国家高技术研究发展计划(2007AA02Z226)
- 作品数：10 被引量：134H指数：4
- 相关作者：张荣珍范文来郑璞孙志浩倪晔更多>>
- 相关机构：江南大学重庆博腾科技有限公司中国科学院天津工业生物技术研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程理学更多>>
- 羰基还原酶产生菌SW 2026的产酶条件及其不对称催化还原4′-氯苯乙酮被引量：2
- 2009年
- 以4′-氯苯乙酮为模型底物,对筛选得到的Candida krusei SW 2026的羰基还原酶产酶条件进行研究。结果表明:适宜的发酵培养基组成为甘油50 g/L,玉米浆20 g/L,KH2PO44 g/L,MgSO4.7H2O 1.5 g/L;适宜的培养条件为温度30℃,初始pH6,摇床转速200 r/min,发酵周期48 h。在产酶发酵条件下培养的湿细胞对4′-氯苯乙酮进行不对称还原反应,产物(S)-4′-氯-α-苯乙醇的产率最高达88.56%,e.e.值稳定在87%左右。
- 孙鹏张文倪晔郑璞孙志浩
- 关键词：芳香酮产酶条件
- TFT-LCD中聚酰亚胺取向剂用关键中间体4-BDAF的制备被引量：1
- 2009年
- 4-BDAF是制备聚酰亚胺取向剂材料的关键中间体之一。自主设计了易于国产化的、全新的4-BDAF工艺合成路线。采用六氟丙酮、苯酚为起始原料,选择甲基磺酸为催化脱水剂,经过三步反应,通过优化原料配比、反应时间、反应温度等实验参数来选择最佳工艺条件。结果表明,在六氟丙酮、苯酚、催化剂的摩尔配比为1∶2∶2,反应温度控制在155℃,反应时间为11 h时的条件为最优工艺条件,4-BDAF的总收率达到57%。产品再经过精密提纯,在品质方面达到了国外公司产品的同等水平,价格具有明显优势,且易实现工业化量产。
- 张建立尚洪勇梁晓刘鑫勤
- 关键词：聚酰亚胺
- 近平滑假丝酵母(R)-羰基还原酶在大肠杆菌中的外泌表达及高效转化(R)-苯基乙二醇
- 2014年
- 克隆了近平滑假丝酵母(Candida parapsilosis)(R)-羰基还原酶基因rcr,构建胞外表达工程茵Escherichia coli BL21(DE3)/pET20b-rcr,实现了(R)-羰基还原酶在大肠杆菌中高效外泌表达,周质空间和发酵液酶的比活力分别达0.68 U/mg和0.26 U/mg,与大肠杆菌的胞内体系重组酶相比,酶的比活力提高了近两倍。为了更好地促进该重组酶的外分泌于大肠杆菌细胞外,通过添加温和型化学渗透剂甘氨酸,改善细胞壁的透性,(R)-羰基还原酶的活力提高至1.99 U,与添加甘氨酸前相比,酶活力提高了12.4倍,比活提高了4.3倍。浓缩后的发酵液催化2-羟基苯乙酮,产生(R)-苯基乙二醇,产率为88.1%,e.e.值为93.9%。与胞内重组酶相比,产率和光学纯度分别提高了44.4%和15.9%。本研究通过构建(R)-羰基还原酶的大肠杆菌分泌表达体系,大幅度提高了(R)-羰基还原酶的比活和生物转化手性醇的效率。
- 王磊张荣珍徐岩范文来李尧慧梁宏博
- 关键词：分泌表达甘氨酸大肠杆菌近平滑假丝酵母
- 定点突变改变近平滑假丝酵母SCRⅡ催化苯乙酮衍生物底物谱
- 2011年
- 【目的】通过定点突变技术,改变近平滑假丝酵母短链羰基还原酶Ⅱ(SCRⅡ)催化苯乙酮衍生物的功能,为数种手性芳香醇的生产提供一种高效、安全的新型制备方法。【方法】通过氨基酸序列和蛋白结构比对的方法,选择SCRⅡ的底物结合域中关键氨基酸位点E228实施突变,构建相应的突变株Escherichia coliBL21/pET28a-E228S;以苯乙酮衍生物为底物,对突变株的酶活和生物转化功能进行了分析。【结果】酶活测定结果表明:突变株E.coli BL21/pET28a-E228S催化原始底物2-羟基苯乙酮的酶活仅为原始酶活的25%左右;而催化苯乙酮、4'-甲基苯乙酮、4'-氯苯乙酮的酶活是突变前的7-20倍。