安徽省高校省级自然科学研究项目(KJ2011A205)
- 作品数：9 被引量：20H指数：3
- 相关作者：钟政荣徐云侠沈继龙丁淑琴罗庆礼更多>>
- 相关机构：蚌埠医学院第二附属医院安徽医科大学蚌埠医学院第一附属医院更多>>
- 发文基金：安徽省高校省级自然科学研究项目安徽省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 日本血吸虫果糖二磷酸醛缩酶的重组表达及其在血吸虫生活史各阶段的表达分析
- 2015年
- 目的在大肠杆菌中原核表达、纯化日本血吸虫果糖二磷酸醛缩酶(rSjFBPA),观察其在血吸虫生活史各阶段的表达。方法以日本血吸虫成虫c DNA为模板扩增rSjFBPA基因,克隆至pET28a(+)质粒后,再转化入E.coli BL21。含重组质粒的菌株经IPTG诱导后,采用SDS-PAGE和Western blotting分析鉴定重组蛋白rSjFBPA是否表达,用层析法纯化rSjFBPA并用SDS-PAGE鉴定其纯度。同时,用RT-PCR方法分析SjFBPA在血吸虫尾蚴、童虫、成虫和虫卵各阶段的表达情况。结果经PCR扩增出目的基因,含目的基因的TA克隆质粒经双酶切和测序鉴定,证明插入片段与预期目的基因序列相符。Western blotting结果显示,表达后的重组蛋白可与His-tag单克隆抗体发生特异性反应。经镍亲和层析法制备了纯化的重组SjFBPA蛋白,纯化重组蛋白浓度达4 mg/ml。RT-PCR结果显示,SjFBPA在日本血吸虫尾蚴、童虫、成虫和虫卵阶段均有表达。结论 SjFBPA基因被成功克隆和表达,其在日本血吸虫尾蚴、童虫、成虫和虫卵各阶段均有表达。
- 闫珂钟政荣徐云侠丁淑琴胡建国徐元宏罗庆礼沈继龙
- 关键词：日本血吸虫克隆纯化
- 乙型肝炎患者血清乙型肝炎病毒-DNA与常用血清标志物的相关性分析被引量：7
- 2015年
- 目的:评估乙型肝炎(乙肝)患者血清乙肝病毒DNA(HBV-DNA)载量与血清免疫和生化标志物之间的关系。方法:收集214例乙肝患者血清,分别用荧光定量PCR法、化学发光法和速率法检测血清中的HBV-DNA、乙肝病毒表面抗原(HBs Ag)、乙肝病毒e抗原(HBe Ag)和丙氨酸氨基转移酶(ALT),分析各标志物之间的关系。结果:214例中,HBV-DNA阳性率为57.48%;HBe Ag阳性率为28.04%。HBV-DNA载量与HBs Ag和ALT水平均无相关关系(P>0.05),但与HBe Ag水平密切相关(P<0.01),HBV-DNA阳性组的HBe Ag和ALT水平均明显高于HBV-DNA阴性组(P<0.01)。结论:HBV-DNA载量与HBe Ag水平呈正相关关系,与HBs Ag和ALT水平无相关性,HBs Ag水平作为HBV-DNA的替代方法仍需进一步验证。
- 钟政荣徐云侠丁淑琴张伦军丁晓琳胡建国
- 关键词：乙型肝炎病毒乙肝表面抗原乙肝E抗原荧光定量PCR
- 血吸虫蛋白组学研究进展
- 2011年
- 血吸虫病是热带和亚热带地区主要的寄生虫病之一[1],目前全球大约有2亿人感染,每年死亡人数超过28万。由于血吸虫能够在宿主血管内生活数十年,血吸虫明显能够逃逸宿主的免疫反应。因此,血吸虫病已成为寄生虫乃至免疫学领域的研究热点,然而目前对血吸虫参与宿主免疫调节的分子机制认识仍然有限。
- 钟政荣沈继龙
- 关键词：蛋白质组学
- 高浓度D-二聚体检测时稀释倍数的探讨被引量：4
- 2013年
- 目的:分析高浓度D-二聚体(D-D)血浆稀释8倍时的错误结果,探讨高浓度D-D血浆检测时的最适稀释倍数。方法:将D-D标准血浆稀释成连续的6个稀释度进行标准曲线的制备,再将D-D标准血浆和高浓度血浆分别在机内和机外稀释2倍、4倍、8倍,再在定标后的血凝仪上进行检测,D-D报告结果机内模式仪器自动乘以稀释倍数,机外需人工乘以稀释倍数换算,最后比较机内和机外2种稀释模式的结果差异以及各稀释倍数与原液的结果差异。结果:D-D标准曲线呈一"S"型曲线。机内8倍稀释与机外2倍稀释后的D-D结果差异均有统计学意义(P<0.01),但2倍稀释与原液结果差异无统计学意义(P>0.05),2种稀释模式下相同稀释度之间的结果差异亦均无统计学意义(P>0.05)。结论:高浓度D-D血浆稀释倍数愈大,结果差异愈明显,选择能够检出的最小稀释倍数是高浓度D-D检验结果的质量保证。
- 钟政荣徐云侠田万林宫继勇刘蕴霞张伦军
- 关键词：D-二聚体
- 蚌埠地区乙型肝炎病毒基因分型及临床意义被引量：3
- 2014年
