝脏、门静脉的表达。方法 以CCL4诱导肝硬化大鼠模型,正常大鼠作对照。造模完成后于门静脉采血,同时取门静脉及肝组织。以放射免疫法测定大鼠门静脉血浆ADM浓度。免疫组化染色(SABC法)检测ADM在大鼠肝脏及门静脉的表达,并以Ridit分析作半定量分析。结果 肝硬化大鼠门静脉血浆ADM浓度明显高于正常大鼠(5 3 .61±18.2 7对3 6.84±12 .67,t=3 .2 1,P <0 .0 1)。正常大鼠除肝窦外,肝细胞内也有ADM表达,肝硬化时肝脏和门静脉表达均明显增加(U肝脏=2 .69,P <0 .0 5 ;U门静脉=2 .2 7,P <0 .0 5 )。结论 肝硬化时ADM在肝细胞、肝窦内皮细胞,门静脉血管的表达及门静脉血浆浓度均较正常大鼠升高。肝细胞、肝窦内皮细胞,门静脉表达ADM增加可能是循环ADM浓度增高的一个因素。肝硬化时ADM可能在门静脉压力的调节中发挥重要作用。
- 陈文李显蓉邓存良王明勇龙汉安陈枫
- 关键词：肾上腺髓质素大鼠肝脏肝硬化放射免疫法测定RIDIT分析静脉血浆
- 早期肾损伤的慢性乙型肝炎患者PBL Fas表达和凋亡的检测及意义
- 2005年
- 目的 初步研究外周血淋巴细胞激活诱导细胞死亡 (AICD)在慢性乙型肝炎患者早期肾损伤中可能存在的作用。方法 分离 2 0例正常健康人 (A组 )、2 4例慢性乙型肝炎无肾损伤者 (B组 )及 2 0例慢性乙型肝炎早期肾损伤者 (C组 )外周血淋巴细胞 (PBL) ,用流式细胞仪检测PBLFas表达率及培养后凋亡情况。结果 C组PBLFas表达及AICD分别为 39.6 8± 8.88,4 1.4 4±12 .78;B组为 30 .97± 13.6 9,2 8.87± 12 .2 4 ;A组为 19.0 3± 10 .2 4 ,19.4 5± 9.6 6。C组PBLFas表达及AICD明显高于其他两组 (P <0 .0 5 )。结论 PBLFas表达和AICD增加 ,可能在慢性乙型肝炎患者早期肾损伤中起一定作用。
- 邓存良盛云建陈枫宋新文彭建一王明勇
- 关键词：FAS表达慢性乙型肝炎患者PBL凋亡AICD表达率
- 灵芪蠲肝液抗CCl_4诱导的肝损伤机制研究被引量：5
- 2012年
- 目的:研究灵芪蠲肝液对CCl4实验性肝损伤大鼠Toll样受体4(TLR4)表达的影响。方法:84只Wistar大鼠于0周随机取8只作为正常组,于第1周随机取72只大鼠皮下注射40%的CCl4花生油溶液连续10周造模,第4周随机从造模大鼠中取36只作为治疗组,在造模同时予灵芪蠲肝液治疗,另36只为模型组,2组于4、6、8、10周各随机取8只大鼠同正常组观察以下指标:以逆转录PCR法检测Kupffer细胞(KCs)TLR4mRNA表达,以免疫组织化学法检测肝组织TLR4、核转录因子(NF)-κB蛋白表达;以放免法检测血清肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β水平,以基质显色终点法检测内毒素水平。结果:与模型组相比,治疗组能明显降低血清TNF-α、IL-1β和内毒素水平,且KCsTLR4mRNA、肝组织TLR4、NF-κB蛋白表达和KnodellHAI炎症积分也明显降低(P<0.05或P<0.01)。血清内毒素水平与KCsTLR4mRNA表达呈正相关(r=0.845,P<0.01)。结论:灵芪蠲肝液可通过降低血清内毒素、KCsTLR4mRNA表达及信号转导,减少炎症因子生成起抗大鼠实验性肝损伤的作用。
- 盛云建吴刚陈炘邓存良
- 关键词：四氯化碳肿瘤坏死因子ΑTOLL样受体4灵芪蠲肝液
- 结缔组织生长因子和金属蛋白酶组织抑制因子-1 RNA干扰靶位的筛选被引量：3
- 2011年
