国家科技支撑计划(2007BAD86B05)
- 作品数：14 被引量：98H指数：7
- 相关作者：李晓成张志吴发兴刘爽张燕霞更多>>
- 相关机构：中国动物卫生与流行病学中心东北农业大学云南农业大学更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划广西壮族自治区科技攻关计划陕西省“13115”科技创新工程重大科技专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 牛病毒性腹泻病毒RT-PCR检测方法的建立及应用被引量：8
- 2010年
- 根据GenBank中登录的牛病毒性腹泻病毒(BVDV)5′UTR基因序列,设计合成了1对特异性引物,建立了检测BVDV218bp片段的RT-PCR方法。通过对该方法的特异性、敏感性和重复性进行试验,结果显示,该方法从BVDV标准毒株OregonC24V中扩增出了218bp的特异性片段,而对猪瘟病毒、蓝舌病病毒、牛传染性鼻气管炎病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病病毒、MDBK正常细胞的扩增结果均为阴性。经对标准毒株的细胞毒进行检测,其敏感度达10-1TCID50。不同人员用该方法进行检测,结果均一致,表明其重复性好。应用该方法对70份临床疑似发病猪样品进行检测,结果检出11份阳性,阳性检出率约为15.7%。在对5份细胞培养用犊牛血清的检测中,亦检出2份阳性。表明,建立的RT-PCR方法具有特异、灵敏、高效、快速的特点,可用于BVDV的临床检测及流行病学监测。
- 孟雨吴发兴朱紫祥张志张燕霞刘爽李晓成王晶钰
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒反转录聚合酶链反应
- 4种猪群常见病毒基因芯片检测方法的建立与应用被引量：8
- 2012年
- 【目的】建立猪瘟病毒(CSFV)、高致病性猪蓝耳病病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)及猪细小病毒(PPV)的基因芯片检测方法,为这4种病的实验室诊断和流行病学调查提供一种快速、高效的病原学诊断方法。【方法】根据GenBank中CSFV、高致病性PRRSV、PCV-2、PPV的相关基因序列,设计合成相关引物,采用PCR方法得到具有荧光标记的PCR产物,然后与含有特定检测探针的芯片进行杂交,建立其基因芯片检测方法,并对该方法的灵敏性和重复性进行检测。应用建立的基因芯片检测方法,对150份临床样品进行检测。【结果】建立了针对CSFV、PRRSV、PCV-2和PPV 4种病毒的基因芯片检测方法,该方法对临床150份样品的检测结果显示,CSFV阳性样品有25份,高致病性PRRSV阳性样品有45份,PCV-2阳性样品有70份,PPV的检测结果全部为阴性,其中混合感染样品有18份。【结论】建立了对CSFV、PRRSV、PCV-2、PPV 4种猪群常见病毒的基因芯片检测方法,该方法具有良好的特异性、敏感性和重复性。
- 杨若松姜金庆张志李晓成王建华任夫波张丽丽
- 关键词：基因芯片猪瘟病毒高致病性猪蓝耳病病毒猪圆环病毒2型猪细小病毒
- 猪全血中多种病原流行病学监测的初步研究被引量：4
- 2012年
- 本文利用PCR或RT-PCR技术连续两年对规模猪场采集的猪全血分别进行猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖障碍综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)和日本乙型脑炎病毒(JEV)的检测,结果发现2008年猪全血中CSFV、PRRSV、PRV、PCV2的感染率为30.0%、50.0%、4.0%和30.0%,2009年猪全血中CSFV、PRRSV、PRV、PCV2、BVDV和JEV的感染率分别为19.8%、13.7%、1.1%、31.9%、0.7%和2.7%,这表明用猪的全血可进行猪瘟等6种疫病的监测和流行,为更深入研究疫病的流行病学奠定了基础。
