国家教育部博士点基金(20070610124)
- 作品数：9 被引量：58H指数：5
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- 过氧化氢诱导的人正常和早老细胞中DNA损伤及其修复研究被引量：7
- 2011年
- 目的研究人早老细胞和正常衰老细胞在氧化应激条件下的DNA损伤和修复。方法采用免疫荧光技术和彗星电泳技术,分别检测3组不同群体倍增数(PD)的人正常二倍体成纤维细胞BJ(青年组第14代,成年组第30代,衰老组第45代)和2组不同PD的人赫-吉二氏综合征(HGPS)细胞(青年组第8代,衰老组第17代)的DNA基础损伤程度。研究过氧化氢诱导造成以上细胞组DNA损伤及去除致损因素正常培养后的修复水平,采用免疫荧光和彗星电泳技术检测细胞在沉默DNA损伤修复蛋白着色性干皮病蛋白A(XPA)表达前后的修复能力。结果 BJ细胞衰老组DNA损伤程度较高,与成年组相比,对DNA损伤诱导因子更加敏感(P<0.05);成年组与青年组相比,对损伤诱导因子也更敏感(P<0.05)。HGPS细胞青年组的DNA基础损伤程度即已达到衰老BJ细胞类似或更高水平,且与BJ细胞具有一致的DNA损伤年龄变化趋势。经siRNA沉默XPA表达后可部分恢复HGPS细胞的修复能力,对BJ细胞则没有影响。随年龄增长无论正常还是早老细胞,DNA损伤程度增加,修复效率降低。结论 XPA功能异常抑制了HGPS细胞的损伤修复。
- 所起凤杜文婷杨鸣鸣范雪娇刘戟
- 关键词：彗星电泳免疫荧光DNA损伤DNA修复
- 人21.5kDa MBP基因对肝癌HepG-2细胞增殖与凋亡作用研究
- 2009年
- 目的探讨人21.5kDa髓鞘碱性蛋白(MBP)对肝癌HepG-2细胞增殖与凋亡的影响。方法用含21.5kDa MBP基因的pSVCEP-MBP-CAT质粒转染肝癌细胞(HepG-2),设空质粒转染为对照组,用RT-PCR、Western blot杂交检测转染效果,后以H2O2处理上述细胞,通过MTT测定细胞增殖曲线,DNA琼脂糖电泳、免疫细胞化学分析、彗星电泳、TUNEL原位杂交等多种方法检测凋亡及相关蛋白的表达情况。结果人21.5kDa MBP基因在肝癌HepG-2细胞转染成功,MTT测定细胞增殖曲线显示阳性转染组细胞有增殖和抗凋亡的作用,DNA琼脂糖电泳显示对照组有大量的DAN ladder形成,Caspase-3免疫组化证实对照组细胞Caspase-3表达显著升高,彗星电泳和TUNEL原位杂交显示对照组DNA损伤及凋亡严重而转染组较轻。结论人21.5kDa MBP对肝癌HepG-2细胞有促进增殖和抗凋亡的作用。
- 潘虹任思冲何宣霖尉艳霞王若菡杨荫刘戟
- 关键词：髓鞘碱性蛋白凋亡HEPG-2转染彗星电泳
- Sirt1基因shRNA干扰载体构建及其对细胞增殖和凋亡的影响被引量：1
- 2011年
- 本实验目的在于构建Sirt1 shRNA干扰载体,探讨Sirt1对HepG2、A549和293T细胞增殖和凋亡的影响。设计并合成Sirt1的shRNA序列,重组到pGenesil-1.0质粒载体中筛选出pGenesil-1.0-Sirt1阳性克隆并测序。将构建好载体转染HepG2、A549和293T细胞,用RT-PCR、Western blot检测各细胞中Sirt1表达水平,MTT测细胞增殖活性,加入阿霉素处理三组细胞后,用MTT检测细胞凋亡情况。结果表明成功构建Sirt1 shRNA干扰载体,各细胞株中Sirt1表达水平明显下降,Sirt1 shRNA克隆细胞株增殖能力降低,阿霉素处理后,各细胞株抗凋亡能力明显减弱,Sirt1在维持细胞增殖及抗细胞DNA损伤凋亡方面发挥重要作用,为进一步研究提供理论依据。
- 杜文婷任思冲所起凤杨鸣鸣何丹刘戟
- 关键词：细胞增殖细胞凋亡
- DNA错配修复基因MSH2和MLH1单核苷酸多态性与食管癌发生风险相关性研究被引量：5
- 2012年
