上海市科委重大科技攻关项目(05DZ19309)
- 作品数：3 被引量：5H指数：1
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- 相关机构：西南大学上海市肺科医院同济大学附属肺科医院更多>>
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- VEGF DNA疫苗注射部位对小鼠抗原表达与Th细胞活性的影响
- 2008年
- 目的探讨小鼠不同部位皮下注射VEGF DNA疫苗对抗原表达与Th细胞活性的影响,为DNA疫苗在体内获得良好的细胞免疫提供优化条件。方法用RT-PCR法从A459细胞株中扩增570 bp的VEGF片段,此片段构建成真核表达重组质粒pVAX1-VEGF;在小鼠耳廓、胸部、腹部及背部皮下注射1μg/μl的pVAX1-VEGF DNA100μl,ELISA法检测血清中VEGF抗原表达水平和脾细胞产生的IL-4及IFN-γ动态变化。结果小鼠耳廓、胸部及腹部免疫,VEGF抗原表达较强,其中耳廓免疫所激活的Th1细胞最强,产生524.2 pg/ml IFN-γ,与胸部、腹部及背部免疫的效果相比,差异显著;pVAX1-VEGF疫苗组与pVAX1对照组的Th1与Th2细胞活性差异均显著,不同部位的pVAX1-VEGF疫苗组对Th2细胞活性无明显影响。结论本研究所构建人源VEGF的DNA疫苗能在小鼠体内有效表达,且不同部位皮下免疫后均可激活Th细胞,但以Th1细胞效应为主和耳廓皮下接种最佳。
- 王和勇向阳唐亮谈立松周彩存
- 关键词：皮下注射DNA疫苗抗原表达TH细胞小鼠
- 不同部位皮下注射DNA疫苗对小鼠体液免疫的影响被引量：4
- 2008年
- 主要探讨在小鼠不同部位皮下注射DNA疫苗对体液免疫应答的影响,为DNA疫苗在体内获得高滴度抗体提供优化条件.用RT-PCR从人肺癌细胞株A459中克隆VEGF片段,并插入pVAX1质粒构建pVAX1-VEGF真核表达质粒;在耳廓、胸部、腹部、尾跟部、背部及足垫的皮下注射1μg/μL pVAX1-VEGF疫苗DNA 100μL,ELISA法检测血清中VEGF抗原表达及其IgG抗体分布,测定血清中IgG2a和IgG1两亚型水平.实验结果发现:耳廓、胸部、腹部免疫产生的VEGF抗原较快,其中耳廓免疫产生的体液免疫最快最强,与胸部、腹部、背部、尾根及足垫免疫产生的体液免疫反应相比,具有统计学意义,同时pVAX1-VEGF疫苗组与pVAX1对照组的体液免疫差异显著,但pVAX1-VEGF疫苗组主要产生IgG2a型抗体.上述结果表明:所构建人VEGF的DNA疫苗能在小鼠体内有效表达,不同部位皮下免疫后均能产生抗VEGF的IgG抗体,以IgG2a抗体为主;但就抗原表达、抗体及IgG2a而言,以耳廓皮下接种最佳.
- 王和勇向阳唐亮孙敏
- 关键词：皮下注射DNA疫苗体液免疫
- 环氧合酶2的DNA疫苗构建及其在COS-7细胞中表达被引量：1
- 2008年
- 构建了环氧合酶-2(Cyclooxygenase-2,COX-2)的DNA疫苗载体pVAX1-COX-2,并考察在COS-7细胞中表达.用RT-PCR法从肺癌A549细胞中获得环氧合酶-2基因片段,此片段插入pVAX1载体构建pVAX1-COX-2真核重组表达质粒,脂质体介导法转染COS-7细胞,以pVAX1为对照,收集稳定转染细胞,利用RT-PCR和West-ern-blot分别在mRNA和蛋白水平上考察COX-2表达.实验结果表明:RT-PCR法从A549细胞mRNA中扩增1.8 kb的COX-2基因片段,酶切与测序结果表明所构建的真核表达载体pVAX1-COX-2与预期相符,质脂体法成功地将质粒DNA转染到COS-7细胞中.RT-PCR和Western-blot分析结果表明COX-2已表达.因此,所构建的真核表达载体pVAX1-COX-2正确,且在COS-7细胞中表达.
- 罗恒王和勇向阳唐亮谈立松周彩存孙敏
- 关键词：环氧合酶-2DNA疫苗真核表达
