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菠萝凋萎相关病毒–2实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立被引量：11: 2014年; 菠萝凋萎相关病毒(Pineapple mealybug wilt associated virus-2,PMWaV-2)是引起的菠萝凋萎病(Mealybug wilt of pineapple,MWP)的重要病原。本研究中根据PMWaV-2外壳蛋白基因序列设计特异性引物和探针,建立基于TaqMan探针的实时荧光定量RT-PCR检测方法。该方法能高灵敏检测出阳性样品,对阴性样品及空白对照均无荧光反应;灵敏度比普通PCR高100倍;重复性试验表明批内和批间变异系数均在1.85%以内,表明本方法是一种操作简便、特异性强、灵敏度高、重复性较好的PMWaV-2定量检测方法。; 胡加谊罗志文范鸿雁李向宏刘志昕何凡; 关键词：菠萝 TAQMAN探针实时荧光定量RT-PCR

海南五指山猪Myf5与MyoD基因多态性分析被引量：8: 2015年; 为研究海南五指山猪Myf5和MyoD基因的多态性分布情况,本试验通过PCR-RFLP方法对80头海南五指山猪进行了Myf5和MyoD基因型检测,并运用生物信息学方法对这两个基因的序列进行分析。结果发现,在Myf5基因第1外显子的HhaⅠ-RFLP位点上,五指山猪以CC和CG基因型为主;在Myf5基因第1外显子的Hsp92Ⅱ-RFLP位点上,五指山猪以AA基因型为主;在MyoD基因第1内含子的DdeⅠ-RFLP位点上,等位基因A在五指山猪中是优势等位基因。此外,Myf5和MyoD基因启动子区域和第1外显子处存在CpG岛。本研究得到海南五指山猪Myf5和MyoD基因的序列信息,为下一步五指山猪Myf5和MyoD基因的功能研究奠定基础。; 吴淑疆晁哲; 关键词：五指山猪多态性

烟叶唇柱苣苔组培苗的生根与移栽技术研究被引量：1: 2015年; 以烟叶唇柱苣苔无菌芽苗为试材,研究基本培养基、糖浓度和不同生长素对其根系分化及移栽基质对组培苗移栽成活率的影响。结果表明,生根培养基为MS+NAA 0.5 mg/L+蔗糖30 g/L时,组培苗生根率高达100%,生根数多;在珍珠岩基质中栽培的生根苗,成活率高,生长状况好,是烟叶唇柱苣苔组培苗移栽的合适基质。; 潘梅王景飞戚华莎黄赛吕德任姜殿强; 关键词：离体培养移栽培养基

菠萝凋萎相关病毒-3实时荧光定量PCR检测方法的建立被引量：4: 2015年; 【目的】建立菠萝凋萎相关病毒-3实时荧光定量PCR检测方法。【方法】根据PMWa V-3外壳蛋白基因的保守区域设计特异性引物和探针,通过优化PMWa V-3实时荧光定量PCR检测体系,构建以重组质粒为标准品的标准曲线,建立起PMWa V-3实时荧光定量PCR检测方法。【结果】该方法能特异性地检测PMWa V-3,且灵敏度是普通RTPCR的10倍;该方法重复性良好,组间和组内变异系数均小于1.73。【结论】建立的实时荧光定量PCR方法是一种快速、简便、可信度高的PMWa V-3定量检测方法。; 胡加谊李向宏罗志文范鸿雁张治礼刘志昕何凡; 关键词：TAQMAN探针

烟叶唇柱苣苔叶片扦插繁殖方法的筛选被引量：9: 2018年; 筛选适合烟叶唇柱苣苔叶片扦插繁殖的方法,为通过扦插育苗实现烟叶唇柱苣苔快速无性繁殖提供技术支持。以烟叶唇柱苣苔叶片为试材,研究不同叶片插穗材料发生方式、不同生长素处理及不同基质扦插对烟叶唇柱苣苔的扦插影响。结果表明:1/2叶的扦插效果较好,平均每个插穗材料长出子株2.00~3.50株;适宜的生长素处理为NAA 100 mg/L浸泡6 h,扦插成活率达到100%,平均每个插穗材料长出子株2.83株;沙:表土:椰糠(V1:V1:V1)的混合基质适宜作为扦插基质,平均每个插穗材料发生子株2.26株。烟叶唇柱苣苔叶柄在NAA 100.0 mg/L中浸泡6 h后扦插于沙+表土+椰糠混合基质中,各生长指标均较佳。该叶片扦插繁殖方法较适合在烟叶唇柱苣苔产业化育苗中推广应用。; 戚华沙黄赛王景飞吕德任潘梅; 关键词：叶片扦插不定根

