博士科研启动基金(201001)
- 作品数：2 被引量：7H指数：2
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- 五指山小型猪胰岛分离和纯化的初步研究被引量：3
- 2011年
- 目的探讨封闭群五指山小型猪胰岛的分离和纯化,并在体外检测分离纯化后的胰岛对高低糖刺激反应来判定胰岛功能。方法 7只雄性五指山小型猪和6只普通成年猪的胰腺分别被用于胰岛分离纯化实验研究。胰腺获取后,胰管插管并注入消化液(胶原酶V,1.8g/L),胰腺充分灌注后,切成碎块并转入消化罐内消化,消化液过滤后并经梯度离心后,收集纯化的胰岛,经双硫宗(DTZ)染色后计数,并在不同浓度葡萄糖培养液里检测释放的胰岛素浓度来判定胰岛的活性。结果小型猪胰腺解剖上更接近人类,胰腺消化时间平均为(30±8)min,消化程度为(70±8)%,胰岛产量纯化前为(5500±1025)IEQ/g,纯化后为(4120±625)IEQ/g,纯度为85%,活力为80%;取自屠宰场猪胰岛产量纯化前为(2500±625)IEQ/g,纯化后为(1720±435)IEQ/g,活力为60%。镜下观察,小型猪胰岛镜下可被DTZ染色呈红色,纯化后的胰岛大小一致,形态完整,体外培养小型猪胰岛在低糖和高糖刺激下胰岛素释放分别为(1.346±0.128)ng/mL和(2.565±0.208)ng/mL,差异有显著性意义(P<0.05),刺激指数为(1.908±0.152),而取自屠宰场猪胰岛素释放分别为(1.246±0.18)ng/mL和(1.4±0.208)ng/mL,差异无显著性。结论封闭群五指山小型猪胰腺解剖结构和人类相似,分离纯化后的胰岛产量高,功能良好,适合异种胰岛移植。
- 蒋小峰钱滔来向广阳王业增陈松伟杨学伟章乐虹陈德
- 关键词：小型猪胰岛异种
- 胶原酶浓度对大鼠胰岛分离纯化产量的影响被引量：4
- 2011年
- 目的观察胶原酶浓度对大鼠胰岛分离纯化产量的影响,筛选出获取高产量胰岛的最佳消化液的胶原酶浓度。方法 75只雄性SD大鼠按胶原酶浓度分为5组：Ⅰ组（0.5 mg/ml）、Ⅱ组（0.75 mg/ml）、Ⅲ组（1.0 mg/ml）Ⅳ组（1.2 mg/ml）和Ⅴ组（1.5 mg/ml）,每组15只。通过胆灌注胶原酶V来消化大鼠胰腺,分离胰岛,采用不连续密度梯度Ficoll离心法纯化胰岛,根据胰岛直径计数所获胰岛的数量及胰岛当量,并利用葡萄糖刺激胰岛素释放试验评估胰岛功能。结果分离的大鼠胰岛具有较好的质量,胰岛纯度为95%左右,活性率为90%左右,体外培养生长良好。随着胶原酶的浓度增加,胰岛数量和胰岛当量明显增加（P〈0.05）,并且最大直径的胰岛数量也在增加（P〈0.05）,在胶原酶浓度1.0 mg/ml时获得的胰岛产量最高,其次为1.2 mg/ml,在其他浓度时,胰岛产量都较低（P〈0.05）。在低糖和高糖刺激下胰岛素的释放分别为（1.346±0.128）ng/ml和（2.565±0.208）ng/ml,差异具有显著性意义（P〈0.05）,刺激指数为（1.908±0.152）,提示胰岛细胞功能良好,电镜照片显示胰岛生长状况良好。结论进行大鼠胰岛分离纯化时最适宜的胶原酶浓度为1.0~1.2 mg/ml,可获得稳定高产量的胰岛,过低和过高的浓度都是不适宜的。
- 蒋小峰高玲钱滔来陈松伟王业增向广阳钱世鹍陈德
- 关键词：胰岛
