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排序方式：

用弱化dhfr双顺反子载体在CHO细胞中高效表达低分子量尿激酶突变体被引量：1: 2006年; 将二氢叶酸还原酶基因（dhfr）克隆至pIRES载体中弱化的脑心肌炎病毒（ECMV）内部核糖体进入位点（IRES）的下游，构建了含有弱化dhfr筛选标记和可用氨甲蝶呤（MTX）加压提高表达水平的双顺反子真核表达载体pIRES—dhfr。利用该表达载体表达了一种无糖基化和具有凝血酶抗性的低分子量尿激酶型纤溶酶原激活剂（LMW—uPA）突变体（缺失尿激酶原的1—143位氨基酸，Arg156→Lys，Asn302→Ala），用脂质体转染方法将表达载体pIRES—dhfr／LMW—UK转染CHO—dhfr-细胞后经过一轮MTX筛选，几乎所有获得的单克隆细胞株都表达LMW—UK，其中约50％为表达水平较接近（500—5000IU／10^6cells／d）的高表达阳性克隆。用转瓶无血清培养表达水平约为17．5pg／cell／d的rCHO细胞系LB2-UK，收集的上清经过阳离子交换柱和凝胶过滤层析两步纯化后，获得的重组蛋白的纯度可以达到99％。用S-2444发色底物法检测，所获得的突变体双链UK比例大于98％。; 潘淑媛高丽华胡显文杨波殷亮胥照平张正光郗永义陈惠鹏; 关键词：突变体内部核糖体进入位点重组CHO细胞

重组人组织型纤溶酶原激活剂及其突变体的溶血栓研究被引量：1: 2003年; 目的比较重组人组织型纤溶酶原激活剂(rht-PA)及其突变体FsGGI和FrGGI的溶血栓作用,验证突变体的构建思想。方法采用兔颈静脉溶栓模型和体外溶栓试验对纯化的rht-PA及其突变体FsGGI和FrGGI进行家兔体内外溶栓研究。结果 rht-PA、FsGGI及FrGGI三者均有体内外溶栓作用,体外溶栓能力基本相似;体内溶栓活力突变体FsGGI与FrGGI类似,均显著高于rht-PA,溶栓度分别为20.1％、49.1％和46.6％。在体内溶栓作用的同时均未引起血浆纤维蛋白原滴度下降。结论溶栓作用是血栓特异性的,两种突变体是优于野生型t-PA的溶栓剂,上游的构建思想是正确的。; 朱恒奇徐秀英陈琳黄培堂; 关键词：组织型纤溶酶原激活剂突变体血浆

化学修饰对组织型纤溶酶原激活剂的纤溶活性和体内半衰期的影响被引量：7: 2003年; 用肝素、右旋糖酐和聚乙二醇对重组组织型纤溶酶原激活剂(rt-PA)进行化学修饰。不同的化学修饰物对rt-PA体外纤维蛋白溶解活性的影响不同。肝素修饰rt-PA的纤维蛋白溶解活性提高63％;右旋糖酐和聚乙二醇修饰rt-PA的纤维蛋白溶解活性则分别降低了36％和63％。rt-PA经化学修饰后半衰期均有所延长,其中聚乙醇修饰的rt-PA的半衰期由修饰前的3.4 min延长至6.3 min。; 吴本传刘红陈昭烈黄培堂; 关键词：重组组织型纤溶酶原激活剂化学修饰纤维蛋白溶解活性半衰期

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国家高技术研究发展计划(Z18-03-12)