国家自然科学基金(81201765)
- 作品数：10 被引量：38H指数：4
- 相关作者：钟根深许芝山杨如路平陈亚楠更多>>
- 相关机构：新乡医学院第一附属医院新乡医学院中国医学科学院北京协和医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金河南省卫生科技创新型人才工程国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 力达霉素经肝动脉介入治疗或静脉化疗作用于兔肝癌 VX2移植瘤的实验研究被引量：1
- 2015年
- 目的探讨力达霉素经肝动脉介入治疗和静脉化疗两种给药途径对VX2兔肝癌的影响。方法开腹方法将VX2瘤组织块分别植入12只新西兰大白兔的肝左叶,建立VX2兔肝癌模型,B超检测肿瘤生长情况后随机分为两组:A组为力达霉素肝动脉介入组,B组为力达霉素静脉化疗组(6只/组)。A组在数字减影血管造影(DSA)引导下经肝固有动脉注入力达霉素(1 ml,0.05 mg/kg),B组通过耳缘静脉注入力达霉素(1 ml,0.05 mg/kg),给药10 d后活杀两组动物,取肝肿瘤组织4%多聚甲醛固定,免疫组化方法测定CD34、增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白的表达;应用Cobas 8000检测血清生化丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)水平;计算并比较两种不同给药方式的肿瘤生长抑制效果。结果给药10 d后两组肿瘤均有增大,但与B组相比,A组肿瘤生长率明显降低(P<0.05);免疫组化结果显示,介入途径给药更能下调CD34、PCNA表达水平。结论在治疗兔肝癌VX2中,力达霉素经肝动脉介入给药治疗效果优于静脉化疗给药。
- 许芝山钟根深霍书华齐劲松薛会朝周艳君李良
- 关键词：力达霉素介入治疗VX2肝肿瘤
- CD137/CD137L在食管癌中表达与预后的相关性分析被引量：3
- 2017年
- 目的研究食管癌中CD137/CD137L的表达情况,并分析两者在食管癌中表达的意义及其与预后的关系。方法以购自上海芯超生物科技有限公司的食管癌组织芯片为研究对象,采用免疫组织化学方法检测组织芯片中87例食管癌组织及其相应的癌旁组织中CD137/CD137L的表达情况;采用χ~2检验或Fisher's精确检验的方法分析食管癌及癌旁组织中CD137/CD137L的表达与临床病理特征的关系;采用Kaplan-Meier法分析CD137/CD137L的表达与食管癌患者预后的关系。结果在87例食管癌组织和相应的癌旁组织中CD137的阳性表达率分别为36.8%和72.4%,两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。在87例食管癌组织和相应的癌旁组织中CD137L的阳性表达率分别为57.5%和96.6%,两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。食管癌中CD137表达阳性率与浸润深度相关(P<0.05),而与年龄、性别、肿瘤部位、分化程度、临床分期均不相关(P>0.05)。食管癌中CD137L表达与临床分期相关(P<0.05),而与年龄、性别、肿瘤部位、分化程度、浸润深度均不相关(P>0.05)。CD137表达与食管癌患者的预后不相关(P=0.6301),CD137L表达与食管癌患者的预后相关(P=0.0368)。结论 CD137L的表达水平是影响食管癌患者预后的独立因素;CD137/CD137L可能在食管癌的抗肿瘤免疫中发挥重要作用。
- 井贺楠李静雅许芝山杨如路平赵宝生钟根深
- 关键词：食管癌CD137CD137L预后
- 四种小鼠肠道微生物DNA提取方法比较被引量：8
- 2015年
