国家重点基础研究发展计划(2005CB522605)
- 作品数：48 被引量：153H指数：7
- 相关作者：粟永萍彭代智周新刘敬冉新泽更多>>
- 相关机构：第三军医大学第三军医大学西南医院重庆医科大学更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 基因捕获筛选TGF-β1诱导间充质干细胞C3H／10T1／2平滑肌分化的差异表达基因被引量：2
- 2014年
- 目的利用基因捕获方法,分离转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导小鼠胚胎间充质干细胞C3H/10T1/2(简称10T1/2细胞)平滑肌分化前后差异表达基因。方法 5 ng/mL TGF-β1诱导10T1/2细胞平滑肌分化,倒置显微镜下观察细胞形态学改变,RT-PCR鉴定平滑肌分化相关基因alpha平滑肌肌动蛋白(alpha smooth muscle actin,αSMA)、平滑肌22 alpha(smooth muscle 22 alpha,SM22α)、平滑肌肌球蛋白重链(smooth muscle myosin heavy chain,SM-MHC)和血清应答因子(serum response factor,SRF),免疫细胞化学实验检测αSMA。TGF-β1诱导建立的10T1/2细胞基因捕获阳性克隆库分化前后进行LacZ染色。cDNA末端快速扩增法(rapid amplification of cDNA ends,RACE)及电子克隆分离差异表达序列,在GenBank网站nBLAST进行生物信息学分析,用GenBank网站在线软件BankIt提交GenBank获取ID号,用pI/Mw软件计算蛋白分子量、等电点。Real-time PCR检测新基因mgt-16在BALB/c小鼠小肠、骨骼肌及心肌的表达。结果细胞形态学、RT-PCR及免疫细胞化学实验鉴定TGF-β1成功诱导10T1/2细胞平滑肌分化。LacZ染色筛选获得2个平滑肌分化后差异表达克隆。RACE、电子克隆和nBLAST分析后发现为线粒体核糖体蛋白S6(mitochondrial ribosomal protein S6,Mrps6)和新基因mgt-16。mgt-16基因位于19号染色体,编码一个93个氨基酸的蛋白(命名为mgt-16),相对分子质量为9 772.02,等电点为6.04,提交后ID号为GU266552。新基因mgt-16在BALB/c小鼠小肠表达较高,而在骨骼肌、心肌表达较低。结论利用基因捕获分离获得了TGF-β1诱导平滑肌分化前后2个差异表达基因:Mrps6和新基因mgt-16。
- 王明科姜帆孙慧勤叶枫程晋粟永萍邹仲敏
- 关键词：转化生长因子-Β1间充质干细胞平滑肌分化
- 交感神经调节在严重创伤救治中的作用与展望被引量：3
- 2009年
- 王军平粟永萍
- 关键词：颈交感神经阻滞交感神经创伤
- 人β防御素2腺病毒表达载体的构建及其在大鼠真皮多能干细胞中的表达被引量：7
- 2006年
- 目的构建和鉴定人β防御素2(HBD2)的重组腺病毒表达载体,并观察其转染大鼠真皮多能干细胞(dMSCs)后的表达。方法反转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增HBD2全长cDNA,亚克隆至穿梭质粒(pAdTrack-CMV)中,然后转化含骨架质粒(pAdEasy-1)的大肠杆菌B J5183,通过同源重组产生腺病毒载体质粒。PacⅠ酶切阳性的重组质粒后转染293细胞,包装出重组病毒载体。用所得重组腺病毒感染dMSCs细胞,并采用RT-PCR和荧光免疫组织化学检测其在dMSCs中的表达情况。结果经测序、酶切及聚合酶链反应(PCR)鉴定,表明已成功地扩增到HBD2全长cDNA,并将其顺序克隆到穿梭质粒和骨架质粒中,进而组装出腺病毒表达载体。经RT-PCR和免疫组织化学证实构建的病毒载体可感染dMSCs,并有效表达HBD2。结论本实验成功地构建了含HBD2基因的腺病毒表达载体,并证实其可在dMSCs中表达。
- 李楠肖桃元粟永萍宗兆文徐辉王军平冉新泽刘志君
