国家自然科学基金(30270701)
- 作品数：6 被引量：9H指数：2
- 相关作者：高英茂李少玲管英俊于丽杨青更多>>
- 相关机构：山东大学潍坊医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 高迁移率族蛋白B1基因的克隆及其与神经管发育的相关关系被引量：2
- 2006年
- 目的:构建神经管cDNA文库,寻找神经管发育相关基因。方法:提取E8.5 d金黄地鼠神经管总RNA;SMART技术构建神经管cDNA噬菌体表达文库;重组噬菌体PCR鉴定。将出现频率很高的重组噬菌斑,经质粒转化、酶切鉴定和DNA序列分析,证实为高迁移率族蛋白B1基因(HMGB1)。将HMGB1 cDNA片段回收、纯化,制备探针;Northern杂交检测不同发育阶段神经管中HMGB1 mRNA的表达变化。结果:构建的HMGB1cDNA片段含有完整的cDNA序列。Northern杂交显示:随胚胎发育,神经管HMGB1 mRNA表达量逐渐增加,E10 d增加最为明显,E12 d仍处于较高水平;而8.5 d高温致畸胚神经管,HMGB1 mRNA表达量较对照组明显减少。结论:HMGB1基因的表达与神经管发育及高温致神经管畸形的发生密切相关。
- 于丽管英俊高英茂孙秀宁
- 关键词：神经管
- 应用抑制性消减杂交技术筛选及鉴定高温致金黄地鼠神经管畸形下调表达基因
- 2007年
- 目的克隆高温致金黄地鼠神经管畸形下调表达基因，探讨其分子生物学机理。方法应用抑制性消减杂交技术构建高温致畸金黄地鼠胚胎神经管反向消减cDNA文库；联合蓝白斑和菌落PCR方法筛选阳性克隆进行测序和同源性分析；用Northern印迹方法证实这些基因的表达。结果成功构建高温致畸金黄地鼠胚胎神经管反向消减cDNA文库，从中筛选到15个基因，均与GenBank中已知基因有同源性。Northern印迹证实这些基因在高温致畸胚胎神经管中均呈下调表达。结论发现了高温致金黄地鼠神经管畸形过程中的一些重要相关基因并对其功能进行了初步探讨。
- 杨青高英茂李少玲
- 关键词：神经管畸形高温抑制性消减杂交金黄地鼠
- 高温致金黄地鼠神经管畸形的上调表达基因筛选及其鉴定
- 2007年
- 目的:筛选高温致金黄地鼠神经管畸形的上调表达基因,探讨其分子生物学机制。方法:通过抑制性消减杂交技术获得消减产物,转化大肠杆菌DH5α,构建高温致金黄地鼠胚胎神经管畸形的消减cDNA文库;联合蓝白斑和菌落PCR方法筛选含插入片段的阳性克隆,进行测序和同源性分析,并经Northern杂交技术检测基因的表达。结果:成功构建高温致金黄地鼠胚胎神经管畸形的消减cDNA文库,其中2个克隆插入片段的基因序列与小鼠磷酸甘油酸酯激酶(Pgk-1)同源。Northern杂交证实该基因在高温致畸胚胎神经管的表达较其在同龄正常胚胎神经管明显升高。结论:Pgk-1的上调表达可能与高温致神经管畸形密切相关。
- 杨青高英茂李少玲
- 关键词：神经管畸形高温抑制性消减杂交基因金黄地鼠
- 高温致畸金黄地鼠神经管cDNA文库的构建与鉴定被引量：1
- 2005年
- 目的:构建高温致畸金黄地鼠神经管cDNA文库.方法:在高温致神经管畸形动物模型上,提取高温致畸金黄地鼠胚胎神经管总RNA,用SMARTTM cDNA文库构建试剂盒反转录合成cDNA第1链,经LD-PCR合成全长双链cDNA,去除小于500bp的片断后与λTriplEx2噬菌体左、右臂连接,体外包装,构建成未扩增cDNA文库,再进行文库扩增.测定未扩增和扩增文库的滴度及重组率;随机挑取噬菌斑,经PCR扩增,电泳检测所构建cDNA文库的质量.结果:未扩增文库滴度为2.03×106pfu/ml,重组率为98.4%,文库扩增后滴度达2.503×109 pfu/ml,重组率为97.6%.插入片段长度分布于500～3000bp之间.结论:成功地构建了高质量的高温致畸金黄地鼠神经管cDNA文库.
- 张静高英茂李少玲王立言
- 关键词：神经管畸形高温CDNA文库金黄地鼠
- 金仓鼠神经管cDNA文库的建立被引量：2
- 2005年
- 目的 构建金仓鼠神经管cDNA文库,以筛选与神经管发育及神经管畸形发生相关的基因。 方法 用TRIZOLReagent提取金仓鼠神经管总RNA;用LD PCR法反转录合成双链cDNA;经蛋白酶K消化、SfiⅠ酶切、 CHROMASPIN 400柱分离去除小于500bp的片段;将cDNA与载体λTriplEX2按一定比例连接;经体外包装,建立 cDNA的噬菌体表达文库。 结果 cDNA文库容量为1.5×106pfu ml,重组率为99%,平均插入片段大于1kb。 结论 我们初步构建的金仓鼠神经管cDNA文库为高效的cDNA文库。
- 于丽管英俊高英茂李少玲
- 关键词：CDNA文库神经管金仓鼠
- RPL30基因的克隆及其与神经管发育相关关系的研究被引量：4
- 2006年
- 本文通过构建金黄地鼠神经管cDNA文库,筛选了RPL30基因,并探讨了其与神经管发育的关系。提取胚胎(E)8.5d的金黄地鼠神经管总RNA,用SMART技术构建神经管cDNA的噬菌体表达文库。利用分部分排除技术(SSS法),结合PCR法逐级筛选cDNA文库。将得到的RPL30阳性噬菌斑进行质粒转化、酶切鉴定及测序分析,进而回收、纯化RPL30cDNA片段并制备探针。用Northern杂交技术检测神经管发育过程中RPL30mRNA的表达状况。结果显示,构建的神经管cDNA文库容量为1.5×106pfu/ml,重组率达到99%,平均插入片段长度大于1kb。经过筛选得到含RPL30cDNA的阳性克隆。序列测定及同源性分析发现,该cDNA片段全长535bp,其中含有完整的开放阅读框。Northern杂交结果显示,在E8d^E12d各时间段,神经管中RPL30mRNA的表达均处于较高水平,且随着时间的增长,表达量递增,于E12d达到高峰。本文结果表明,我们用SSS技术结合PCR法从神经管cDNA文库中克隆到了RPL30基因的全长cDNA序列,该基因可能与神经管发育密切相关。
- 于丽管英俊高英茂李少玲
- 关键词：CDNA文库神经管