- 目的:探讨DNA错配修复基因MSH2和MLH1单核苷酸多态性对于食管癌易感性的潜在作用。方法:采用医院为基础的病例-对照研究方法,应用PCR-RFLP检测包括正常对照132例,食管癌患者169例MSH2c.2063T>G和MLH1IVS14-19A>G两个基因多态性位点的基因型。通过Logistic回归分析计算出比值比(OR)和95%置信区间(95%CI),估计不同基因型频率分布与食管癌发生风险的关系。结果:MSH2c.2063T>G携带突变等位基因个体发生食管癌的风险是非携带者的3.24倍。MLH1IVS14-19A>G突变等位基因携带者发生食管癌风险是非携带者的1.58倍。对MSH2和MLH1基因交互作用分析发现两突变基因型携带者发生食管癌风险大大增加并具有显著的统计学意义。结论:DNA错配修复基因MSH2c.2063G突变等位基因和MLH1IVS14-19G突变等位基因可能在促成食管癌发生过程起到一定作用。
- 何丹任鹏亮范雪娇杨晓龙李俊葓刘琳刘戟
- 关键词：食管癌单核苷酸多态性
- 洋葱中黄酮类提取物对血脑屏障透过及神经保护作用研究被引量：9
- 2011年
- 目的研究采用乙醇回流法从洋葱中提取的黄酮类物质对血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)透过作用以及对原代培养的鼠神经元细胞增殖和凋亡的影响。方法首先原代培养成功SD鼠脑微血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cells,BMVECs);然后原代共培养鼠BMVECs和星形胶质细胞(astro-cytes,ACs)以建立BBB体外模型。采用乙醇回流法从洋葱中提取黄酮类物质,通过透射电子显微镜观察和跨膜电阻值测量验证BBB模型;采用高效液相色谱(HPLC)检测黄酮类提取物对BBB的透过率。采用过氧化氢(H2O2)和黄酮提取物处理神经元细胞,MTT法观察其对细胞增殖和凋亡的影响;彗星电泳和免疫荧光法分析神经元细胞DNA损伤情况。结果透射电镜及跨膜电阻仪鉴定BBB体外模型构建成功;HPLC检测洋葱中黄酮类提取物BBB透过率为60.58%;该提取物在10～20μg/mL浓度对H2O2诱导的鼠神经元细胞凋亡有明显的抑制作用,并可减少神经元DNA损伤。结论采用乙醇回流法从洋葱中提取的黄酮类物质可有效透过BBB,并对H2O2诱导的鼠神经元细胞的凋亡和DNA损伤有明显抑制作用。
- 何丹杜文婷范雪娇杨鸣鸣所起凤刘戟
- 关键词：血脑屏障黄酮类物质神经元细胞DNA损伤
- 洋葱黄酮类物质对人结肠癌HCT116细胞增殖和凋亡的影响被引量：19
- 2008年
- 目的:观察两种不同提法的洋葱黄酮类物质对人结肠癌HCT116细胞增殖及凋亡的影响。方法:采用热水浸提法和乙醇抽提法从洋葱中提取黄酮类物质,MTT法测定其对人结肠癌细胞HCT116增殖的影响,免疫细胞化学染色检测Caspase-3蛋白的表达,TUNEL法观察细胞凋亡,并通过基因组DNA电泳观察凋亡特征性"梯状"条带。结果:MTT法结果显示两种不同方法提取的黄酮类物质对HCT116细胞的增殖均有抑制作用,呈现时间和剂量依赖性,而热水浸提法和乙醇抽提法相比,后者提取的物质抑制作用优于前者,发挥作用的起始浓度也较低;基因组DNA琼脂糖凝胶电泳显示黄酮类物质作用于HCT116细胞后出现凋亡细胞特有的DNA阶梯状条带;免疫细胞化学染色和TUNEL结果均表明在一定药物浓度作用后,细胞出现凋亡。结论:洋葱中的黄酮类物质对体外培养的人结肠癌HCT116细胞有明显的增殖抑制和凋亡诱导的作用,其中乙醇抽提法提取的黄酮类物质作用更强。
- 陈凤秀尉艳霞潘虹何宣霖任思冲刘戟
- 关键词：洋葱黄酮类物质HCT116细胞增殖凋亡
- DNA损伤修复基因XRCC4、RAD51单核苷酸多态性与中国地区食管癌易感相关性研究被引量：7
- 2013年
