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国家自然科学基金(30973234)
作品数:
2
被引量:3
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曹励之
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儿童急性髓细胞性白血病WAVE1基因对耐药相关基因表达影响的研究
被引量:2
2010年
目的探讨儿童急性髓细胞性白血病(AML)中WASP家族Verprolin同源蛋白1(WAVEl)基因参与P糖蛋白(P—gP)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)、肺耐药相关蛋白(LRP)、乳腺癌耐药蛋白(BCRP)表达和调控的机制。方法将52例患儿依据是否在随访期内持续缓解(CCR)分为难治/复发组和缓解组,应用实时定量PCR(RQ-PCR)法和蛋白印迹(Western blot)分别检测52例AML患儿治疗前及疾病发展过程中骨髓单个核细胞(BMMCs)中WAVE1、P—gP、MRP1、LRP及BCRP蛋白和基因mRNA的表达水平。将PCDNA3.1-WAVEl真核表达质粒转染HL60细胞构建WAVEl高表达HL-60细胞,将WAVEl基因的特异性小片段干扰RNA(WAVEl siRNA)转染HL60/ADR构建WAVE1低表达HL60/ADR细胞;Western blot和RQ—PCR法检测基因转染前后白血病细胞系grAVE1、MRP1及BCRP蛋白及基因的表达水平。结果①复发/难治组病例的WAVE1及耐药相关基因水平明显高于缓解组患儿WAVE1基因表达水平(P〈0.05);②同一患儿初治及复发时的WAVE1基因水平明显高于缓解期表达水平(P〈0.05);③与HL60细胞相比较,HL60/ADR细胞WAVE1mRNA及蛋白表达水平增加3.53倍及95%;④转染WAVE1后HL60细胞系MRP1 mRNA和蛋白表达水平分别增加16.54倍、129%,BCRPmRNA和蛋白表达水平分别增加4.93倍及96%,而转染WAVE1 siRNA的HL60/ADR细胞MRP1 mRNA和蛋白的表达水平为干扰前的0.11倍及43%,BCRPmRNA和蛋白的表达水平为转染前的0.14倍及71%。结论WAVE1与儿童AML的病程及预后相关,参与了髓系白血病细胞多药耐药的形成并可影响MRP及BCRP1等多个重要的耐药相关基因的表达和作用。
杨明华
赵明一
贺钰磊
汪敏慧
王卓
谢岷
吴秀山
曹励之
上调PTEN基因表达对白血病耐药细胞系K562/ADM细胞化疗增敏作用的实验研究
被引量:1
2012年
目的探讨上调PTEN表达对白血病耐药细胞化疗增敏的作用及其机制。方法将PTEN真核表达质粒导入耐阿霉素(ADM)的K562细胞(K562/ADM细胞)中,采用Westernblot和RT-PCR方法检测PTEN基因在转染前后细胞的表达,MTF法检测ADM对转染前后K562/ADM细胞存活率的影响,应用流式细胞术检测细胞凋亡百分率,采用重组人半胱天冬酶-3(caspase-3)活性定量试剂盒分析caspase-3的活性,Westernblot检测自噬微管相关蛋白轻链3(LC3)-Ⅰ/Ⅱ、自噬相关蛋白Bec-linl、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)和磷酸化40S核糖体蛋白6s激酶(p-p70S6K)的表达,单丹磺酰戊二胺(MDC)染色和透视电镜观察自噬泡的情况。结果①与未经处理和转染空载体的K562/ADM细胞相比,转染PTEN基因的K562/ADM细胞组PTENmRNA和蛋白表达水平均增高;②转染PTEN基因使K562/ADM细胞对ADM的敏感性增强,与转染空载体细胞比较,其细胞存活率从(94.07±2.60)%降低到(53.83±4.20)%,细胞凋亡率从(11.89±1.70)%增加到(43.69±2.30)%;经caspase-3抑制剂(Z-DEVE-FMK)预处理后,未能完全阻止ADM对细胞的毒性作用;③ADM处理细胞12和24h后,转染PTEN基因的K562/ADM细胞casepase-3活性(2.27±0.13和3.15±0.08)均明显高于转染空载体组(1.19±0.14和1.48±0.06)(P值均〈0.05);④与转染空载体组比较,转染PTEN基因的K562/ADM细胞LC3-Ⅱ和Beclinl的蛋白表达水平分别增加83%和18%,p-Akt和p-p70S6K的蛋白表达水平分别降低96%和87%;⑤增加PTEN的表达,细胞内自噬泡较转染空载体组明显增多。结论上调PTEN基因表达能明显增加K562/ADM细胞对ADM的敏感性,该作用可能与上调PTEN基因表达、抑制P13K/Ak∥mTOR通路活性从而促进细胞凋亡和自噬的发生有关。
张弘
杨良春
曹励之
杨明华
谢岷
朱珊
曾佩
俞燕
关键词:
基因
PTEN
K562/ADM细胞
基因转染
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