- 关键词：人Β防御素2腺病毒载体真皮多能干细胞
- 人羊膜负载猪骨髓间充质干细胞体外生长的形态特点(英文)被引量：3
- 2007年
- 背景:人羊膜含胶原、糖蛋白、蛋白多糖、整合素和板层体等多种成分,表达多种生长因子及其mRNA的相关蛋白,能为细胞的增殖、分化提供丰富的营养成分,有利于细胞的生长繁殖,其能否负载培养猪骨髓间充质干细胞良好生长值得研究。目的:建立人羊膜负载培养猪骨髓间充质干细胞生长的组织工程方法,观察骨髓间充质干细胞生长增殖的形态特点。设计:随机对照观察。单位:创伤、烧伤和复合伤国家重点实验室,解放军第三军医大学预防医学院全军复合伤研究所。材料:实验于2003-01/11在解放军第三军医大学预防医学院全军复合伤研究所,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室完成。选用3只出生二三个月的贵州小香猪,雌雄不拘,体质量6～8kg,由解放军第三军医大学实验动物中心提供。主要试剂:IMDM培养基(Hyclone,USA);优质胎牛血清PAA(Germany);Eosin B(Sigma,USA);OCT包埋剂(USA)。主要仪器:BX51立式荧光显微镜(Olympus,Japan);IX70型倒置荧光显微镜(Olympus,Japan);恒冷切片机(2700-Frigcut,德国);骨髓穿刺针(江苏);超净工作台(苏净集团安泰公司);CO2恒温培养箱(QUEUE,USA)。方法:按文献所述方法准备人羊膜,将按文献所述方法分离、培养的贵州小香猪骨髓间充质干细胞贵州小香猪的骨髓间充质干细胞原代培养、传代扩增后,以不同密度(0.84×105/cm2,1.54×105/cm2,2.75×105/cm2)接种于人羊膜基质面,倒置显微镜及扫描电镜下观察不同培养密度骨髓间充质干细胞的生长增殖变化情况;将第2、3代骨髓间充质干细胞以1.54×105/cm2的密度作为合适种植密度接种到由聚酯环支撑的人羊膜的基质面,最长培养至18d,逐日经卷膜、切片、苏木精-伊红染色光镜下观察人羊膜负载骨髓间充质干细胞生长情况,同时给予扫描及透射电镜。主要观察指标:不同培养密度及不同时间点骨髓间充质干细胞在人羊膜上的生长情�
- 闫国和艾国平汪代杰邹仲敏冉新泽王军平李蓉粟永萍程天民
- 关键词：人羊膜体外生长
- 不同活性的survivin基因启动子片段的克隆及鉴定被引量：3
- 2011年
- 目的检测survivin在成体干细胞等细胞中的表达差异,克隆并比较3种不同片段长度survivin启动子的活性。方法取成纤维母细胞10T1/2、成肌母细胞C2C12、真皮多能干细胞DMSC、人骨髓间充质干细胞BMSC、结肠腺癌细胞HT29、人胚肾母细胞293FT进行培养。用RT-PCR和免疫细胞化学染色检测survivin在成体干细胞和肿瘤细胞中的表达;用基因组DNA PCR和分子克隆等方法,构建不同长度的survivin基因启动子驱动荧光素酶报告基因表达的载体,经脂质体转染293FT细胞,测定相对荧光素酶活性以反映启动子活性。结果 survivin基因在正常成体干细胞中低表达,在成肌母细胞中中度表达,在结肠腺癌细胞HT29中高表达。克隆了不同片段长度的survivin基因启动子,并连接到荧光素酶cDNA上游。在293FT细胞中,987 bp和160 bp的survivin基因启动子活性高于270 bp的survivin启动子的活性。结论 survivin基因启动子由于肿瘤特异性和泛肿瘤表达的特点,可通过载体构建应用于监控和治疗移植后干细胞的恶性转化。用高活性survivin基因启动子构建的载体可能会提高其在监控和治疗中的效果。
- 钟波叶枫王涛姜帆梁后杰庞学利邹仲敏
- 关键词：SURVIVIN基因启动子荧光素酶基因治疗
- 干扰素诱导蛋白IFIT1的克隆与原核可溶性表达被引量：1
- 2011年
- 目的研究干扰素诱导蛋白IFIT1的原核可溶性表达。方法通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)获得IFIT1编码序列,克隆入原核表达载体,电穿孔转化大肠杆菌,筛选阳性克隆,诱导细菌表达,蛋白凝胶电泳观察。结果构建的原核表达平台实现了较丰富的麦芽糖结合蛋白融合IFIT1(MBP-IFIT1)可溶性表达。结论 MBP-IFIT1的原核可溶性表达为后续IFIT1蛋白结合分析及免疫分析提供了材料及方法学基础。
