国家自然科学基金(30973245) 作品数:21 被引量:30 H指数:3 相关作者: 黄一飞 王大江 郭惠玲 杜改萍 王丽强 更多>> 相关机构: 中国人民解放军总医院 军事医学科学院 解放军第306医院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 中国博士后科学基金 国家重点基础研究发展计划 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
小鼠Foxp3基因慢病毒载体构建及其在DC2.4细胞的表达 被引量:3 2011年 目的:构建小鼠Foxp3基因的慢病毒载体,体外感染树突状细胞DC2.4,制备Foxp3+DC细胞,为进一步研究其免疫调节作用奠定基础。方法:将小鼠Foxp3基因克隆到慢病毒pGC-FU载体,通过PCR和测序鉴定获得连接正确的克隆。将鉴定后的重组表达质粒pGC-FU-Foxp3与pHelper1.0质粒和pHelper2.0质粒共转染293T细胞,制备携带Foxp3基因的慢病毒Lentivirus-Foxp3。Lentivirus-Foxp3感染体外培养的DC细胞,流式细胞术(FCM)检测感染后的DC细胞Foxp3表达。结果:构建的慢病毒载体pGC-FU-Foxp3经PCR鉴定和测序正确,包装慢病毒Lentivirus-Foxp3滴度为2×108TU/mL。慢病毒Lentivirus-Foxp3感染DC2.4细胞后Foxp3表达明显增加。结论:成功构建了小鼠Foxp3基因的慢病毒表达载体,慢病毒Lentivirus-Foxp3能有效感染DC细胞。 宫玉波 黄一飞 黎燕 韩根成 刘勇 王大江 杜改萍 余继锋关键词:FOXP3 慢病毒 DC2.4 白内障手术前后不同角膜直径下角膜四阶球差的分析 2011年 目的了解年龄相关性白内障患者手术前后角膜四阶球差(Z40)的分布和变化情况。方法应用Pentacam眼前节分析仪对30例(42眼)年龄相关性白内障患者进行检查,并分析术前及术后3个月时直径分别为6mm、5.5mm、5mm下角膜四阶球差。结果 6mm测量直径下术前、术后角膜四阶球差分别为(0.311±0.147)μm和(0.274±0.145)μm(P=0.254,t=1.147);5.5mm测量直径下术前、术后分别为(0.230±0.109)μm和(0.204±0.116)μm(P=0.302,t=1.039);5mm测量直径下术前、术后分别为(0.157±0.089)μm和(0.141±0.094)μm(P=0.428,t'=0.797)。术前6mm、5.5mm、5mm测量直径下各组间比较有统计学差异,术后6mm、5.5mm、5mm各组间比较有统计学差异。结论角膜四阶球差在白内障患者中存在较大个体差异。术后角膜球差较术前有减小趋势,但差异无统计学意义。角膜球差随瞳孔或入射光线光学直径的减小而减小。 贾烈曦 黄一飞 李朝辉 李芃关键词:非球面人工晶体 白内障 J2对同种异体穿透性角膜移植模型大鼠CD4^+和CD8^+T细胞免疫功能的抑制 被引量:1 2016年 背景:J2即是以CD4分子与MHCⅡ类分子复合结合物功能域(CD4-D1/MHCⅡβ)为靶点,在数十万种有机化合物化学数据库中进行计算机筛选获得的小分子化合物。在先期的研究中,作者分别采用口服和腹腔注射等全身用药的方式将J2用于小鼠皮肤移植及角膜移植模型,结果证明J2能够延长移植片的生存时间,抑制排斥反应的发生。为了能更好的发挥药物的靶向作用,并减少全身毒副反应,进一步将J2用于局部治疗角膜移植排斥反应。目的:观察新型免疫抑制剂J2对同种异体穿透性角膜移植大鼠模型CD4^+和CD8^+T细胞免疫功能的抑制作用。方法:以成年雌性Wistar大鼠作为供体,SD大鼠作为受体,建立同种异体穿透性角膜移植模型。A组为正常SD大鼠结膜下空白溶剂0.05 m L注射组。手术大鼠随机分成3组:B组为SD大鼠自体角膜移植结膜下空白溶剂0.05 m L注射组;C组为同种异体角膜移植结膜下空白溶剂0.05 m L注射组;D组为同种异体角膜移植结膜下1%J2-纳米混悬液(NS)0.05 m L注射组。