- 张志王赛赛李岚李蕾刘爽张艳霞郑辉吴发兴李晓成黄保续
- 关键词：全血
- 猪精液中五种病毒的初步检测被引量：13
- 2012年
- 为探明猪精液在疫病传播中的作用,应用PCR和RT-PCR技术分别从发病猪场和未发病猪场采集种公猪精液进行猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)和牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的检测。结果发现,发病猪场的种公猪精液中CSFV、PRRSV、PRV、PCV-2的感染率分别为30.0%、50.0%、4.0%和30.0%,而未发病猪场的感染率分别为4.0%、20.0%、0.0%和8.0%,这表明精液是多种猪病原传播的良好媒介,提示种公猪对于疫病的发生和传播起着重要作用。
- 张志刘爽张燕霞吴发兴郑辉李晓成黄保续
- 关键词：种公猪精液
- 猪流行性腹泻新毒株的分离鉴定和致病性研究被引量：25
- 2012年
- 为探明2011年我国猪群仔猪腹泻的病因,采用巢式RT-PCR方法对河南和辽宁省2个规模猪场采集43份出现腹泻的粪便进行猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和轮状病毒(PRoV)的检测,结果表明:43份腹泻样品均为PEDV,没有检测出TGEV和PRoV。对扩增的PEDV进行测序和分析显示,这些PEDV流行毒株均属于基因G2.3亚型,彼此之间的同源性高达99.2%～100%,与2011年韩国和2008年泰国流行的PEDV毒株同属于一个进化分支。将其中3份病料在Vero细胞传代后接种2日龄仔猪,结果发现接种后13～57h内仔猪全部死亡,接种仔猪呈现典型的腹泻症状和病理变化特征,提示了这些PEDV流行毒株具有较强的致病性。
- 张志李岚王赛赛刘爽吴发兴郑辉李蕾张燕霞李晓成
- 关键词：猪流行性腹泻RT-PCR
- 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(JX0601)NSP2基因主要抗原区域的原核表达与纯化被引量：2
- 2008年
- 本研究采用PCR方法从高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(JX0601)质粒扩增得到NSP2基因的主要抗原决定区域dNSP2,克隆目的基因连接到pGEM-TEasy,再将其亚克隆到pET-32a上,构建表达载体pET-dNSP2,然后转化大肠埃希菌BL-21(DE3),分别用不同浓度的IPTG诱导表达,经SDS-PAGE电泳分析,所表达融合蛋白的分子质量约为38.3ku,用HisBindPurificationKit试剂盒纯化蛋白,Westernblot结果表明重组蛋白可被PRRSV阳性血清所识别。本试验为进一步研究PRRSV诊断试剂盒奠定了基础。
- 李相钊张志王菲吴发兴路希山张燕霞李晓成单虎
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP2基因原核表达
- 我国五省区部分猪场高致病性猪蓝耳病毒感染情况检测与分析被引量：12
- 2009年
- 对2008年-2009年我国五省区发病猪场235份、屠宰场的218份样品进行了高致病性猪蓝耳病病毒(HP-PRRSV)RT-PCR检测,挑选具有代表性的HP-PRRSV阳性样品进行HP-PRRSV ORF5基因扩增、测序及分析。结果表明,这五个省区发病场蓝耳病的检出率平均74.6%。屠宰场的检出率平均44%,混合感染主要以二重感染为主,且发病场较屠宰场严重。对获得的13株HP-PRRSV ORF5进行测序分析,发现序列长度均为603 bp,未见缺失或插入,仅在9 aa^29 aa存在点突变;序列比较发现,与普通株标准序列VR-2332株核苷酸同源性达85.9%~87.2%;与高致病性毒株的同源性JXA1-06核苷酸同源性达96.0%~99.0%。而其推导氨基酸序列与普通型、高致病性毒株的同源性分别为87.1%~88.1%和97.5%~98.0%。从遗传进化以及变异情况看,获得的PRRSV ORF5序列均为与JXA1类似的高致病性PRRSV序列,与JXA1和HB-1同属美洲型中的一个亚群。