突变株E.coli BL21/pET28a-E228S生物转化2-羟基苯乙酮,获得产物(S)-苯基乙二醇的得率不超过10%,而以苯乙酮、4'-甲基苯乙酮、4'-氯苯乙酮为底物时,生物转化产物光学纯度维持在99%,得率高达80%以上。【结论】对底物结合域中的关键氨基酸实施突变,提高了SCRⅡ催化苯乙酮衍生物的底物广谱性,拓展了该酶的生物功能,为理性改造短链羰基还原酶的不对称还原催化功能和手性芳香醇的制备提供了新型途径。
- 张波涛张荣珍王珊珊徐岩
- 关键词：定点突变生物转化手性醇
- mRNA翻译起始区二级结构优化提高(R)-羰基还原酶的表达及催化效率被引量：4
- 2009年
- 为了提高近平滑假丝酵母(Candida parapsilosis CCTCC M203011)的(R)-羰基还原酶在大肠杆菌中的表达水平及催化效率,对酶编码基因mRNA翻译起始区中+1～+78区进行二级结构的优化,并构建了相应的突变体。优化后mRNA翻译起始区的发夹结构明显减少,自由能显著下降(由原始的?9.5kcal/mol降至?5.0kcal/mol),使酶蛋白的表达水平及粗酶比活力分别比优化前提高了4～5倍和61.9%。在高底物浓度(5.0g/L2-羟基苯乙酮)下,优化突变株不对称转化效率较高,产物(R)-苯基乙二醇的光学纯度和产率分别为93.1%e.e.和81.8%,比优化前提高了27.5%和40.5%。研究结果表明:优化mRNA翻译起始区的二级结构,克服蛋白翻译启动的空间位阻,不仅能促进翻译的顺利进行,使目标蛋白得到高效表达,而且有利于蛋白空间结构的正确折叠,有效提高酶蛋白活力及生物催化功能。
- 王珊珊张荣珍耿亚维沈伟谭念江王磊徐岩
- 关键词：翻译起始区MRNA二级结构
- 变形假单胞菌精氨酸脱亚胺酶基因序列分析及其表达载体构建被引量：3
- 2008年
- 通过分子克隆手段获得了变形假单胞菌(Pseudomonas plecoglossicida CGMCC2039)精氨酸脱亚胺酶(arginine deiminase,简称ADI)基因序列,并将扩增的ADI基因片段插入表达载体pET28a中,构建了ADI的重组表达载体。核苷酸序列分析显示该基因开放阅读框为1254bp,编码417个氨基酸。Blast分析显示它与其他假单胞菌属菌种具有很高的同源性。SDS-PAGE结果显示出分子量大小为48.5kDa的明显的蛋白质特异性条带,并具有酶活。该载体的构建为该基因在大肠杆菌中的表达、纯化和抗肿瘤活性研究奠定了基础。
- 李振伟倪晔郑璞刘咏梅徐岩孙志浩
- 关键词：精氨酸脱亚胺酶表达载体构建
- 水／离子液体两相体系中出芽短梗霉催化4-氯-乙酰乙酸乙酯不对称还原合成(S)-4-氯-3-羟基-丁酸乙酯被引量：14
- 2008年
- 考察了水/离子液体两相体系中出芽短梗霉(Aureobasidium pullulansCGMCC1244)催化4-氯乙酰乙酸乙酯(COBE)不对称还原生成光学活性(S)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯((S)-CHBE)的性能,并对反应条件如摇床转速、相体积比、温度、初始底物浓度和pH值等进行了优化.结果表明,在水/1-丁基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐体系中,出芽短梗霉催化COBE不对称还原生成(S)-CHBE,在30℃,pH6·6,摇床转速180r/min和不对称反应8h条件下,反应物的转化率、产物ee值和浓度分别达到95·6%,98·5%和47·1g/L.在控制pH值为6·6的情况下,通过分添加底物可有效提高产物(S)-CHBE浓度至75·1g/L.
