广东省自然科学基金(06022095)
- 作品数：5 被引量：15H指数：3
- 相关作者：王波胡兢晶周天鸿李月琴苏海浩更多>>
- 相关机构：广东省妇幼保健院暨南大学广州呼吸疾病研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金广州市教育局科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 临床低传代人巨细胞病毒株UL148开放阅读框mRNA的表达与鉴定被引量：14
- 2008年
- 目的研究广州地区人巨细胞病毒（HCMV）临床病毒株特有基因UL148的结构，分析其结构多态性与HCMV先天性感染致病的关系；研究UL148的表达情况，探讨其产物可能的功能及在致病机制中的可能作用。方法采集广州地区新生儿HCMV感染患者尿液标本进行病毒分离培养，从分离的病毒株中提取病毒DNA，扩增鉴定UL148基因片段；TA克隆，基因测序；抽提病毒总RNA，用RT-PCR方法鉴定UL148基因mRNA表达情况。结果成功分离到HCMV低传代临床株，获得UL148基因全序列。RT-PCR产物检测582bp大小的特异性条带，证实了UL148基因mRNA的表达。结论广州地区临床低传代HCMV分离病毒株存在UL148基因结构，证实UL148开放阅读框是具有mRNA水平表达的基因结构。
- 王波李月琴叶宁胡兢晶苏海浩何震宇周天鸿
- 关键词：巨细胞病毒RNA信使
- 电穿孔技术体外繁殖人巨细胞病毒
- 目的 体外快速繁殖人巨细胞病毒.方法 扩增UL82基因，酶切后连接至pcDNA载体，构建pcDNA-pp71质粒；重组质粒转化感受态宿主菌，克隆pcDNA-pp71质粒；抽提及鉴定重组质粒；培养HFF细胞，通过电穿孔技术...
- 谢斌华丁俊彩胡兢晶郭媛媛苏海浩王波
- 关键词：电穿孔人巨细胞病毒转染BAC
- 广州地区HCMV临床病毒株UL137基因的结构特征与多态性被引量：3
- 2008年
- 【目的】研究广州地区新生儿感染人巨细胞病毒(HCMV)临床低传代分离株UL137基因的结构特征与基因多态性。【方法】从62份被证实为临床HCMV感染的新生儿尿液标本中分离获得3株低传代临床病毒株,经多重PCR鉴定后分别命名为HCMVD2、D3和D52。对3株临床分离株进行HCMVUL137基因全序列PCR扩增,PCR产物纯化后进行基因克隆,构建HCMVUL137-pMD18-T重组质粒;基因测序;将HCMVUL137基因序列呈报GenBank,并进行基因生物信息学分析。【结果】成功从广州地区新生儿感染HCMV患儿体内分离3株HCMV临床病毒株。克隆测序后呈报GenBank并被收录,收录序列号分别为:DQ180388、DQ180376、DQ180360。通过序列分析,结果显示低传代分离株UL137基因DNA序列高度保守,同源性在96.91%～100%之间,其变异均为碱基替换;编码蛋白均由96个氨基酸残基组成,同源性在90.63%～100%之间,超半数的变异发生在第61～81位氨基酸残基之间;编码蛋白翻译后修饰位点包括PKS、MYS、cAMPs三类,其中4个PKS和44～49位的MYS高度保守,cAMPs位点仅在5株病毒出现;编码蛋白等电点在11.50～12.00之间,呈强碱性。【结论】广州地区临床低传代分离株HCMVUL137基因核苷酸序列及其编码蛋白的氨基酸序列极为保守,但仍存在一定多态性。提示HCMVUL137ORF可能是一个具有重要功能的基因。
- 王波李月琴胡兢晶苏海浩何震宇田传军张纯青叶铁真周天鸿
- 关键词：人巨细胞病毒基因序列基因多态性
- 广州地区人巨细胞病毒临床低传代株UL136基因的序列特征及多态性被引量：4
- 2009年
