国家杰出青年科学基金(30700807) 作品数:11 被引量:7 H指数:2 相关作者: 曲秀娟 张凌云 刘云鹏 侯科佐 滕月娥 更多>> 相关机构: 中国医科大学附属第一医院 更多>> 发文基金: 国家杰出青年科学基金 辽宁省教育厅高校重点实验室项目 辽宁省教育厅科技项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
Cbl-b shRNA稳定转染乳腺癌MDA-MB-231细胞系的构建 2011年 目的构建靶向Cbl-b基因的短发夹环RNA(shRNA)真核质粒表达载体,建立Cbl-b shRNA稳定转染人乳腺癌MDA-MB-231细胞系,为探讨Cbl-b的生物学功能奠定基础。方法设计Cbl-b shRNA序列BLAST进行同源性分析。化学合成法合成shRNA序列,将配对的单链合成双链,以T4连接酶连接于pSilencerTM 4.1-CMV表达载体,加入感受态细胞。将菌液涂布于含有氨苄青霉素的LB平板,筛选阳性菌落,测序确认后进行大量复制、扩增,提取重组质粒。脂质体法将上述质粒转染至MDA-MB-231细胞中,G418持续压力选择和有限稀释法获得稳定转染的细胞系。结果 DNA测序证实靶向Cbl-b基因的shRNA真核质粒表达载体构建正确,G418压力筛选出阳性克隆,Western blot检测发现MDA-MB-231/Cbl-b shRNA转染细胞株中Cbl-b蛋白表达水平明显下调。结论成功构建了基因沉默Cbl-b的MDA-MB-231细胞株,为进一步探讨其生物学功能奠定实验基础。 张凌云 石晶 滕月娥 张晔 曲秀娟 刘云鹏关键词:CBL-B 短发夹环RNA MDA-MB-231 转染 c-Src在RANKL诱导的乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移中的作用 被引量:1 2011年 目的探讨非受体酪氨酸激酶c-Src在核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)诱导的乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移中的作用。方法流式细胞仪检测MDA-MB-231细胞表面受体核因子-κB受体活化因子(RANK)蛋白的表达及RANKL刺激后细胞p-Src及c-Src的表达;Transwell法测定细胞迁移能力。结果 MDA-MB-231细胞表达RANK蛋白,RANKL诱导MDA-MB-231细胞迁移能力增强。应用RANKL的圈套受体OPG可阻断RANKL诱导的细胞迁移。RANKL刺激后MDA-MB-231细胞p-Src表达升高,应用Src激酶抑制剂PP2可显著抑制RANKL诱导的细胞迁移。结论 c-Src信号通路参与RANKL诱导的乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移。 张凌云 曲秀娟 刘云鹏 侯科佐关键词:C-SRC 核因子-ΚB受体活化因子配体 乳腺肿瘤 迁移 PI3K/AKT信号通路在RANKL诱导的SGC-7901胃癌细胞迁移中的作用 被引量:3 2012年 目的文献报道RANKL/RANK/OPG途径与肿瘤细胞迁移及骨转移密切相关,但RANKL/RANK途径是否参与胃癌细胞迁移,尚无文献报道。本文拟检测RANK在胃癌细胞系SGC-7901细胞中的表达,并进一步探讨磷脂酰肌醇-3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶(PI3K/Akt)信号通路在RANKL诱导的胃癌细胞迁移中的作用。方法 West-ern blot检测SGC-7901细胞表面RANK蛋白的表达;RANKL刺激后磷酸化Akt(P-Akt)及Akt的表达;Transwell法测定RANKL及抑制剂刺激后细胞迁移能力的改变。结果 SGC7901细胞表达RANK蛋白。RANKL(1μg/mL)诱导SGC-7901细胞迁移能力增强,迁移增加率为57.2%±5.9%,RANKL抑制剂rOPG(5μg/mL)显著抑制RANKL诱导的细胞迁移(13.88%±3.57%,P<0.05)。RANKL刺激后30 min~3 h,SGC-7901细胞p-Akt表达升高,应用PI3K的抑制剂LY294002(50 mmol/L)显著抑制RANKL诱导的胃癌细胞SGC-7901的迁移(57.28%±5.91%vs23.18%±2.79%,P<0.05)。