- 采用异硫氰酸胍(guandine thiocyanate,GITC)法、Tiangen DNA提取试剂盒、Omega DNA提取试剂盒和广泛应用的十六烷基三甲基溴化铵(hexadecyl trimethyl ammonium bromide,CTAB)法提取小鼠粪便微生物总DNA,通过比较所提取DNA的浓度和纯度,发现粪便DNA提取试剂盒提取的DNA纯度最高但浓度最低;CTAB法所得的DNA浓度最高但纯度最低;GITC法所得DNA的浓度高于粪便DNA提取试剂盒,纯度高于CTAB法。通过变性梯度凝胶电泳(16S r DNA-PCR-DGGE)指纹图谱分析技术进一步比较了各种提取方法所代表微生物群落的丰富度和多样性。结果表明,GITC法提取得到的DNA所代表细菌的丰富度和多样性显著高于其他3种方法。本实验所建立的GITC法可更全面地反映肠道微生物的多样性和群落结构,是一种较为理想的粪便微生物DNA提取方法。
- 吴敏娜武亚琦屈艳魏纪东钟根深
- 关键词：DNA提取肠道微生物粪便
- 三氧化二砷联合顺铂抑制C6胶质瘤细胞增殖的实验研究被引量：3
- 2014年
- 目的探讨三氧化二砷(As2O3)联合顺铂(CDDP)抑制C6神经胶质瘤细胞增殖情况及其分子机制。方法体外实验采用MTT法检测对C6神经胶质瘤细胞的抑制率,流式细胞法检测C6胶质瘤细胞的凋亡及周期,Western blot检测caspase-3、PTEN、PI3K、Akt蛋白表达水平;体内实验采用免疫组化法检测caspase-3、IκB-α调控因子的表达,并观察大鼠的生存情况。结果 As2O3、CDDP及联合应用分别作用于C6神经胶质瘤细胞24 h后的细胞增殖最大抑制率分别为34.37%、31.73%和76.40%,其相应药物浓度分别为12.5、10.0、(12.5+10.0)μmol/L;两者联用后对C6胶质瘤细胞作用24 h后的凋亡率分别为从单独用药时的(4.60±1.12)%、(14.59±0.79)%提高到(36.13±1.55)%;采用PI单染检测的细胞周期也进一步证明了联合用药增加了C6细胞的周期抑制作用。Caspase-3、PTEN蛋白在联合组C6胶质瘤细胞中表达显著上调,而PI3K、Akt蛋白在联合组C6胶质瘤细胞中表达下调;免疫组化法检测结果显示,caspase-3调控因子在联合组用药的C6胶质瘤细胞中的表达上调,而IκB-α调控因子表达下调;但体内实验表明,在18 d观察期内各组大鼠的生存期无明显差异(P=0.2531)。结论 As2O3联合CDDP通过上调caspase-3和PTEN,下调PI3K、Akt及IκB-α抑制胶质瘤细胞体内外的生长。
- 王志刚钟根深马鹏举岳双柱周国胜
- 关键词：顺铂神经胶质瘤三氧化二砷
- 抗明胶酶单链抗体和力达霉素融合蛋白抗纤维肉瘤HT-1080增殖和转移的实验研究被引量：1
- 2013年
- 目的观察抗明胶酶dFv-LDP以及其强化融合蛋白dFv-LDP-AE对人纤维肉瘤HT-1080的生长抑制作用。方法采用蛋白质印迹法分析不同细胞系中明胶酶表达情况,四甲基偶氮唑蓝法分析融合蛋白dFv-LDP以及强化融合蛋白dFv-LDP-AE的对HT-1080的生长抑制作用;酶联免疫吸附法以及免疫荧光分析融合蛋白dFv-LDP和HT-1080的结合能力;流式细胞术分析两者单独或者联合对HT-1080的周期阻滞;评价融合蛋白dFv-LDP和dFv-LDP-AE单独和联合体内抗HT-1080Luc肺转移的活性。