各组动物分别于移植后3 d、1周、2周、3周,使用流式细胞仪检测外周血中T细胞亚群分布情况并进行比较。结果与结论:B组各时间点外周血中淋巴细胞总CD3^+、CD4^+、CD8^+以及CD4^+/CD8^+差异无显著性意义;C组移植后3 d和1周总CD3^+、CD4^+、CD8^+差异无显著性意义,1周和2周总CD3^+、CD4^+、CD8^+数目增多,差异有显著性意义(P<0.05);D组中,1周和2周时CD4^+和CD8^+无显著增生。同一时间点横向比较:3 d、1周、2周时D组总CD3^+明显少于C组,差异有显著性意义(P<0.05),而在第3周时D组与C组差异无显著性意义;CD4^+在移植后3 d和1周时D组较C组数目少,但差异无显著性意义。CD4^+/CD8^+比值,在3 d、1周、3周时D组与C组比较差异均无显著性意义。提示J2通过抑制T淋巴细胞增生,抑制T细胞介导的角膜移植排斥反应。 郭惠玲 杜改萍 王丽强 宫玉波 闫洪欣 黄一飞关键词:角膜移植 移植物排斥 移植动物模型 新型免疫抑制剂J2对角膜移植小鼠淋巴细胞中白细胞介素10及干扰素γ分泌的影响 被引量:2 2011年 背景:小分子化合物J2是以CD4为靶点的新型免疫抑制剂,课题组以往的实验已经验证了J2对正常小鼠及角膜移植后小鼠脾细胞的影响。目的:探讨小分子化合物J2对异基因角膜小鼠的淋巴细胞中白细胞介素10及干扰素γ分泌的影响。方法:BalB/c(H2d)小鼠随机数字表法分为4个组,安慰剂组、环孢素A组和J2组接受C57BL/6-BALB/c同种异体角膜移植后给予相应药物干预,空白对照组不接受角膜移植,观察各组角膜移植片存活时间。取各组大鼠脾细胞给予刀豆蛋白Ⅵ型刺激细胞增生,采用ELISA法测定细胞上清中白细胞介素10及干扰素γ水平,比较各组细胞增生指数及细胞因子含量。结果与结论:J2可能通过抑制CD4+T淋巴细胞而抑制角膜排斥反应的发生,延长角膜植片存活时间;J2能够明显抑制ConA刺激角膜移植后小鼠脾细胞的增生及Th1细胞因子的产生。这些效应与环孢素A的效果相似。 王大江 郭惠玲 黄一飞 陈国江 张晗 黎燕关键词:角膜移植 免疫抑制剂 免疫排斥 小鼠 白细胞介素10 干扰素Γ 原子力显微镜观测小分子化合物J2对原代培养的大鼠角膜上皮细胞膜表面超微结构的影响 2021年 目的探讨小分子化合物J2对体外培养的大鼠角膜上皮细胞膜表面超微结构的影响。方法实验研究。取SD大鼠原代培养的角膜上皮细胞进行研究。采用密度梯度离心分离法获取大鼠单个核细胞(MNC),将MNC加入角膜上皮细胞共培养,再用小分子化合物J2处理作为实验组,未进行小分子化合物J2处理的MNC及角膜上皮细胞作为对照组,空白对照组仅为角膜上皮细胞。应用流式细胞术检测角膜上皮细胞CD80的表达。采用原子力显微镜(AFM)观测角膜上皮细胞膜表面形态学参数,包括平均粗糙度(Ra)、均方根粗糙度(Rq)、平均低谷高度(Rvm)及波峰至波谷的粗糙度(Rt)。多个样本均数间的总体比较采用单因素方差分析,组间的多重比较采用LSD-t检验。结果实验组、对照组及空白对照组角膜上皮细胞CD80的表达量分别为1.944±0.237、3.128±0.175及1.082±0.120,组间比较差异有统计学意义(F=156.31,P<0.01)。AFM观测角膜上皮细胞膜表面超微结构:实验组、对照组及空白对照组Ra值分别为86.75±12.60、120.23±12.11、61.94±10.62,组间差异有统计学意义(F=306.92,P<0.01);3个组Rq值分别为102.53±9.45、138.30±10.13、91.96±7.25,组间差异有统计学意义(F=361.85,P<0.01);3个组Rvm值分别为-42.21±14.22、-67.36±10.89、-32.18±19.01,组间差异有统计学意义(F=72.22,P<0.01);3个组Rt值分别为437.32±15.66、495.32±13.96、339.92±11.22,组间差异有统计学意义(F=1634.26,P<0.01);3个组两两比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论经MNC活化的SD大鼠角膜上皮细胞呈CD80高表达,在小分子化合物J2作用后CD80表达减少;应用AFM可以观测到SD大鼠角膜上皮细胞膜表面超微结构经MNC活化后更加粗糙,颗粒状突起明显增加,在小分子化合物J2作用后超微结构的改变有所减轻。 