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湖南省卫生厅重点资助项目(A2004-003)
作品数:
1
被引量:2
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相关作者:
秦立新
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张广森
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2006
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大疱性类天疱疮并获得性血友病A患者血浆IgG亚型及FⅧ结合表位鉴定
被引量:2
2006年
目的确定1例大疱性类天疱疮并获得性血友病A患者的临床和实验室诊断;通过体内外干预实验观察获得性血友病A患者体内的FⅧ抑制物对正常人血浆及兔FⅧ凝血活性(FⅧ:C)的影响;确定患者FⅧ抑制物的IgG亚型和结构表位,以揭示该病发病的分子机制。方法用Ⅰ期法测定患者血浆FⅧ:C;以Bethesda单位(BU)表示FⅧ:C抑制物滴度;用蛋白A一琼脂糖柱纯化患者及正常人血浆IgG;用活化部分凝血活酶时间(APTT)分析其对FⅧ:C的抑制作用;观察FⅧ抑制物对兔血浆FⅧ:C活性的抑制作用;分别用抗IgG1、IgG2、IgG3、IgG4抗体作Western blot,结合灰度扫描确定患者血浆IgG亚型相对表达量;散射比浊法测定患者及正常人体内各IgG亚型浓度;用FⅧ/FⅧ抑制物固相结合试验及Western blot鉴定患者IgG抗体(FⅧ抑制物)作用于FⅧ的具体“表位”。结果①患者APTT明显延长,正常血浆不能纠正;FⅧ:C〈1.5%,FⅧ抑制物滴度为147.8BU;②纯化的患者IgG以剂量依赖方式抑制正常人混合血浆FⅧ:C;动物实验显示患者血浆能以时间依赖方式延长兔血浆APTT;@Western blot结果显示FⅧ抑制物成分主要为IgG4,其次为IgG1,FⅧ抑制物作用于FⅧ:C的结构相对分子质量为44×10^3。散射比浊法测定结果显示患者体内IgG4、IgG4含量明显高于正常人。结论研究结果证明大疱性类天疱疮并获得性血友病A患者体内FⅧ抑制物对FⅧ:C有抑制作用,FⅧ抑制物的IgG亚型主要为IgG4,其次为IgG1;患者FⅧ抑制物作用于FⅧ的表位为相对分子质量为44×10^3的肽段,揭示了该获得性血友病A发生、发展的分子机制。
左文丽
张广森
卿之驹
徐运孝
秦立新
徐敏
关键词:
大疱性类天疱疮
IGG亚型
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