结果 HT-1080的明胶酶表达丰度较之其他类型肿瘤明显,酶联免疫吸附法和免疫荧光分析表明融合蛋白dFv-LDP与HT-1080细胞有着良好的亲和力;四甲基偶氮唑蓝法结果显示dFv-LDP-AE对HT-1080体外增殖有着强烈的杀伤作用;FACS表明融合蛋白dFv-LDP和dFv-LDP-AE的联合对细胞周期的阻滞没有明显的增效作用;体内实验性肺转移实验结果表明,融合蛋白dFv-LDP(10 mg.kg-1)组肺部转移灶数目为对照组的55.8%(P<0.01);强化融合蛋白dFv-LDP-AE在0.4和0.6 mg.kg-1剂量下的转移灶数目分别为对照组的41.4%(与dFv-LDP 10 mg.kg-1组相比,P<0.05)和25.1%(与dFv-LDP10 mg.kg-1组相比,P<0.05);联合dFv-LDP后,其肺部转移灶数目为对照组的20.3%(与dFv-LDP-AE 0.4 mg.kg-1组相比,P<0.05)和13.1%(与dFv-LDP-AE 0.6 mg.kg-1组相比,P<0.05),提示联合给药可进一步提高抗转移的效果。结论融合蛋白dFv-LDP联合强化融合蛋白dFv-LDP-AE对裸鼠移植HT-1080实验性肺转移的抑制效果具有增效作用。
- 钟根深郭晓芳张胜华甄永苏
- 关键词：力达霉素明胶酶纤维肉瘤实验性肺转移
- 初诊肺癌患者多次化疗外周血免疫相关指标动态变化的研究被引量：8
- 2017年
- 目的:探索免疫治疗与化疗相结合的有利切入点,为临床免疫治疗介入提供试验依据。方法:收集2015年11月至2016年12月新乡医学院第一附属医院初诊的23例肺癌患者,全部患者均完成连续5个周期的化疗,采用流式细胞术方法检测化疗过程中患者外周血免疫相关指标如CD4^+T细胞、CD8^+T细胞、CD19^+B细胞和CD16^+、CD56^+、NK细胞比率,T细胞表面共信号分子PD-1、PD-L1、CD137、CTLA-4、CCR-4、LAG-3以及细胞因子表达情况。分析多周期过程中,上述指标动态变化趋势。结果:在肺癌患者多个周期的化疗过程中,机体CD8^+T淋巴细胞、CD19^+B淋巴细胞和CD16^+、CD56^+、NK细胞水平下调,CD4^+T淋巴细胞数量增加,差异具有统计学意义(P<0.05);T细胞表面共抑制分子PD-1、CTLA-4和CCR-4随治疗进行表达下调,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:肺癌患者在多个周期的化疗中,实施淋巴细胞亚群数量及T细胞表面共抑制分子监测具有重要意义,化疗中后期针对免疫检查点高表达患者,联合应用PD-1抗体、PD-L1抗体、CTLA-4抗体或CCR-4抗体可能具有更优的治疗效果。
- 尤朵陈亚楠杨如许芝山路平钟根深
- 关键词：免疫治疗肺癌
- 气管内注射博来霉素致小鼠肺纤维化造模方式改良被引量：4
- 2015年
- 目的探讨手术显微镜下气管内注射博来霉素制作肺纤维化模型的效果。方法选择健康成年清洁级雌性8周龄C57BL/6小鼠30只,采用随机数字表法将其分为对照组和观察组,每组15只。对照组小鼠在直视下行气管内注射博来霉素,观察组小鼠在手术显微镜下行气管内注射博来霉素造模,观察术后12 h内各组小鼠死亡情况及术后1周体质量变化;术后28 d每组随机选取8只小鼠,取小鼠肺组织制备石蜡切片并进行苏木精-伊红染色、Masson染色,评价各组小鼠肺泡炎及肺纤维化程度。结果术后12 h内观察组小鼠死亡率显著低于对照组(P<0.05)。术后1周内观察组小鼠体质量下降显著低于对照组(P<0.05)。观察组小鼠肺泡炎及肺纤维化评分均显著高于对照组(P<0.05)。结论手术显微镜下行气管内注射博来霉素制备肺纤维化模型对小鼠损伤小,造模效果好,是一种有效的肺纤维化模型制备手段。
- 杨宇袁晓梅吴敏娜许芝山霍书华钟根深郭悦鹏
- 关键词：手术显微镜肺纤维化博来霉素小鼠
- 过表达IL-18抑制人结直肠癌细胞HCT-116的增殖被引量：4
- 2018年
