国家自然科学基金(30870134C010902)
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
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- Cpn0425重组蛋白诱导细胞凋亡和产生前炎症因子的研究被引量：1
- 2013年
- 目的研究Cpn0425重组蛋白在体外诱导人单核细胞产生前炎症细胞因子IL-8和IL-1β的水平及诱导细胞凋亡的作用,为进一步探索Cpn感染致病的分子机制提供试验依据。方法 PCR扩增肺炎嗜衣原体Cpn0425蛋白编码基因,构建pGEX6p-2/Cpn0425重组质粒,在E.coli BL21中诱导表达,超声裂解后用谷胱甘肽S-转移酶(glutathione S-transferase,GST)纯化树脂纯化重组蛋白,ToxinEraser纯化柱去除内毒素后用不同浓度的GST-Cpn0425刺激THP-1细胞;ELISA法检测经刺激后的THP-1细胞产生的IL-8和IL-1β水平;以WST-1法检测经GST-Cpn0425处理后THP-1细胞的增生或抑制作用;用AnnexinV-FITC-PI染色法检测细胞凋亡情况。结果GST-Cpn0425能诱导THP-1细胞表达IL-8和IL-1β,当浓度增加到6μg/m(l8μg/ml)时,所产生的IL-8和IL-1β量最大,浓度分别为(716.11±41.26)pg/ml和(32.91±5.49)pg/ml。当6μg/ml GST-Cpn0425分别刺激细胞6h后即可从培养基中检测到IL-8和IL-1β,而刺激24h产生的量则达到高峰。GST-Cpn0425以剂量依赖方式抑制THP-1细胞增殖;GST-Cpn0425处理THP-1细胞24h后能诱导其发生凋亡,其细胞凋亡率最高为(17.76±4.2)%。结论Cpn0425蛋白能诱导THP-1细胞表达并分泌前炎症细胞因子IL-8和IL-1β;既能抑制THP-1细胞增殖,又能诱导其凋亡;因而可能是一个重要的致病因素。
- 肖光文刘良专谢小平吴移谋吴移谋
- 关键词：肺炎嗜衣原体前炎症细胞因子细胞凋亡
- 肺炎嗜衣原体三种不同抗原的临床诊断价值评价被引量：1
- 2010年
- 目的研究肺炎嗜衣原体3种重组抗原Cpn0146、Cpn0147及Cpn0308应用于肺炎嗜衣原体感染血清学诊断中的价值。方法构建pGEX6p-2／Cpn0146、Cpn0147、Cpn0308重组质粒，并诱导表达重组蛋白，采用间接ELISA法和免疫印迹法（Western—blot）分析其免疫原性及其免疫反应性。建立分别以3种重组蛋白为包被抗原的间接ELISA法，与肺炎嗜衣原体IgG商品诊断试剂盒平行检测183份呼吸道感染患者的血清标本及32份沙眼衣原阳性患者血清标本，比较各方法检出准确性及阳性率。结果GST-Cpn0146、Cpn0147、Cpn0308免疫兔血清中特异性IgG抗体效价滴度分别达1：6400、1：12800和1：12800以上；以3种重组蛋白为包被抗原的ELISA法准确性分别为92．3％、94．5％、96．7％。各方法检测出阳性率结果显示，Cpn0146组的阳性率为38．8％（71／183）、与肺炎嗜衣原体IgG试剂盒的阳性率比较差异有统计学意义（χ^2=12．07，P〈0．05）；Cpn0147阳性率40．9％（75／183），与肺炎嗜衣原体IgG试剂盒的阳性率比较差异有统计学意义（χ^2=8．10，P〈0．05）；Cpn0308阳性率44．8％（75／183），与肺炎嗜衣原体IgG试剂盒的阳性率比较差异无统计学意义（χ^2=0．57，P〉0．05）。结论Cpn0308在肺炎嗜衣原体感染血清学诊断实验中表现出良好的准确性（96．2％）和较高的阳性率（44．8％），可望用于进一步研制肺炎嗜衣原体诊断试剂盒。
- 陈虹亮胡旃周洲曾焱华代国知林应标吴移谋
- 关键词：重组蛋白质类血清学试验
- 肺炎嗜衣原体Cpn0425重组蛋白的克隆与表达及抗原性研究被引量：2
- 2012年
- 目的构建重组质粒pGEX6p-2/Cpn0425,在E.coli BL21中进行诱导表达,纯化获得重组融合蛋白Cpn0425,并评价其抗原性。方法 PCR扩增肺炎嗜衣原体Cpn0425蛋白编码基因,构建pGEX6p-2/Cpn0425重组质粒,测序正确后在E.coli BL21中诱导表达,用SDS-PAGE和Western-Blot进行分析和鉴定。结果构建了重组质粒pGEX6p-2/Cpn0425,并在E.coli BL21菌中高效表达出Mr约为50kDa的GST-Cpn0425目的蛋白,超声裂解后SDS-PAGE分析目的蛋白在菌体细胞内以可溶性形式表达,经采用默克Novagen的GST纯化树脂纯化获得纯度在95%以上的重组蛋白。结论获得了Cpn0425基因片段,并在E.coli BL21中成功表达,GST-Cpn0425具有良好的抗原性。
- 肖光文刘良专徐磊谢小平吴移谋
- 关键词：肺炎嗜衣原体III型分泌系统
