上海市教育委员会重点学科基金(B204)
- 作品数：14 被引量：47H指数：4
- 相关作者：任兆瑞曾凡一颜景斌黄英周大文更多>>
- 相关机构：上海交通大学卫生部上海市儿童医院更多>>
- 发文基金：上海市教育委员会重点学科基金国家高技术研究发展计划国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学更多>>
- 多重连接探针扩增技术及其应用被引量：15
- 2009年
- 多重连接探针扩增是一种建立在PCR技术上的新型相对定量检测技术，该技术具有高效率、高分辨率、操作简便、设备要求低等诸多优势，目前已被广泛应用于基因片段缺失与重复、点突变及甲基化检测等相关疾病的分子生物学研究。其与基因芯片结合而建立的多重连接探针扩增微阵列芯片技术不但真正具备了高通量的检测能力，还使该技术的可靠性获得了很大的提高。本文就多重连接探针扩增的技术方法、应用进展及目前还存在的局限性作一综述。
- 周大文任兆瑞
- 关键词：毛细管电泳芯片
- 体细胞诱导为多能干细胞的最新进展被引量：3
- 2008年
- 2007年11-12月,Cell、Science和Nature发表一系列体外诱导人类体细胞转变为多能干细胞的论文。来自日本和美国的研究小组利用慢病毒载体分别将Oct-4、Sox2、C-Myc、Klf4和Oct-4、Sox2、Nanog、Lin28两套基因转入人成纤维细胞,均获得类似ES细胞的克隆。小鼠诱导性多能干细胞已初步用于镰刀细胞性贫血的基因治疗。短短一年半,诱导性多能干细胞的研究和关注度呈现了爆炸式成长;体细胞重编程、去分化、多能干细胞来源等一系列热点问题再次成为大众瞩目的中心。
- 周一叶曾凡一
- 关键词：多能干细胞重编程体细胞外源基因
- 应用生物信息学寻找山羊新的microRNA分子及其实验验证被引量：7
- 2008年
- microRNA(miRNA)是一类长约22个碱基的非编码RNA分子,在转录后水平调节基因的表达及其在细胞的增殖、分化、凋亡等过程中起着重要的调控作用。根据miRNA分子具有一定的保守性,文章将人、小鼠、牛、猪和狗5种哺乳动物已知的miRNA分子与NCBI公布的与山羊具有极高同源性的绵羊基因组序列对比,获得11条miRNA候选分子,然后通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)验证,发现在山羊脑组织中这11条分子均有表达,肝脏组织中有5条分子表达,初步确定为山羊新的miRNA分子,为寻找山羊miRNA提供了新的思路。
- 陈海漩严忠海龙健儿颜景斌黄英
- 关键词：MIRNA山羊生物信息学
- MLPA-微阵列技术在Y染色体异常检测中的初步应用
- 2008年
- 为了探讨MLPA-微阵列技术用于检测性染色体异常的可行性和精确性,针对Y染色体上的3个基因TSPY(p11.2)、PRY(q11)和RBMY(q11.2)设计MLPA探针,应用MLPA-微阵列技术对15例已知染色体核型的样品进行检测,将检测结果与各样品核型分析和PCR的检测结果进行对照和比较。结果表明,MLPA-微阵列技术对上述各基因位点的检测结果与样品染色体核型基本吻合,特别是对二例核型分析没有获得染色体结构异常信息的样品,MLPA-微阵列技术检测出Y染色体微小的缺失或指示某些未知染色体片段的信息,并与PCR检测结果完全相符。表明文章报道的MLPA-微阵列技术能够检测核型分析无法分辨的微小变化和异常,显示MLPA-微阵列技术在染色体异常分析中具有很高的检测效率和准确性,相对于染色体核型分析具有明显的优势,在临床染色体病诊断中具有较大的应用前景。
- 周大文管翌华许淼颜景斌黄英张敬之任兆瑞
- 关键词：MLPA微阵列染色体异常
- 流式细胞术检测人／山羊嵌合体中人源细胞方法的建立与应用
- 2009年
- 目的建立应用流式细胞术检测人／山羊嵌合体中人源细胞的方法。方法通过宫内移植的方法将标记有绿色荧光蛋白（GFP）的人造血干／祖细胞（MIG细胞）移植入胎山羊腹腔内，从而获得人／山羊嵌合体模型（MIG羊）。采集MIG羊的外周血，以数十种鼠抗人的抗体标记，筛选出对人源细胞特异性强而与山羊细胞无或仅有微弱交叉反应的抗体，列人流式细胞仪常规检测的首选抗体，继而在非移植山羊的外周血中加入不同比例（25％、50％、75％和100％）的人脐血细胞，用CD34^＋表面抗体标记来观察人脐血细胞和人CD34细胞的分布，以决定“门”的区域和大小；取MIG羊的肝脏，应用流式细胞术检测灌流后肝实质细胞中GFP细胞的比例及DNA含量。结果筛选出CD7、CD15、CD38、CD45、CD20、CD34、CD14和血型糖蛋白A（GPA）等8种单抗作为检测嵌合体中人源细胞的首选抗体；确定了进行流式细胞分析时“门”的大小和区域；MIG羊肝实质细胞中，GFP^＋细胞的比例为29．1％（29100／100000）；DNA含量测定结果显示MIG羊肝组织分选获得的GFP^＋细胞主要呈现2个峰，其位置与人的双峰位置相对应。结论流式细胞术是研究干细胞在体内分化、归巢和生物学特征的快速、简便、有效的方法；表面抗体以及“门”的选择对于准确检测人／山羊嵌合体中人源细胞至关重要。