- 目的:研究过表达IL-18基因对人结直肠癌(colorectal cancer,CRC)HCT-116细胞体内外增殖的影响及其可能的机制。方法:构建含人IL-18基因片段的载体,采用慢病毒转染法获得稳定过表达人IL-18的CRC HCT-116细胞株HCT-116/IL-18,CCK-8法检测HCT-116/IL-18细胞与野生型HCT-116细胞的增殖,Western blotting检测两组细胞内IL-18、Cyclin D1、增殖细胞核抗原(PCNA)、DNA损伤修复酶(PARP)蛋白的表达。将HCT-116、HCT-116/IL-18细胞分别接种于裸鼠左右两侧腋下,观察成瘤性及移植瘤的生长情况,免疫组化法检测移植瘤组织中IL-18及PCNA的表达。结果:IL-18基因在HCT-116细胞内过表达,可延缓HCT-116的增殖(P<0.05或P<0.01);与HCT-116细胞相比,HCT-116/IL-18细胞内PARP表达明显增强,PCNA、Cyclin D1表达减弱(P<0.01)。HCT-116/IL-18细胞系在裸鼠体内成瘤率明显降低,成瘤率为43%,与对照组比较其移植瘤成瘤时间晚、生长慢、肿块小,且HCT-116/IL-18异种移植瘤PCNA蛋白表达下调(P<0.01)。结论:过表达IL-18基因对HCT-116细胞生长增殖具有抑制作用,其机制可能与IL-18调控细胞周期和促进DNA损伤有关。
- 陈亚楠杨如许芝山吴敏娜路平钟根深
- 关键词：结直肠癌白介素-18移植瘤
- 过表达IL-18的T细胞对胰腺癌细胞SW-1990的杀伤作用被引量：1
- 2017年
- 目的探讨IL-18基因过表达的T细胞对胰腺癌细胞系SW1990的杀伤作用。方法用PCR技术构建含IL-18基因的重组慢病毒,HEK293T细胞包装后感染分离培养的人T淋巴细胞,与胰腺癌细胞SW-1990共培养后,检测培养上清中的LDH含量、ELISA检测IL-2和IFN-γ的含量,以间接评估其对SW-1990细胞体外的杀伤作用。结果成功构建和包装了人IL-18的重组慢病毒,感染人T淋巴细胞后,在与人胰腺癌细胞SW-1990共培养条件下,与空白对照组相比,LDH的释放显著增多(P<0.01);IL-2和IFN-γ的分泌亦显著增多(P<0.01)。结论过表达人IL-18蛋白的T淋巴细胞对胰腺癌细胞SW-1990具有更强的杀伤作用。
- 钟根深尤朵陈亚楠杨如许芝山吴敏娜
- 关键词：胰腺癌IL-18T淋巴细胞
- 非小细胞肺癌组织中基质金属蛋白酶-3的表达与患者预后的关系被引量：5
- 2016年
- 目的探讨非小细胞肺癌（NSCLC）组织中基质金属蛋白酶-3（MMP-3）的表达水平对患者预后的影响。方法应用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶法检测NSCLC组织中MMP-3的表达水平,分析MMP-3过表达与临床病理特征及患者术后生存期的相关性。结果 60例NSCLC患者中,MMP-3表达阴性15例（25.0%）,阳性13例（21.7%）,强阳性32例（53.3%）。有淋巴结转移的NSCLC患者MMP-3高表达率为71.4%,高于无淋巴结转移者的37.5%（P〈0.05）。Ⅰ~Ⅱ期和Ⅲ~Ⅳ期NSCLC患者MMP-3的高表达率分别为25.0%和72.2%（P〈0.05）。MMP-3高表达与组织学类型、组织分化程度、肿瘤分期、原发肿瘤大小及性别、年龄无明显关系（P〉0.05）。MMP-3低表达组NSCLC患者术后1、2、3 a生存率分别为96.3%、75.8%和52.8%,高表达组患者术后1、2、3 a生存率分别为81.1%、38.2%和25.5%,MMP-3低表达组NSCLC患者术后1、2、3 a生存率高于高表达组（P〈0.05）。Ⅰ~Ⅱ期NSCLC患者术后3 a生存率高于Ⅲ~Ⅳ期患者（P〈0.05）。无淋巴结转移的NSCLC患者术后3 a生存率高于有淋巴结转移患者（P〈0.05）。NSCLC患者不同性别、年龄、组织学类型、分化程度、肿瘤直径、肿瘤分期之间术后3 a生存率比较差异均无统计学意义（P〉0.05）。COX模型回归分析结果显示,MMP-3高表达者的死亡风险是低表达者的6.089倍。结论 MMP-3过表达可能是NSCLC患者独立的预后因子。
- 赵莹莹钟根深袁晓梅霍书华郭悦鹏
- 关键词：非小细胞肺癌基质金属蛋白酶预后
