国家科技重大专项(2001BA804A22)
- 作品数：13 被引量：101H指数：6
- 相关作者：韩金祥王健伟易建平黄海燕徐自忠更多>>
- 相关机构：上海出入境检验检疫局山东省医药生物技术研究中心云南出入境检验检疫局更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家自然科学基金云南省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 检测A组轮状病毒的微阵列技术初探
- 2005年
- 采用荧光染料TAMRA标记上游引物 ,经RT semi nestedPCR扩增A组轮状病毒的保守区域 ,并将扩增产物与自行研制的玻片微阵列进行杂交。经杂交信号扫描分析 ,可简便快速地检出A组轮状病毒 ,并能达到高灵敏性 ,为下步进入临床打下了基础。
- 黄海燕韩金祥王健伟高雪芹潘继红刘毅朱波
- 关键词：A组轮状病毒微阵列技术荧光染料扩增产物PCR扩增
- 高羊茅和多年生黑麦草内生真菌的分子检测
- 根据GenBank上报道的内生真菌Neotyphodium coenophialum和N．lolii的Nc25基因序列,设计了2对特异性引物FM1／R1和F3／R652,建立了一套适合于从高羊茅和多年生黑麦草种子中检测内...
- 梁玮莎易建平周而勋
- 关键词：高羊茅多年生黑麦草内生真菌分子检测
- 文献传递
- 轮状病毒微量核酸检测技术研究进展被引量：1
- 2005年
- 同经典的免疫学检测方法相比,现代分子生物学技术用于检测轮状病毒具有更高的灵敏性,特异性和样品检测的广泛性。本文主要介绍了聚丙烯酰胺凝胶电泳法,RT-PCR相关的扩增技术和核酸杂交技术,限制性片段长度多态性分析(RFLP),着重讨论了新兴的实时荧光定量PCR,基因芯片技术,核酸序列依赖性扩增(NASBA)技术等。并对各种方法的灵敏性,特异性等进行了比较。
- 黄海燕韩金祥王健伟
- 关键词：轮状病毒核酸
- 高羊茅和多年生黑麦草内生真菌的分子检测被引量：8
- 2006年
- 根据GenBank上报道的内生真菌Neotyphodium coenophialum和N.lolii的Nc25基因序列,设计了2对特异性引物FM1/R1和F3/R652,建立了一套适合于从高羊茅和多年生黑麦草种子中检测内生真菌N.coenophialum和N.lolii的常规PCR和巢式PCR方法。
- 梁玮莎易建平周而勋
- 关键词：高羊茅多年生黑麦草内生真菌分子检测
- 膜芯片检测人B组、C组轮状病毒的初步研究被引量：2
- 2005年
- 目的建立检测人B组、C组轮状病毒(RV)的膜芯片。方法采用化学合成法合成B组、C组RV高度保守的核酸扩增区域,以地高辛标记上游引物,经半巢式PCR扩增B组、C组RV的保守检测区域,采用本实验室自行研制的膜芯片进行杂交检测。结果B组、C组RV的扩增产物同膜芯片上特异探针呈高度特异杂交。结论自制的膜芯片检测技术能够实现B组、C组RV的检测,并具有特异性好、高通量、平行性和简便快速的特点。
- 黄海燕韩金祥王健伟朱波彭丽
- 关键词：轮状病毒芯片杂交
- PRRSV抗GP5和抗M蛋白抗抗体的制备及免疫作用的研究被引量：3
- 2006年
- 制备猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗抗体(Ab2),探讨Ab2在不同的动物体内诱导机体产生免疫作用的研究。用已纯化的抗PRRSV-GP5(GP5-Ab1)单抗和抗PRRSV-M(M-Ab1)单抗免疫哈尔滨大白兔,当免疫血清琼扩效价达1∶16时,则加强免疫1次心脏采血分离血清,分别纯化兔抗抗PRRSV-GP5 IgG(GP5-Ab2)和抗抗PRRSV-M IgG(M-Ab2)血清。用GP5-Ab2、M-Ab2以及GP5-Ab2与M-Ab2混合型3种分别免疫昆明小鼠和未免PRRS疫苗的小猪,同时设PRRS弱毒苗、灭活苗和空白组作对照。免疫后第21 d分别采集小鼠血清和猪血清,用PRRSV作抗原包被,间接ELISA检测免疫Ab2和PRRS疫苗的小鼠血清和猪血清全为阳性,空白组仍然为阴性。说明制备的Ab2在不同动物体内均能引起机体产生免疫反应,从而为猪繁殖与呼吸综合征病新型疫苗的研究提供了新的思路。