宋静 黄一飞 黄一飞 郭惠玲关键词:角膜 上皮细胞 移植物排斥 苦味酸-天狼猩红染色法检测PHEMA人工角膜植入碱烧伤兔角膜中胶原的动态变化 被引量:1 2015年 目的观察新型软性一体式PHEMA人工角膜对碱烧伤兔角膜孔隙内新生组织中胶原成分及分布的影响。方法制备兔角膜碱烧伤模型后,植入软性一体式PHEMA人工角膜材料。分别于术后2、8、16、22周取裙边组织进行苦味酸-天狼猩红染色,偏振光下进行观察。结果这种PHEMA材料中允许角膜及周围组织迁入并生长,多部位形成纤维连接。染色后偏振光下提示孔隙内新生组织主要为Ⅰ型胶原,其生长过程表现为黄绿色的Ⅲ型胶原慢慢变成成熟的、红色的Ⅰ型胶原,并且角膜缘处细胞活跃。结论 PHEMA材料孔隙的胶原和角膜组织的胶原变化与植入正常兔角膜的愈合结果一致。 白华 郭惠玲 王丽强 黄一飞关键词:人工角膜 碱烧伤 地塞米松对小鼠DC2.4细胞表型及功能的影响 被引量:1 2010年 目的研究地塞米松(dexamethasone,Dex)对DC2.4细胞表型及功能的影响。方法取生长状态良好的DC2.4细胞,随机分为4组,A组为对照组;B、C、D组分别为50、100、200μg/L地塞米松组,每组DC2.4细胞培养6d。用流式细胞术测定DC表面CD80,CD86,Galectin-9及PD-L1的表达,ELISA方法检测其培养上清IL-12的浓度,用混合淋巴细胞培养法检测其对同种异体T细胞的刺激能力。结果与对照组相比,经不同剂量地塞米松修饰的DC2.4细胞其表面CD80,CD86,Galectin-9及PD-L1的表达无明显改变,但地塞米松用药组显著减少IL-12的分泌及抑制刺激同种异体T细胞增殖的能力。结论 DC2.4细胞是一细胞表型稳定的细胞系;地塞米松没有明显改变其细胞表型,但抑制其细胞因子的分泌,降低其刺激同种异体反应T细胞增殖的能力。 宫玉波 黄一飞 黎燕 韩根成 李育蓉 王大江 杜改萍 余继锋 宋静关键词:DC2.4 地塞米松 免疫耐受 Boston Ⅰ型人工角膜植入术临床效果及术后并发症分析 被引量:7 2015年 目的 评价复杂性角膜混昆浊患者行Boston Ⅰ型人工角膜植入术的临床效果和并发症.方法 回顾性系列病例研究.收集2009年5月至2013年10月在解放军总医院眼科接受Boston Ⅰ型人工角膜植入术的患者57例(61只眼).其中化学伤19例,热烧伤17例,爆炸伤6例,角膜炎8例,自身免疫2例,角膜内皮失代偿9例.人工角膜植入术按照美国麻省眼耳鼻喉医院标准化手术方式,并常规行晶状体切除.术后至少随访观察2个月,平均随访时间(19±9)个月(2~ 27个月),并记录其视力及并发症情况.结果 术前患者视力均为光感、手动或指数,术后47只眼(77.0%)视力在0.1或以上,其中18只眼(29.5%)术后最好矫正视力高于0.3.术后出现载体角膜溶解10只眼(16.4%),人工角膜后膜6只眼(9.8%),青光眼12只眼(19.7%),视网膜脱离2只眼(3.3%),脉络膜脱离1只眼(1.6%),眼内炎2只眼(3.3%).并发症采取对症处理,除青光眼患者及2例眼内炎患者,所有患者视力可以维持原最好矫正视力.结论 Boston Ⅰ型人工角膜适用于穿透性角膜移植难于成功的患者,特别适合用于多次角膜移植失败患者,对于角膜严重血管化患者是有效的复明手段.术后长期密切随访以及正确处理相关并发症是保证长期维持较好效果的必要保证. 王丽强 白华 黄一飞关键词:角膜 人工器官 假体植入 角膜疾病 眼烧伤 Foxp3,IDO在小鼠角膜移植免疫排斥反应的表达 被引量:1 2018年 背景:移植免疫反应是导致角膜移植术后失败的主要原因,但其具体发病机制不明确。