- 目的研究广州地区新生儿感染人巨细胞病毒（HCMV）临床低传代株UL136基因的序列特征与基因多态性。方法从10例广州感染新生儿体内分离获得2株（D2、D3）临床HCMV分离株，经多重PCR鉴定后进行UL136基斟全序列扩增。PCR产物纯化后进行基因克隆，构建HCMVUL136-pMD18-T重组质粒。经基冈测序及应用生物信息学分析方法，分析其核酸序列稳定性、编码蛋白质的二级结构与特衙。结果成功分离2株HCMV临床分离株，测序结果显示，D2、1）3及与GenBank中公布的11株临床分离株（4J、51C、39J、33J、63J、22M、10J、32C、29C、27C、Toledo）中，UL136序列高度保守。同源性分析显示在UL136全基因序列1019个核苷酸中，存在30个位点变异，所有的变异均为碱基替换，无插入及缺失突变。编码蛋白的氨基酸序列也高度保守，240个氨基酸残基巾，不同临床分离株氨基酸变异率为1．6％～3．7％。不同分离株的UL136蛋白巾参与形成二级结构的氨基酸数目及等电点不同。进化树分析结果显示D2和D3均属于1a群。结论广州地区临床低传代分离株HCMVUL136基因核苷酸序列及其氨基酸序列极为保守，但仍存在一定多念性。其基因的稳定性提示HCMVUL136开放阅读框（ORF）可能是一个具有重要功能的基因。其编码后修饰位点提示UL136可能与膜受体介导的细胞信号转导通路有关。
- 王波李月琴胡兢晶苏海浩丁俊彩田传军张纯青周天鸿
- 关键词：巨细胞病毒多态性单核苷酸基因生物信息学
- 广州地区HCMV低传代临床病毒株UL143基因的多态性研究(英文)被引量：1
- 2008年
- 目的研究广州地区人巨细胞病毒(HCMV)临床低传代分离株UL143基因的多态性。方法对3株经多重PCR鉴定的HCMV临床低传代分离株进行HCMVUL143基因全序列扩增,扩增产物克隆到pMD18-T载体上测序,并将其序列与GenBank中公布的其它临床分离株UL143基因一起进行分析。结果D3株UL143基因因碱基缺失形成多处终止密码无法产生有功能的蛋白;Toledo株UL143基因开放读码框由279个核苷酸组成,编码蛋白由92个氨基酸残基组成;其它临床分离株UL143基因开放读码框均由252个核苷酸组成,DNA序列比较保守,变异均为碱基替换,编码蛋白由83个氨基酸残基组成,氨基酸序列也很保守,不同临床分离株氨基酸变异率为1.2%～2.4%;HCMVUL143蛋白翻译后修饰位点在除Toledo株之外的所有分离株中均高度保守,没有缺失或新增;不同临床分离株UL143蛋白二级结构有所不同;除Toledo株外,其余分离株UL143蛋白的等电点均为8.75。结论临床低传代分离株HCMVUL143基因DNA及其编码产物的氨基酸序列极为保守,但仍存在一定多态性。
- 王波李月琴叶宁胡兢晶苏海浩何震宇田传军张纯青周天鸿
- 关键词：HCMV基因序列多态性
- 广州地区HCMV临床病毒株UL144 ORF的序列变异研究被引量：1
- 2008年
- 目的研究广州地区先天性感染的人巨细胞病毒（HCMV）临床低传代分离病毒株UL144基因序列的多态性，探讨UL144基因在HCMV致病中的作用。方法对3株经多重PCR鉴定HCMVDNA为阳性的临床低传代分离株进行HCMVuL144基因全序列PCR扩增，PCR产物克隆到pMD18-T载体上再测序，将其序列与GenBank中公布的其它10株临床分离株uL144基因一起进行分析。结果本实验克隆并测序了HCMV临床低传代D3、D2和D52病毒株的UL144基因，提交GenBank，已被GenBank收录，序列号分别为DO180368、DQ180382和DQ180355。HCMV临床低传代D3、D2和D52病毒株的UL144基因均全长531bp。通过blast分析，从GenBank中找到了10株HCMV病毒株的UL144与D3、D2和D52的UL144基因具有较高的同源性，经过序列的比对，发现UL144基因DNA序列比较保守，只在4处有变异，且变异均为碱基替换，无插入或缺失，编码蛋白由176个氨基酸残基组成，氨基酸序列也比较保守，各分离株中变异率为1．1％；HCMVUL144编码蛋白翻译后修饰位点在所有分离株中均高度保守：所有分离株UL144蛋白的等电点均为8．97。结论广州地区临床低传代分离株HCMVUL144基因DNA及其编码产物的氨基酸序列是比较保守的，但仍存在一定的多态性。提示UL144基因在先天性感染中可能具有重要作用。
- 王波李月琴叶宁胡兢晶何震宇田传军张纯青叶铁真周天鸿
- 关键词：HCMV基因序列基因变异致病