- 管远红张璟晶陈珍谢宝东周作红
- 关键词：PRRSVPRRS免疫
- 应用实时荧光定量TaqManRT-PCR检测口蹄疫病毒被引量：23
- 2005年
- 按照口蹄疫病毒 (FMDV )聚合酶 3D基因序列 ,设计合成了引物和探针 ,经各反应条件的优化 ,建立了实时荧光定量 RT- PCR技术 ,对细胞培养物、水泡液、水泡皮及分泌物、血液中的 FMDV进行了特异性检测和敏感性试验。结果 ,用 30 0 nmol/ L 的引物浓度和 2 0 0 nmol/ L 探针浓度 ,获得的 CT值较小 ,而 ΔRn最大 ;可检测到相当于 0 .1 TCID50 的病毒 RNA;与 VSV和其他水泡性病毒不发生交叉反应 ;制作的标准曲线中各浓度范围内有极好的线性关系 ,且线性范围宽 ,相关系数为 0 .984 ;组内和组间试验重复性的变异系数 (CV)分别为 5 .4 %和 6 .7% ;与常规 RT- PCR相比较 ,该方法具有快速、特异、敏感、可定量 。
- 花群义金宁一周晓黎董俊杨云庆徐自忠
- 关键词：口蹄疫病毒荧光定量RT-PCR口蹄疫
- 新城疫病毒通用型实时RT-PCR检测方法的建立与应用被引量：9
- 2005年
- 采用Taq Man方法,经引物和探针的设计、筛选及反应条件优化,研究了检测活禽和禽产品中新城疫病毒的通用型实时RT-PCR(RRT-PCR)方法.结果显示,对12株分别为速发型、中发型、缓发型和疫苗株新城疫病毒的尿囊液倍比稀释液的检测极限在10-5～10-7之间;建立的方法与常见禽类病毒无交叉反应,特异性良好;在检测人工感染肉鸡的脏器组织、咽喉、泄殖腔拭子中病毒的灵敏度同鸡胚分离试验基本一致;弱毒疫苗免疫鸡群在免疫后14 d,应用本方法不能从咽喉、泄殖腔拭子中检测到病毒;临床样品检测表明,该方法不仅可以检出中强毒力新城疫毒株,也可检出缓发型野毒株和疫苗毒株.
- 张鹤晓高志强赖平安张利峰谷强杨伟刘继红郭晋优段生涛张向东
- 关键词：新城疫病毒
- 水泡性口炎病毒核蛋白基因的表达及初步应用被引量：10
- 2004年
- 将水泡性口炎病毒编码群特异性抗原的N基因片段克隆至pMD18 T克隆载体质粒中 ,构建N基因克隆重组质粒 ,进行核苷酸序列分析。然后亚克隆插入pBAD ThioTOPO表达载体 ,经PCR限制性内切酶分析、测序鉴定 ,筛选获得N基因正向插入、有正确读码框的阳性克隆 ,成功构建了水泡性口炎病毒N基因重组表达载体。经L Arabinose诱导表达 ,可稳定、高效地表达N蛋白抗原。SDS PAGE、Westernblotting及间接ELISA试验结果表明 ,表达蛋白为融合蛋白 ,质量约 6 3 5kD ,其表达产量约占菌体总蛋白的 16 % ,相当于 92mg L。融合蛋白中含有水泡性口炎病毒群特异性的核蛋白抗原 ,应用表达的VSV核蛋白抗原建立了酶联免疫吸附试验 ,通过对 186份山羊、豚鼠实验动物人工感染VSV的血清样品和参考血清样品的检测 ,并与微量血清中和试验进行了比较 ,结果表明 :以表达的VSV核蛋白为包被抗原的酶联免疫吸附试验是一种特异性强、敏感性高、快速、简单、安全的检测方法 ,抗原制备成本低。
- 花群义金宁一徐自忠杨云庆董俊杨晶焰周晓黎
- 关键词：水泡性口炎病毒核蛋白基因克隆
- 水疱性口炎病毒糖蛋白基因主要抗原表位区在大肠埃希氏菌中的高效表达及纯化
- 2005年
- 利用PCR技术扩增编码水疱性口炎病毒印第安纳型(VSV-Ind)糖蛋白基因的主要抗原表位区,通过引入其两端的EcoRⅠ和XhoⅠ酶切位点,定向插入到pET30c质粒T7启动子下游的多克隆区,构建重组质粒pET30c-vsvG,并转化至宿主菌BL21(DE3)株中。用1 mmol/L IPTG诱导后,SDS-PAGE电泳表明,重组蛋白在大肠埃希氏菌中得到了高效表达,经过4 h表达即可达到高峰;融合蛋白的相对分子质量为57 ku。重组蛋白含有六聚组氨酸尾,主要以包涵体形式存在,Ni柱纯化后的蛋白经Western-blotting鉴定,具有良好的抗原性和特异性。
- 祁会彩龚振华杨增岐李葳刘俊辉潘康锁王若聪蒋正军郑增忍
- 关键词：水疱性口炎病毒糖蛋白抗原表位