结论胃癌细胞系SGC-7901细胞表达受体RANK,PI3K/Akt信号通路参与RANKL诱导的SGC-7901细胞迁移。 张凌云 曲秀娟 刘云鹏 侯科佐关键词:AKT RANKL 胃肿瘤 迁移 MEK/ERK信号通路在RANKL诱导的乳腺癌MCF-7细胞迁移中的作用及机制探讨 2012年 目的探讨细胞外调节蛋白激酶(ERK)信号通路在核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)诱导的乳腺癌细胞MCF-7迁移中的作用。方法流式细胞术检测MCF-7细胞表面核因子-κB受体活化因子(RANK)蛋白的表达;Western blot检测RANKL刺激后磷酸化ERK(p-ERK)及ERK的表达;Transwell法测定RANKL刺激后细胞迁移能力的改变。结果 MCF-7细胞表面表达RANK蛋白,RANKL(2μg/mL)显著诱导MCF-7细胞迁移能力增强。RANKL刺激后MCF-7细胞p-ERK表达逐渐升高,MEK抑制剂PD98059显著抑制RANKL诱导的MCF-7细胞迁移。结论 ERK信号通路参与RANKL诱导的乳腺癌细胞MCF-7迁移。 张凌云 曲秀娟 刘云鹏 侯科佐关键词:细胞外信号调节蛋白激酶 核因子-ΚB受体活化因子配体 细胞运动 RANKL诱导乳腺癌BT-474细胞迁移机制的探讨 2012年 目的:探讨细胞外调节蛋白激酶(ERK)信号通路在核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)诱导的乳腺癌细胞BT474迁移中的作用。方法:流式细胞术及蛋白质印迹法检测BT474细胞表面RANK蛋白的表达;蛋白质印迹法检测RANKL刺激后细胞磷酸化ERK(p-ERK)及ERK的表达;Transwell法测定RANKL刺激后BT-474细胞迁移能力的改变。结果:BT-474细胞表面表达RANK蛋白,RANKL诱导BT-474细胞迁移能力增强,应用RANKL的圈套受体OPG可阻断RANKL诱导的细胞迁移,迁移增加率分别为(73.67±7.57)%和(9.67±3.06)%,P=0.001 5。BT-474细胞的P-ERK水平在RANKL刺激30min后明显升高,应用MEK/ERK通路抑制剂PD98059可显著抑制RANKL诱导的细胞迁移。RANKL迁移增加率为(72.50±6.61)%,RANKL+PD98059迁移增加率为(15.00±2.16)%,P=0.000 1。结论:ERK1/2信号通路参与RANKL诱导的乳腺癌BT-474细胞迁移。 张凌云 曲秀娟 刘云鹏 侯科佐关键词:乳腺肿瘤 ERK1/2 RANKL 细胞迁移 c-Src参与RANKL诱导的乳腺癌BT-474细胞迁移的机制研究 2011年 目的:核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)/核因子κB受体活化因子(RANK)通路在肿瘤骨定向性迁移中发挥重要的作用,但具体信号传导机制尚不清楚。本文探讨非受体酪氨酸激酶c-Src在RANKL诱导的乳腺癌BT474细胞迁移中的作用。方法:Western blot检测BT-474细胞表面受体RANK蛋白的表达及RANKL刺激后细胞p-Src及c-Src的表达;Transwell法测定细胞迁移能力。采用SPSS 16.0统计学软件分析实验数据。结果:BT-474细胞表达RANK蛋白,RANKL诱导BT-474细胞迁移能力增强。应用RANKL的圈套受体OPG可阻断RANKL诱导的细胞迁移。RANKL刺激后BT-474细胞p-Src表达升高,应用c-Src激酶抑制剂PP2可显著抑制RANKL诱导的细胞迁移。结论:c-Src信号通路参与RANKL诱导的乳腺癌BT-474细胞迁移。 张凌云 曲秀娟 刘云鹏 侯科佐关键词:核因子ΚB受体活化因子配体 乳腺癌 迁移 磷脂酰肌醇-3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶信号通路参与核因子-κB受体活化因子配体诱导的MDA-MB-231乳腺癌细胞迁移 2012年 目的探讨磷脂酰肌醇-3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶(PI3K/Akt)信号通路在核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)诱导的乳腺癌细胞迁移中的作用。