有研究报道,Foxp3和吲哚胺2,3-二氧化酶(indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO)与移植免疫有关。目的:研究Foxp3,IDO在小鼠角膜移植免疫排斥反应中的作用。方法:以C57BL/6小鼠为供体,BALB/c小鼠为受体建立角膜移植实验模型。将30只BALB/c小鼠随机分为3组,正常组6只;角膜移植组12只;地塞米松治疗组12只。角膜移植组:给予生理盐水;地塞米松治疗组:给予地塞米松注射液10 mg/kg,分别于角膜移植术后0,2,4,6,8,10 d经腹腔注射给药。用裂隙灯观察移植排斥情况,免疫组织化学检测植片γ-干扰素表达,Real-time PCR检测植片内Foxp3 mRNA,IDO mRNA的表达。结果与结论:(1)地塞米松治疗组发生排斥反应时间(20.667±1.033)d,较角膜移植组(14.833±1.472)d明显延迟(P<0.05);(2)角膜移植组术后第14天角膜植片内γ-干扰素及Foxp3 mRNA,IDO mRNA的表达较地塞米松治疗组明显增强(P<0.05);(3)结果提示,γ-干扰素及Foxp3,IDO在角膜移植免疫排斥反应过程中发挥重要的作用,降低角膜植片γ-干扰素及Foxp3,IDO表达可能有助于诱导耐受。 宫玉波 刘勇 赵宏伟 许倩倩 郭惠玲关键词:干扰素Γ 移植物排斥 FOXP3 IDO 原子力显微镜观测小分子化合物J2对大鼠角膜移植术后内皮细胞膜表面的影响 被引量:1 2011年 目的探讨应用原子力显微镜(AFM)观察大鼠角膜移植术后的内皮细胞,观测小分子J2化合物对角膜内皮细胞超微结构的影响。方法队列研究方法。将30只取右眼行穿透性角膜移植术后的实验大鼠编号后计算机随机抽号分为2组,每组15只。A组为J2药实验组,B组为安慰剂对照组。每组于术后第5、10、15、20、25天,分别计算机选号随机取下3只大鼠的角膜植片,经苏木素-伊红染色及AFM样品固定。两组AFM观测数据平均粗糙度(Ra)、平均峰值高度(Rp)、平均低谷高度(Rv)采用单因素方差分析。结果A组植片平均存活时间为(33.12±6.80)d,B组为(18.87±4.19)d,两组比较差异有统计学意义(F=47.7449,P=0.000)。AFM观测发现两组样品在植片存活第5天均显示为较规则的六边形结构,直径约15μm,可见细胞表面的凹凸不平结构。随着时间延长,两组样品出现不同改变,术后第20天:B组样品的细胞结构无法辨认,凹凸不平的表面分辨困难,而A组的细胞仍然保持结构清晰。Ra、Rp和Rv在同期比较中,两组结果存在差异有统计学意义。术后第5天,A组:Ra(97.64±31.58)rim,Rp(297.79±25.19)nm,Rv(545.55±25.83)nm;B组:Ra(112.61±34.29)nm,Rp(265.06±24.17)nm,Rv(544.41±21.78)nm(Fa=30.9416,P=0.0000;Fp=263.6018,P=0.0000;Pv=1.2013,P=0.2735)。术后第10天,A组:Ra(102.98±32.98)nm,Rp(711.38±21.94)nm,Rv(639.89±22.58)Ilm;B组:Ra(222.85±31.28)nm,Rp(111.22±20.35)nm,Rv(746.49±23.17)nm(Fa=2086.4535,P=0.0000;Fp=53768.4676,P=0.0000;Pv=3257.3178,P=0.0000)。术后第15天,A组:Ra(87.44±34.97)nm,Rp(344.18±21.09)nm,Rv(482.61±22.27)nm;B组:Ra(197.64±35.72)am,Rp(510.76±24.98)nm,Rv(545.62±23.17)nm(Fa=1458� 宋静 郭惠玲 王大江 余继锋 杜改萍 王晓奎 黄一飞关键词:显微镜检查 角膜移植 移植物排斥 免疫抑制剂