- 李洪涛粟永萍徐建明冉新泽王军平艾国平程天民
- 关键词：细胞应激原核表达
- 羊膜负载骨髓干细胞与角朊细胞对放创性全厚皮肤缺损创面胶原合成的影响被引量：5
- 2009年
- 背景：人羊膜含胶原、糖蛋白、蛋白多糖和整合素等多种成分,它表达多种生长因子mRNA及其相关蛋白,有利于细胞的生长繁殖,能负载猪骨髓间充质干细胞与角朊细胞良好生长。目的：拟验证人羊膜负载骨髓间充质干细胞与角朊细胞对放创性全厚皮肤缺损创面胶原合成的影响。设计、时间及地点：同体对比观察。实验于2007-06/12在解放军第三军医大学预防医学院全军复合伤研究所,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室完成。材料：贵州小香猪8只,3-6月龄;雌雄不限,体质量7-16kg。方法：贵州小香猪8只,每只背部脊柱两侧均有放创性全层皮肤缺损圆形创面（Ф3.67cm）各3个,共48个创面。将经处理的人羊膜分别负载自体骨髓骨髓间充质干细胞和角朊细胞,移植到其左侧24个创面作为实验组（人羊膜负载两种细胞移植组）;右侧前16个创面用单纯无种植细胞的人羊膜敷盖;后8个创面用单纯油纱布敷盖。单纯人羊膜处理组和油纱布敷盖组作为对照组。主要观察指标：用图像分析法测算7-21d各组创面活检组织胶原含量。结果：移植15-21d,3组创面胶原均增加,以人羊膜负载两种细胞移植组创面胶原沉积明显,与单纯人羊膜处理组和油纱布敷盖组创面相比,差异均有显著性意义（P〈0.01）。结论：人羊膜负载自体骨髓间充质干细胞和角朊细胞植入可明显促进放创性全厚皮肤缺损创面愈合过程中胶原的合成。
- 侯爱莲闫国和粟永萍方海立
- 关键词：间质干细胞角朊细胞人羊膜胶原合成
- 放烧复合伤的发病机制与救治研究被引量：3
- 2009年
- 放射损伤合并烧伤的放烧复合伤，主要见于战时核爆炸与平时核事故，也见于贫铀弹伤害、核恐怖“脏弹”袭击等情况。两伤合并后，伤情更重，救治更难，预后更差。国内外对此研究较为重视，国外以俄、美、法等国，特别是俄罗斯Budagov项目组对放烧复合伤研究较多^[1]。国内复合伤研究始于20世纪50年代后期，
- 冉新泽程天民
- 关键词：放烧复合伤发病机制救治核事故核爆炸贫铀弹
- CCL20基因敲低型人永生化角质形成细胞克隆的体外生长特性观察被引量：1
- 2009年
- 采用MTT比色法、碘化丙啶染色法和直接免疫荧光双标记法分别观察4个CCL20基因敲低型人永生化角质形成细胞(HaCaT细胞)克隆(代号分别为Ⅱ～Ⅴ)的生长曲线、细胞周期以及表皮干细胞相关表型,预期筛选出体外生物学性状良好的表皮种子细胞克隆。结果显示,与未转染的HaCaT细胞(代号为Ⅰ)比较,Ⅲ～Ⅴ在体外培养第5、6天的光密度值显著降低;Ⅲ和Ⅳ的G2+M期显著增多;Ⅳ和Ⅴ表达CD49f^+CD71-的百分率显著升高,而表达CD49f^+CD71^+、CD71^+的百分率显著降低。可见,4个CCL20基因敲低型HaCaT细胞克隆中仅有Ⅱ表现出与未转染HaCaT类似的体外生长特性,该克隆有可能成为构建低免疫原性组织工程皮肤的表皮种子细胞。
- 何斌彭代智何升东周新刘敬王勇王丽华郑必祥左海斌
- 关键词：角质形成细胞细胞周期
- 分泌性白细胞蛋白酶抑制剂的生物学功能及其在组织修复中的作用
- 2007年
- 分泌性白细胞蛋白酶抑制剂（secretary leukocyte protease inhibitor。SLPI）也叫抗白细胞蛋白酶（antileukoprotease，AIJP）或分泌性蛋白酶抑制剂（mucous protease inhibitor，MPI），为黏膜上皮细胞分泌的非糖基化单链多肽蛋白，是一种嗜中性弹性蛋白酶阳离子抑制剂，具有抗细菌、抗病毒、抗炎症因子和诱导细胞增殖分化等生物学功能，对创伤组织的愈合也具有重要作用。SLPI基因敲除的小鼠组织愈合十分困难，
- 张炜炜艾国平
- 关键词：生物学功能PROTEASE上皮细胞分泌细胞增殖分化组织愈合