- 目的探究DNA双链断裂修复基因XRCC4、RAD51单核苷酸多态性与食管癌易感性的关系。方法采用以医院为基础的病例-对照研究方法,应用PCR限制性内切酶片段长度多态性(PCR-RFLP)检测包括正常对照61例,食管癌患者123例XRCC4基因启动子区G-1394T(rs6869366)位点,以及RAD51-G135C位点的单核苷酸多态性。通过logistic回归分析计算出比值比(OR)和95%置信区间(95%CI)。结果 XRCC4rs6869366位点G等位基因的基因型(GT+GG)的携带者患食管癌的风险显著增加(OR=3.022,95%CI=1.487～6.142,P=0.002)。RAD51基因型GC和CC与携带GG的野生型个体相比,携带RAD51变异基因型(GC和CC)的个体具有更高的患癌风险(OR=3.643,95%CI=1.501～8.842,P<0.05)。结论 DNA损伤修复系统中的基因多态性很可能与食管癌发生的易感性有关,XRCC4G-1394T,RAD51-G135C位点多态性改变均可增加食管癌的发病风险。
- 范雪娇任朋亮卢钟娇赵书杨晓龙刘戟
- 关键词：RAD51食管癌单核苷酸多态性
- 槲皮素对血脑屏障的透过及胶质瘤U251细胞活性的影响被引量：11
- 2010年
- 目的研究槲皮素对血脑屏障(BBB)透过情况及对人胶质母细胞瘤U251细胞增殖和凋亡的影响。方法原代培养脑微血管内皮细胞(BMVEC)和星形胶质细胞(AC),建立BBB体外模型,通过电子显微镜和跨膜电阻值(TEER)测量验证BBB模型,采用高效液相色谱(HPLC)检测槲皮素透过血脑屏障的情况。槲皮素处理U251细胞,用MTT观察细胞的生长、TUNEL检测细胞凋亡、彗星电泳(SCGE)分析DNA损伤及流式细胞术(FCM)分析细胞周期分布情况。结果透射电镜及TEER鉴定BBB体外模型构建成功,HPLC检测发现槲皮素对血脑屏障的透过率达到65.54%。槲皮素对人胶质母细胞瘤U251细胞有明显的增殖抑制及凋亡诱导作用,流式细胞仪检测提示槲皮素作用后,U251细胞阻滞于G2/M期。结论槲皮素可有效透过BBB,并对人胶质母细胞瘤U251细胞有明显的增殖抑制及凋亡诱导作用。
- 任思冲所起凤杜文婷潘虹杨鸣鸣王若菡刘戟
- 关键词：槲皮素血脑屏障胶质母细胞瘤彗星电泳
- MicroRNA-34a调控细胞衰老的研究被引量：2
- 2013年
- 目的探讨微RNA-34a(miRNA-34a)对细胞通过调控沉默交配型信息调节因子2同源蛋白1(SIRT1)的表达,从而引起细胞衰老的作用。方法构建pre-miRNA-34a表达载体,并将其和一个不针对任何基因的微小RNA-1792(miRNA-1792)表达载体(其他实验室赠送)分别转染至HEK293和HUVEC细胞内,用RT-PCR、Western blot检测各细胞组SIRT1mRNA与蛋白表达水平,以未转染的细胞为对照;将HUVEC细胞分为转染不同质粒、未转染质粒和用SIRT1激活剂白藜芦醇(终浓度1μmol/L,作用2h)处理HUVEC细胞(HUVEC-Res)组,中性彗星电泳分析H2O2作用2h后4组HUVEC细胞的双链损伤情况;用阿霉素处理上述4组HUVEC细胞2h,β-半乳糖甘酶(SA-β-gal)染色检测各细胞不同时间点的衰老情况。结果测序结果表明pre-miRNA-34a表达载体构建成功;RT-PCR、Western blot显示HEK293-pre-miRNA-34a和HUVEC-pre-miRNA-34a中SIRT1mRNA和蛋白质表达的水平明显下降(P<0.001);中性彗星电泳检测发现经H2O2处理后,HUVEC-Res组DNA损伤最轻,而HUVEC-miRNA-34a组DNA损伤程度最为严重;SA-β-gal染色显示DNA损伤后HUVEC-miRNA-34a衰老程度较其它3组严重,而HUVEC-Res组的衰老程度最为轻微。结论 miRNA-34a通过抑制SIRT1表达调控细胞衰老。
- 杨鸣鸣范雪娇杜文婷任鹏亮刘戟