菠萝凋萎相关病毒-1实时荧光定量RT-PCR检测体系的建立与应用被引量：3: 2014年; 菠萝凋萎相关病毒-1(Pineapple mealybug wilt associated virus-1,PMWaV-1)是田间检出率最高的菠萝凋萎病毒。本研究根据PMWaV-1CP基因保守序列设计特异性TaqMan探针和引物,建立并优化了PMWaV-1实时荧光定量RT-PCR检测方法。优化后的反应体系制备的标准曲线为y=-3.307×log x+38.18,相关系数r2为0.998。试验结果表明,该方法能特异性地检测PMWaV-1,对PMWaV-2、3和阴性对照均无反应;最低检测限达到40拷贝。重复性试验表明批内和批间变异系数均小于1.98%,是一种操作简便、特异性强、灵敏度高、重复性较好的PMWaV-1定量检测方法。样品检测结果表明PMWaV-1在菠萝植株老叶、嫩叶和吸芽中的病毒含量呈递减趋势。; 胡加谊罗志文李向宏范鸿雁周朋章绍延张治礼刘志昕何凡; 关键词：TAQMAN探针实时荧光定量RT-PCR

海南五指山猪Myf5基因克隆与序列分析被引量：6: 2014年; 为了研究克隆五指山猪Myf5(myogenic factor 5,Myf5)基因,获得基因序列并分析基因结构及相关遗传变异,试验采用PCR扩增五指山猪Myf5基因组序列,通过克隆测序寻找基因中的突变位点。结果表明:在五指山猪Myf5基因组中共发现3处突变位点,分别位于第1外显子(C+121G,C+288G)和第1内含子(C+1 204G),生物信息学分析发现,五指山猪Myf5基因启动子区域存在一些潜在的转录因子结合位点,例如Sp1、GATA-1、C/EBPb、CdxA、SRY、Nkx-2和AML-1a等。; 晁哲王峰王峰孙瑞萍魏立民郑心力; 关键词：五指山猪生物信息学分析克隆

一种菠萝果腐病病原初步鉴定及生物学特性研究被引量：2: 2014年; 从海南菠萝产区的一种菠萝果腐病疑似样本中分离到了7株形态相近的真菌菌株,形态学鉴定结果表明该菌为链格孢菌[Alternaria alternata(Fr.)Kiessler];生物学特性研究结果表明,菠萝果皮榨汁培养基和PDA为病原菌生长适宜培养基;菌丝生长和孢子萌发最适生长温度均为28℃;菌丝生长和孢子萌发最适pH值分别为9和8;麦芽糖、果糖和半乳糖有利于菌丝生长,而果糖、半乳糖和蔗糖为病原分生孢子萌发的最适宜碳源;病原菌生长的适宜氮源为硝酸铵、酵母浸粉和天冬氨酸,酵母浸粉和天冬氨酸则有利于孢子萌发;完全光照最利于菌丝生长,分生孢子在光/暗交替条件下萌发率最高;病原孢子在RH≥95%的条件下才能萌发,水滴条件下孢子萌发率最高;病原菌致死温度为55℃处理20 min。; 罗志文李向宏范鸿雁胡加谊何凡; 关键词：菠萝果腐病病原鉴定生物学特性

烟叶唇柱苣苔叶片分化与植株再生研究被引量：10: 2014年; 以烟叶唇柱苣苔叶片为外植体,MS为基本培养基,研究了植物生长调节剂对其不定芽诱导、增殖与不定根形成的影响,以期建立烟叶唇柱苣苔的再生繁殖体系。结果表明:采用MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.1mg/L培养基,不定芽诱导率达到100%,该培养基对不定芽的增殖和生长效果好,40d的增殖系数达到7.43;采用MS+NAA 0.5mg/L培养基,30d生根率100%;组培苗在珍珠岩基质中移栽,成活率可达94%以上。; 潘梅戚华莎黄赛王景飞符瑞侃云勇; 关键词：叶片离体培养

表达猪IL-6重组杆状病毒的构建与鉴定: 2014年; 为了研究猪白细胞介素6(IL-6)的功能,试验应用Premier Primer 5.0软件,参照猪IL-6的基因序列设计合成了1对引物,成功地扩增出带酶切位点的猪IL-6基因,通过NheⅠ和HindⅢ双酶切位点将猪IL-6基因插入载体pFast-CB中,获得重组质粒pFast-CB-IL-6,并将其转化DH10Bac细胞,与Bacmid发生特异性转座作用,得到重组质粒Bacmid-IL-6,再将其转染昆虫细胞Sf 9。结果表明:经RT-PCR鉴定,获得重组杆状病毒rBacmid-IL-6。; 郑心力谭树义王峰林哲敏孙瑞萍刘圈炜晁哲晁哲魏立民; 关键词：白细胞介素6 杆状病毒克隆

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海南省科学事业费项目([2013]131)

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