- 目的了解蚌埠地区乙型肝炎患者的病毒(HBV)基因型分布情况,并探讨其临床意义。方法选择在我院就诊的乙型肝炎患者268例,采用荧光定量PCR测定乙肝患者的病毒载量并进行基因分型,同时分析基因型与患者年龄及HBeAg的关系。结果 268份血清标本中有202株为C基因型,占75.37%(202/268),46株为B基因型,20株为B+C型;C基因型的病毒载量和HBeAg阳性率明显高于其他基因型,B基因型感染者的年龄相对较轻。结论蚌埠地区的乙型肝炎患者基因型以C型为主,B基因型次之,基因型与乙肝患者HBeAg阳性率、年龄等临床指标有一定的相关性。
- 丁晓琳张伦军丁淑琴朱安友钟政荣沈继龙
- 关键词：乙型肝炎病毒基因型乙型肝炎
- 日本血吸虫亮氨酸氨基肽酶的原核表达及纯化
- 2013年
- 目的原核表达并纯化日本血吸虫亮氨酸氨基肽酶(Leucine aminopeptidase of Schistosoma japonicum,SjLAP)。方法从日本血吸虫成虫中RT-PCR扩增LAP基因,克隆至原核表达载体pET-28a中,转化感受态E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达的重组SjLAP蛋白(rSjLAP)经SDS-PAGE和Western blot分析后,经His Binding Purification Kit层析纯化,纯化的rSjLAP蛋白经SDS-PAGE分析纯度,Bradford法测定浓度。结果克隆的SjLAP基因与GenBank中登录的基因序列比较有2个碱基发生置换,导致对应的2个氨基酸发生置换,但均不在关键区域;重组表达质粒pET-28a/SjLAP经双酶切鉴定证实构建正确;表达的rSjLAP蛋白相对分子质量约45 000,诱导4 h表达量最高;纯化的rSjLAP蛋白纯度较高,浓度达5.0 mg/ml,并可被抗小鼠His-tag单抗及血吸虫感染的患者血清和兔血清特异性识别,具有良好的反应原性。结论成功在大肠杆菌中表达了rSjLAP蛋白,纯化的rSjLAP纯度较高,为血吸虫病的诊断和预防等研究奠定了基础。
- 钟政荣徐云侠宫继勇田万林郭普李小月罗庆礼沈继龙
- 关键词：亮氨酸氨基肽酶原核细胞基因表达
- 压迫时间与压疮发生关系的实验研究被引量：4
- 2015年
- 目的:观察压迫不同时间后大鼠受压部位的皮肤形态及组织病理损伤情况。方法:将48只SD雄性大鼠分成6组,每组8只,对照组(A组)未压迫,其余5组分别对大鼠下肢关节压迫1 h(B组)、2 h(C组)、3 h(D组)、4 h(E组)和6 h(F组),每组间隔时间与压迫时间相同,总时间24 h,观察压迫后受压部位的皮肤和组织病理变化。结果:B、C、D、E、F组受压部位皮肤发红的大鼠分别有1、2、5、8和8只,D、E和F组大鼠受压部位皮肤发红数均明显多于A组(P<0.01)。压迫时间超过2 h组真皮内血管充血明显,皮肤逐渐变薄、水肿,甚至剥脱;F组同时出现中性粒细胞和肥大细胞浸润。结论:压迫时间超过2 h,大鼠受压部位皮肤和组织明显受损,随受压时间延长,皮肤受损更加严重。
- 徐云侠胡守紫钟政荣刘玉芳王银娥
- 关键词：压疮SD大鼠
- 日本血吸虫无机焦磷酸酶的克隆表达及蛋白特征分析
- 2013年
- 目的克隆并原核表达日本血吸虫无机焦磷酸酶(SjIPP),分析SjIPP的蛋白特征。方法以日本血吸虫成虫cDNA为模板,克隆SjIPP,重组入pET28a质粒,并将重组质粒转化入E.coli BL21,用SDS-PAGE和Western blot法鉴定重组蛋白的表达和特异性,进一步分析SjIPP的蛋白特征和同源性。结果克隆和表达出的SjIPP均与预测的分子量大小一致,Western blot法结果显示,重组蛋白可被小鼠抗His-tag单克隆抗体特异性识别。生物信息学分析表明,SjIPP为胞内蛋白,含有多个磷酸化位点,B细胞表位丰富,且与人和小鼠的IPP高度同源。结论成功克隆表达出SjIPP,为进一步利用SjIPP奠定基础。
- 曹红荣徐云侠丁淑琴钟政荣罗庆礼沈继龙
- 关键词：日本血吸虫克隆
- 高纯度日本血吸虫卵的分离及活性鉴定被引量：2
- 2012年
- 目的探讨制备高纯度、高生物活性的的日本血吸虫卵分离方法。方法将匀浆后的血吸虫感染的兔肝组织悬液分级过滤,再将滤液离心,去除组织碎片,分离的虫卵再次经过325目分样筛过滤,收集筛上虫卵,最后将收集的虫卵用密度1.070的Percoll分离液梯度离心,吸取下层Percoll液中的纯化虫卵;显微镜观察分离虫卵的纯度,吖啶橙染色观察虫卵的死活,环卵沉淀试验鉴定虫卵的分泌活性。结果每个肝脏获得约1g左右的虫卵,分离的虫卵纯度高,吖啶橙染色和环卵沉淀试验结果显示,分离的活虫卵比例高、生物活性好。结论该虫卵分离方法操作简单、用时短、效果好,分离的虫卵完全满足各种研究的需要。
- 钟政荣徐云侠宫继勇罗庆礼闻慧琴宋晓蓉沈继龙
- 关键词：日本血吸虫虫卵纯化