- 高许雷吴发兴朱紫祥李平张燕霞张志刘爽李晓成黄保续
- 关键词：高致病性猪蓝耳病病毒RT-PCR检测ORF5基因
- 我国部分省区HP-PRRSV分离株ORF5基因遗传变异分析被引量：1
- 2009年
- 参考GenBank发表的猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）JXA1的ORF5基因序列,设计并合成了一对引物,对分离自云南、浙江、山东、辽宁、黑龙江、天津、湖南等7省12株PRRSV分离株进行RT-PCR扩增,获得约773 bp的DNA片段,将其分别克隆至pGEM-T Easy载体中,并进行测序。应用DNAS-tar软件分析序列,并与VR-2332、CH-la、MLV、LV、BJ4、HB1、HuB2J、XA1等毒株ORF5序列进行比较,结果表明,分离株间的核苷酸同源性为91.9%～100%,氨基酸同源性为90.1%～100%;在美洲株遗传关系上又分为明显的2个群：12株分离株与HB1、HuB2J、XA1、CH-la亲缘关系比较近,处于一个亚群;VR-2332、MLV、BJ4处于另一个亚群。说明高致病PRRSV为我国PRRS主要流行病毒。
- 李平吴发兴朱紫祥高许雷张志刘爽张燕霞李晓成阿合买提
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因遗传进化树
- 2010年-2011年我国五省PRRSV分离株ORF5基因遗传变异分析被引量：3
- 2012年
- 为了解2010年-2011年间我国5省猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行毒株的分子生物学特性及变异规律,应用Mcar-145细胞分离得到15株PRRSV,通过RT-PCR方法对15株PRRSV的ORF5基因进行扩增和序列分析。依据NCBI所下载的标准序列设计一对引物,对ORF5全长进行扩增(603bp),分离株之间的核苷酸同源性为98.8%～99.9%,核苷酸推导的氨基酸同源性为95.5%～99.5%。15株PRRSV分离株与美洲型的PRRSV同源性较高,可推断均属美洲型。其中9株ORF5(151)氨基酸位点发生与HB-1相同的变异,即R151→K151,其余6株ORF5(151)氨基酸位点与JAX1相同,即ORF5(151)为R。系统进化树表明,BFLN3-2010、BFSD1-2011和BFAH2-2011 3株与CH-1a在同一分支,属于第2亚群,BFLN2-2010等12株与JAX1在同一分支,属于第4亚群。
- 刘沫飞李蕾郑辉李岚王赛赛吴发兴李晓成王洪斌黄保续
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因病毒分离
- 猪流行性腹泻病毒PCR检测及其M基因的遗传变异分析被引量：10
- 2013年
- 为了解我国猪流行性腹泻病毒(PEDV)的流行情况,利用套式反转录-聚合酶链反应(nRT-PCR)技术,从表现腹泻症状的仔猪粪便中扩增出6份阳性样品,测序表明,一扩PCR产物的大小为854bp,涵盖PEDV的M基因。选择34个参考毒株基于M基因进行进化树分析,结果显示PEDV可以分为G1和G2两个基因型7个基因亚型。G1型以2007年前的经典毒株为主,包括CV777、Br1/87、KPEDV-9、JMe2和CH/S株等;G2型则以近年分离的毒株为主,包括GDXS5、JS-2004-2、PFF188、KU06RB08等。其中G2.3亚型已经成为目前世界上主要的PEDV流行毒株,包括本次检测的6株PEDV、泰国的KU06RB08及GenBank中我国和韩国2011年的流行毒株。通过同源性比较发现,这6株PEDV之间的同源性为98.2%～100%,与经典毒株CV777的同源性为97.6%～98.2%。结果表明,尽管PEDV之间的同源性仍较高,但PEDV流行毒株已经逐渐形成独特的流行进化分支。
- 张志李岚董雅琴王赛赛刘爽吴发兴李晓成
- 关键词：猪流行性腹泻病毒M基因进化分析