方法 Transwell法测定RANKL刺激后MDA-MB-231细胞迁移能力的改变。蛋白印迹法检测MDA-MB-231细胞表面RANK蛋白的表达及RANKL刺激后pAkt及Akt的表达;检测数据用x珚±s表示,采用SPSS 16.0软件进行t检验。结果 MDA-MB-231细胞表达RANK蛋白,RANKL诱导MDA-MB-231细胞迁移能力增强,RANKL的圈套受体骨保护素(OPG)可阻断RANKL诱导的细胞迁移(P<0.01)。RANKL刺激后MDA-MB-231细胞p-Akt表达升高,PI3K抑制剂LY294002抑制RANKL诱导的细胞迁移(P<0.01)。结论 PI3K/Akt信号通路参与RANKL诱导的乳腺癌细胞MDA-MB-231迁移。 张凌云 曲秀娟 滕月娥 刘云鹏 侯科佐关键词:乳腺肿瘤 细胞运动 核因子-ΚB受体活化因子配体 PI3K/Akt信号通路在RANKL诱导的MCF-7乳腺癌细胞迁移中的作用 被引量:1 2012年 目的:核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)能促进表达RANK的上皮癌细胞迁移至骨,与乳腺癌骨转移密切相关。本文探讨磷脂酰肌醇-3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶(phosphoinositide3-kinase/serine/threonine protein kinase PI3K/Akt)信号通路在RANKL诱导的乳腺癌MCF-7细胞迁移中的作用。方法:流式细胞仪检测MCF-7细胞表面RANK蛋白的表达;Transwell法测定RANKL刺激后MCF-7细胞迁移能力的改变;Western-blot检测MCF-7细胞RANKL刺激后p-Akt及Akt的表达。SPSS 16.0软件分析实验数据。结果:MCF-7细胞表达RANK蛋白,RANKL诱导MCF-7细胞迁移能力显著增强,RANKL的圈套受体OPG可阻断RANKL诱导的细胞迁移。RANKL刺激后MCF-7细胞p-Akt表达在1、5分钟时一过性升高,PI3K抑制剂LY294002显著抑制RANKL诱导的细胞迁移。结论:PI3K/Akt信号通路参与RANKL诱导的乳腺癌细胞系MCF-7迁移。 张凌云 曲秀娟 刘云鹏 侯科佐关键词:核因子-ΚB受体活化因子配体 乳腺癌 迁移 细胞外调节蛋白激酶参与RANKL诱导的SGC-7901胃癌细胞迁移 2011年 目的检测RANK在胃癌细胞系SGC-7901细胞中的表达,并进一步探讨细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)信号通路在RANKL诱导的胃癌细胞迁移中的作用。方法流式细胞术检测SGC-7901细胞表面RANK蛋白的表达;western-blot检测RANKL刺激后磷酸化ERK(p-ERK1/2)及ERK1/2的表达;Transwell法测定RANKL刺激后细胞迁移能力的改变。检测数据用x±s表示,采用SPSS16.0软件分析实验数据。结果 SGC-7901细胞表达RANK蛋白。RANKL诱导SGC-7901细胞迁移能力增强,RANK抑制剂rOPG抑制RANKL诱导的细胞迁移,RANKL刺激后,SGC-7901细胞p-ERK1/2表达升高,应用MEK/ERK的抑制剂PD98059显著抑制RANKL诱导的胃癌细胞SGC-7901迁移。结论胃癌细胞系SGC-7901细胞表达受体RANK,ERK1/2信号通路参与RANKL诱导的SGC-7901细胞迁移。 张凌云 曲秀娟 侯科佐 刘云鹏关键词:胃肿瘤 ERK1/2 RANKL 迁移 ERK信号通路参与RANKL诱导的乳腺癌细胞迁移 被引量:2 2010年 目的:探讨细胞外调节蛋白激酶(ERK)信号通路在RANKL诱导的乳腺癌细胞迁移中的作用。方法:流式细胞术检测MDA-MB-231细胞表面RANK蛋白的表达;western-blot检测RANKL刺激后磷酸化ERK(p-ERK)及ERK的表达;Transwell法测定RANKL刺激后细胞迁移能力的改变。结果:MDA-MB-231细胞表达RANK蛋白,RANKL诱导MDA-MB-231细胞迁移能力增强。RANKL刺激后MDA-MB-231细胞p-ERK表达升高,PD98059抑制RANKL诱导的细胞迁移。结论:ERK信号通路参与RANKL诱导的乳腺癌细胞迁移。 张凌云 刘静 刘云鹏 曲秀娟 侯科佐关键词:ERK RANKL 乳腺癌 迁移