- 目的筛选能有效抑制肝纤维化形成的结缔组织生长因子(CTGF)和金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)的RNA干扰靶位。方法根据大鼠CTGF和TIMP-1基因序列,分别设计3个RNA干扰候选靶位,化学合成双链RNA(dsRNA),各自转染或不同组合后转染经TGF-β1刺激活化的大鼠肝星状细胞(HSC),48h后抽提RNA并逆转录成cDNA,采用荧光定量PCR法测定并计算CTGF和TIMP-1、Ⅰ型前胶原(procol-α1)mRNA的相对表达量与抑制率,采用RIA法检测HSC培养上清液肝纤维化指标。结果在进行单独针对CTGF基因干扰时,CTGF-3组对CTGF mRNA及其下游产物Procol-α1 mRNA的转录抑制作用最佳(抑制率分别达68.09%与65.03%),在单独针对TIMP-1基因干扰时,TIMP-1-3组对TIMP-1 mRNA及其下游产物Procol-α1 mRNA的转录抑制作用最佳(抑制率分别达68.55%与62.84%);在联合干扰时,CTGF-3/TIMP-1-3组联合对CTGF mRNA和TIMP-1 mRNA的抑制最强(抑制率分别达76.60%与79.03%),而以CTGF-2/TIMP-1-3组联合对Procol-α1 mRNA的抑制作用最强(抑制率达85.79%)。结论成功筛选出针对CTGF和TIMP-1最有效的RNA干扰靶位,联合干扰较单独干扰效果更强。
- 蒋玉凤黄飞张建军刘加群孙华丽
- 关键词：肝纤维化结缔组织生长因子金属蛋白酶组织抑制因子-1肝星状细胞RNA干扰
- IL-1受体拮抗剂对大鼠肝星状细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原及TIMP-1 mRNA表达的影响被引量：4
- 2008年
- 目的:研究白细胞介素-1受体拮抗剂(IL-1ra)对大鼠肝星状细胞(HSC)Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)、Ⅲ型胶原(Col-Ⅲ)和基质金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP-1)基因表达的影响,探讨IL-1ra抗肝纤维化作用的机制。方法:原位分离、培养大鼠HSC,荧光显微镜观察及免疫细胞化学染色法鉴定。用1μg/L、10μg/L、100μg/L3个浓度的IL-1ra分别作用于HSC48h,实时荧光定量RT-PCR法检测Col-Ⅰ、Col-Ⅲ和TIMP-1mRNA的表达。结果:对照组Col-Ⅰ、Col-Ⅲ和TIMP-1mRNA的表达水平分别为1.97±0.29、2.70±0.57、3.83±0.30。加入1μg/L、10μg/L、100μg/LIL-1ra后Col-Ⅰ基因表达水平依次为1.34±0.35、0.86±0.19、0.35±0.03;Col-Ⅲ基因表达水平依次为2.02±0.29、1.13±0.09、0.47±0.11;TIMP-1mRNA的表达水平依次为3.12±0.25、2.53±0.38、1.98±0.18,与对照组比较,不同浓度处理组Col-Ⅰ、Col-Ⅲ和TIMP-1mRNA的表达均明显降低(P<0.05)。结论:IL-1ra以剂量依赖方式抑制HSC中Col-Ⅰ、Col-Ⅲ及TIMP-1mRNA的表达,具有抗纤维化作用。
- 邓存良黄捷陈文王明勇陈枫
- 关键词：肝星状细胞白细胞介素-1受体拮抗剂基质金属蛋白酶组织抑制因子-1
- 血清TGF-β_1、HGF与慢性乙型肝炎早期肾损伤关系的研究被引量：1
- 2005年
- 目的探讨血清转化生长因子β1(TGF-β1)、肝细胞生长因子(HGF)与慢性乙型肝炎(CHB)早期肾损伤的关系。方法对44例CHB患者用双抗体夹心ELISA法和放射免疫法测定血清TGF-β1、HGF和尿α1微球蛋白(α1-MG)、尿微量白蛋白(mALB)水平;20例健康人做对照。结果44例CHB中早期肾损伤24例,无肾损伤20例;CHB患者血清TGF-β1、HGF高于对照组(P<0.01);早期肾损伤者血清TGF-β1、HGF明显高于无肾损伤者(P<0.01);且血清TGF-β1、HGF与早期肾损伤指标:尿α1-MG、mALB水平成正相关(r分别=0.718,0.683,0.664,0.637)。结论CHB早期肾损伤患者血清TGF-β1、HGF均升高,可能是机体损伤与抗损伤反馈调节所致。
- 宋新文邓存良盛云建陈枫王明勇史小玲
- 关键词：早期肾损伤CHB细胞因子