- 张帆倪晔孙志浩郑璞林文清朱坡居年丰
- 关键词：离子液体全细胞出芽短梗霉
- 风味分析定向中国白酒技术研究的进展被引量：58
- 2010年
- 介绍了最新以风味定向技术对中国白酒进行研究的进展,包括对中国白酒的风味化合物、特征风味化合物、功能微生物等相关研究的情况,首次系统地将白酒的微量组分的研究从分析化学层面提升到风味化学的层面,建立的风味定向分析技术对于丰富我国白酒风味的理论和实践有着重要价值,这无疑将推动中国白酒新一轮的技术跨越和进步。
- 徐岩范文来王海燕吴群
- 关键词：白酒风味分析
- 芽胞杆菌(Bacillus sp.)YX-1耐有机溶剂葡萄糖脱氢酶的基因克隆与酶学性质被引量：4
- 2013年
- 【目的】从芽胞杆菌(Bacillus sp.)YX-1基因组中克隆出一种有机溶剂耐受型的葡萄糖脱氢酶基因,实现了该基因在大肠杆菌中的高效表达,研究了重组蛋白的酶学性质。【方法】依据芽胞杆菌属中葡萄糖脱氢酶氨基酸序列的保守性,设计合理引物,钓取来源于Bacillus sp.YX-1的葡萄糖脱氢酶基因,构建诱导型表达载体pET28a-gdh,于大肠杆菌中进行表达。镍柱亲和层析法纯化重组蛋白,考察了重组蛋白的酶学性质。【结果】葡萄糖脱氢酶基因全长为786 bp,编码261个氨基酸。酶学研究结果表明:该酶最适反应温度为45℃,最适pH值为8.0;具有良好的有机溶剂耐受性,于50%的辛烷、环己烷、癸烷中室温放置1 h后,酶活仍能保持90%以上;具有较宽的底物谱,对多种糖均具有一定的催化活性,其中催化D-葡萄糖的活力最高,产生还原型辅酶因子;对辅酶NADH和NADPH具有相似的依赖性,对NAD+和NADP+的催化比活分别为8.37 U/mg和8.62 U/mg。【结论】利用生物信息学成功地挖掘出Bacillus sp.YX-1一种耐有机溶剂的葡萄糖脱氢酶,为氧化还原酶在有机相反应中的的辅酶再生循环提供了新型的生物催化剂。
- 张波涛张荣珍王磊徐岩
- 关键词：葡萄糖脱氢酶辅酶再生有机溶剂耐受性底物特异性
- 白酒窖泥挥发性成分研究被引量：48
- 2010年
- 窖泥是产生浓香型和酱香型白酒中己酸乙酯的关键材料。应用HS-SPME(顶空-固相微萃取)结合GC-MS(气相色谱-质谱)技术对浓香型白酒生产用窖泥的微量成分进行了分析。在我国浓香型大曲白酒生产用窖泥中共检测到184种微量挥发性成分,其中醇类18种,酸类11种,羰基化合物13种,酯类78种,酚类化合物7种,芳香族化合物26种,内酯类化合物5种,硫化物6种,呋喃类化合物7种,吡嗪类化合物3种,吲哚类化合物2种,其它化合物8种。大部分成分是第一次检测到。窖泥微量成分的检测有可能为窖泥质量标准的制定提供理论基础。
- 范文来徐岩
- 关键词：气相色谱-质谱挥发性化合物芳香族化合物白酒浓香型白酒