- 王娟陈美珏巩芷娟任兆瑞曾凡一黄淑帧
- 关键词：流式细胞术造血干细胞移植嵌合体
- 遗传变异的又一来源:拷贝数变异被引量：3
- 2009年
- 人们很早就发现DNA拷贝数变异与特定染色体重组和基因组异常相关这一现象,但最近才知道它与疾病的相关联系。我们对拷贝数变异的原理、最新研究方法,及其与复杂疾病的相关性研究等进展进行了综述;总结了拷贝数变异研究所存在的问题;对拷贝数变异未来的研究重点和需要解决的问题进行了展望。
- 谭琪曾凡一
- 关键词：拷贝数变异微阵列比较基因组杂交复杂疾病
- 卵母细胞特异表达φC31整合酶载体pZP3-INT的构建及其在小鼠卵母细胞中的表达被引量：1
- 2009年
- 链霉菌噬菌体φC31整合酶是一种位点特异性重组酶(Site-specific recombinase,SSR),可介导链霉菌噬菌体attP位点(Phage attachment site)和链霉菌基因组attB位点(Bacterial attachment site)间的单向重组。为探讨它能否应用于卵母细胞特定基因的重组,文章采用卵巢针刺取卵法采集生发泡(GV)期小鼠卵母细胞,将卵透明带糖蛋白3(ZP3)启动子驱动的φC31整合酶表达载体pZP3-INT和检测φC31整合酶位点特异性重组功能的重组质粒载体pBCPB+,通过显微注射导入到小鼠卵母细胞中。培养48h后,RT-PCR检测φC31整合酶mRNA表达以及PCR检测pBCPB+载体发生重组的情况。结果表明:载体pZP3-INT在卵母细胞中表达φC31整合酶mRNA;并且pBCPB+载体发生了位点特异性重组,提示φC31整合酶在卵母细胞中可以介导位点特异性重组反应。
- 徐焕宇龚秀丽郭歆冰马睛雯曾溢滔
- 关键词：卵母细胞基因操作位点特异性重组
- 中国荷斯坦奶牛与鲁西黄牛线粒体DNA多态性和系统进化分析被引量：1
- 2008年
- 为阐明中国荷斯坦奶牛和鲁西黄牛的线粒体DNA多态性及其起源关系,提取了2个品种牛外周血液中的线粒体DNA(mtDNA),用PCR方法将牛mtDNA全长分为4段进行扩增,并用NlaⅢ、HpaⅡ、BglⅡ等16种限制性内切酶进行酶解消化,分析2个品种牛mtDNA的多态性,最终经7种限制性内切酶片段长度多态性分析,共归纳出4种主要的单倍型。通过对2个品种牛mtDNAD环全序列的聚类分析表明:鲁西黄牛和中国荷斯坦奶牛可能均为混合母系起源,源于欧洲普通牛和印度瘤牛。该研究结果对提高动物体外受精和体细胞核移植效率等生物技术平台有一定的理论指导意义。
- 邓卫平焦飞黄英
- 关键词：中国荷斯坦奶牛鲁西黄牛
- 应用反向PCR克隆慢病毒介导的转基因小鼠整合位点序列被引量：3
- 2008年
- 目的:为分析慢病毒介导的转基因小鼠中外源基因整合位点的信息,应用反向PCR克隆整合位点序列。方法:小鼠基因组总DNA酶解和自连接后,针对慢病毒载体的特点在LTR附近设计一组特异的PCR引物,优化半巢式PCR的各种参数,提高整合位点序列克隆的效率。结果:克隆了分别携带绿色荧光蛋白(GFP)和转铁蛋白(TF)基因的慢病毒介导的转基因小鼠家系7只小鼠中10个外源基因整合位点序列。结论:本方法可用于慢病毒介导的转基因小鼠整合位点序列的克隆,为分析整合位点与外源基因表达之间的关系等提供了科学依据。
- 张俊龚秀丽郭歆冰任兆瑞
- 关键词：反向PCR慢病毒载体整合位点
- 用KOSR优化山羊克隆胚的培养体系
- 2012年
- 体细胞核移植重构胚的体外培养一直是影响山羊克隆效率的一个重要因素,为了排除成分复杂的胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)对克隆重构胚发育的潜在抑制作用,本研究采用成分明确的血清替代品(knockout serum replacement,KOSR)进行山羊体细胞克隆重构胚胎的体外培养,并比较KOSR与FBS对重构胚的发育效率的影响。结果显示,KOSR组山羊重构胚培养体系的分裂率明显高于FBS组(80.67±0.63%.vs 49.02±4.85%,P<0.01),2组在重构胚重编程过程中的8细胞率具有显著差异(48.89±1.92%vs.28.59±3.13%,P<0.05);2组不同培养体系的受孕率也有明显不同(33.3%vs.10%,P<0.05)。研究结果表明,KOSR培养体系能有效提高山羊重构胚的发育效率,特别是有利于重构胚的早期重编程,为获得健康的转基因克隆山羊奠定了良好的基础。
- 陈威胡伟曹辉李凯王清泉蔡勤蔡琳琳刘宇习书斌李华陈美珏黄英黄淑帧曾凡一
- 关键词：重构胚重编程发育
