国家高技术研究发展计划(2003AA2Z2091)
- 作品数：4 被引量：28H指数：3
- 相关作者：吴建祥周雪平洪健叶美琴李燕宏更多>>
- 相关机构：浙江大学丽水市农业局浙江省丽水市农业局更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划浙江省科技厅资助项目浙江省科技厅项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 单抗免疫斑点法和组织印迹法检测百合无症病毒被引量：13
- 2006年
- 应用抗百合无症病毒(Lilysymptomlessvirus,LSV)的单克隆抗体,建立了快速检测田间样品的免疫斑点法(Dot-ELISA)和组织印迹法(Tissueblot-ELISA)体系。LSV单抗稀释2,000倍时,Dot-ELISA中病叶粗汁液可被检出的最大稀释度为1∶640。Tissueblot-ELISA中样品一次平切后第1次印迹与Dot-ELISA样品1∶40稀释的结果相当,前4次印迹均可获得满意的显色效果。常规Tissueblot-ELISA的灵敏度低于Dot-ELISA,但用丙酮处理点过样的硝酸纤维素膜后,二者的灵敏度相当,且Tissueblot-ELISA操作更简便,适合田间大量样品的快速检测。
- 李燕宏吴建祥洪健周雪平叶美琴
- 关键词：百合无症病毒单克隆抗体免疫斑点法
- 单抗I-ELISA和TAS-ELISA检测百合无症病毒的研究被引量：7
- 2006年
- 以抗百合无症病毒(Lily symptom less virus,LSV)的单克隆抗体为核心,建立了间接ELISA(I-ELISA)和三抗体夹心ELISA(TAS-ELISA)的检测方法。I-ELISA检测体系中,病叶汁液和单克隆抗体腹水的工作浓度分别为1∶20和1∶6 000,对病叶汁液的检测灵敏度达到了1∶2 560,可检测到提纯病毒绝对量为1.35 ng。TAS-ELISA检测体系中捕获抗体和单克隆抗体腹水的工作浓度分别为1∶200和1∶6 000,检测病叶汁液的灵敏度达到了1∶5 120,对于提纯病毒可检测到0.68 ng。使用美国Agd ia公司双抗体夹心ELISA(DAS-ELISA)检测试剂盒对病叶汁液的检测灵敏度为1∶2 560,提纯病毒检出量1.35 ng。用3种ELISA方法检测了采自浙江省丽水市的46个田间样品,I-ELISA、TAS-ELISA和DAS-ELISA测出的阳性样品数分别为19、21和18个,阳性率为41%、46%和39%。灵敏度检测和田间样品检测结果显示,TAS-ELISA的灵敏度高于DAS-ELISA和I-ELISA。相同样品I-ELISA所测出的OD405值和P/N值普遍高于DAS-ELISA,表明LSV单抗比多抗具有更强的特异性和更高的灵敏度。
- 刘成科吴建祥洪健周雪平叶美琴
- 关键词：百合无症病毒TAS-ELISADAS-ELISA
- 马铃薯X病毒云南分离物单克隆抗体的制备及其检测应用被引量：6
- 2005年
- 用马铃薯X病毒(Potato virusX,PVX)免疫的BALB/C鼠脾细胞与SP2/0鼠骨髓瘤细胞融合,经筛选克隆,获得2株能稳定传代并分泌抗PVX单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞2B12和4E7,并分别制备它们的单抗腹水.2株单克隆抗体腹水间接ELISA效价在10-6以上,2B12和4E7的抗体类型及亚类均为IgG1,轻链均为κ链.利用这些单克隆抗体建立了抗原包被的间接ELISA(ACP-ELISA)检测PVX的方法.病叶经1∶600倍稀释、提纯PVX病毒浓度为2 ng/mL(每孔的病毒绝对量为0.2 ng)时,该方法仍能检测到病毒.利用ACP-ELISA方法测定了田间样品,发现PVX在马铃薯上发病很普遍.
- 吴建祥周雪平
- 关键词：马铃薯X病毒单克隆抗体
- 香石竹斑驳病毒单克隆抗体的制备及检测应用被引量：3
- 2005年
- 用香石竹斑驳病毒(CarMV)免疫的BALB/c鼠脾细胞与Sp2/0鼠骨髓瘤细胞融合,经筛选克隆,获得5株能稳定传代且分泌抗CarMV单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞,并分别制备它们的单克隆抗体腹水。5株单克隆抗体腹水间接ELISA效价达10-6,其中3G1、1B9、2A9和2F8的抗体类型及亚类均为IgG1,而2F2为IgG3。W estern-b lot分析表明,5株单克隆抗体均与CarMV 38 kD的外壳蛋白亚基有特异性反应。利用2A9单抗建立的抗原包被的间接ELISA(ACP-ELISA)检测CarMV方法,病叶1∶800倍稀释、提纯CarMV病毒浓度为1 ng/mL(绝对检测量为0.1 ng)时仍能检测到病毒。利用ACP-ELISA对田间香石竹样品的检测表明,CarMV在香石竹上发病很普遍。
- 吴建祥王贵珍洪健张仲凯周雪平
- 关键词：香石竹斑驳病毒单克隆抗体
